Page 71 - 《中国药房》2022年10期

SC 发生了荧光淬灭，表明 DAZ 与 SC 之间具有相互作 结合位点数，[C]为 DAZ 质量浓度。由方程线性拟合得
用。此外，随着DAZ质量浓度增加，SC的最大发射波长 到 Kb和 n 的值列于表 2。DAZ 与 SC 的 Kb均大于 1×10 6
逐步红移，提示 DAZ 可能还影响到 SC 的氨基酸残基微 L/mol，这意味着它们之间存在较为强烈的相互作用。
环境。 此外，Kb和n值随温度升高而减小，这佐证了DAZ对SC
[17]
为静态淬灭 。
a
500 表2 DAZ与SC的结合位点和结合常数
双对数方程
400 温度/K Kb/（L/mol）
lgKb n r
291 7.372 0 1.55 0.995 9 5.78×10 6
300
强度 298 6.711 2 1.44 0.997 3 5.17×10 6
200 303 5.782 1 1.42 0.998 5 5.03×10 6
DAZ与SC之间的作用力类型可通过相互作用的热
100
力学参数来判断，按下列公式可得到焓变（ΔH）、熵变
i ΔH ΔS
0 （ΔS）和吉布斯自由能变（ΔG）值：lnKc＝－ + ，
320 340 360 380 400 RT R
波长/nm
A. SC的荧光光谱 ΔG＝－RTlnKc。式中，Kc为 T 时的结合常数，R＝8.314
J/（mol·K）。结果显示，ΔG＜0，说明 DAZ 对 SC 的淬灭
1.25 303 K
298 K 可自发进行；ΔH 值为负，表明反应过程放热；ΔS＜0，说
1.20 291 K 明反应后体系的混乱度减小 。结果见表3。
[18]
累积溶出率/％ 1.15 温度/K 表3 DAZ与SC相互作用的热力学参数

ΔS/[J/（mol·K）]
ΔG/（kJ/mol）
ΔH/（kJ/mol）
1.10
291
－42.61
298 －117.10 －255.98 －40.56
1.05 303 －39.54
2.5.2 圆二色光谱分析 将1 mL SC水溶液（1 mg/mL）
1.00
0 10 20 30 40 和20 mL DAZ乙醇溶液（50 µg/mL）混合，测定此混合溶
浓度/（×10 －6 mol/L）
B. 3种温度下的Stern-Volmer拟合曲线 液及 SC 水溶液（1 mg/mL）的圆二色光谱。测定波长范
图8 DAZ对SC荧光光谱的影响 围为 190～260 nm，步长为 0.1 nm，带宽为 2 nm，扫描速
度为 100 nm/min。以无水乙醇作为参比，取 3 次扫描平
DAZ 对 SC 的淬灭机制可通过 Stern-Volmer 方程进
均数值，结果见图9。相比于SC，DAZ-SC复合纳米粒在
F0
行分析 ： ＝1+KSV[Q]＝1+kqτ 0。式中，F和F0是有无淬 208 nm 处的特征峰值减小，说明α-螺旋的含量降低 ，
[19]
[14]
F
表明DAZ对SC的二级结构存在影响。采用CONTIN方
灭 剂 时 SC 的 荧 光 强 度 ，[Q] 是 淬 灭 剂 浓 度 ，KSV 是
程和CDNN软件并结合圆二色光谱数据，可计算得到样
Stern-Volmer 淬灭常数，kq是淬灭过程的速率常数，τ 0＝
品中不同二级构象的含量，结果见表 4。由表 4 可知，
10 －8 s（生物大分子的平均寿命）。KSV和kq可由方程线性 DAZ-SC 复合纳米粒中α-螺旋和无规卷曲含量降低，β-
拟合得到，3 个温度下的拟合曲线见图 8B，KSV与 kq的值
折叠含量上升。
见表 1。由上述图表可知，在各个温度下曲线的线性关
系良好（r＞0.999），kq均大于2.0×10 L/（mol·s）（最大扩 60 SC
10
散碰撞速率常数） ，且其值随着温度升高而减小，证明 30 DAZ-SC复合纳米粒
[15]
SC的淬灭机制为静态淬灭，即SC与DAZ形成了基态复
[16]
合物 。 椭圆度/毫度 0 200 210 220 230 240 250 260
表1 SC在3种温度下的Stern-Volmer方程和淬灭常数 －30 波长/nm
Stern-Volmer 方程
温度/K kq/[L/（mol·s）] KSV/（L/mol） －60
斜率 截距 r
291 0.059 1.019 0 0.999 8 1.1×10 13 5.9×10 4 －90
298 0.054 0.703 9 0.999 4 9.0×10 12 5.5×10 4
303 0.053 0.705 9 0.999 7 8.8×10 12 5.3×10 4 图9 SC和DAZ-SC复合纳米粒的圆二色光谱图
按以下公式计算SC形成复合物时的结合位点与结
表4 SC与DAZ-SC复合纳米粒的圆二色光谱解析
合常数 ：lg F1－F2 ＝lgKb+nlg[C]。式中，F2和F1是DAZ 样品 α-螺旋含量/％ β-折叠含量/％ β-转角含量/％ 无规则卷曲含量/％
[17]
F2 SC 18.36 32.32 16.41 32.91
存在与否时 SC 的荧光强度，Kb为蛋白的结合常数，n 是 DAZ-SC复合纳米粒 14.79 40.54 16.19 28.48

中国药房 2022年第33卷第10期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10 ·1217 ·