Page 75 - 《中国药房》2022年10期
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黄素-7″-O-β-D-吡喃葡糖苷和异银杏黄素-7″-O-β-D-吡                 内 酯 2.4 mg。 穗 花 杉 双 黄 酮 对 照 品（批 号 111902-
        喃葡糖苷    [2－3] 。有研究表明，双黄酮类成分有抗氧化、抗                  201603，纯度97.7％）购自中国食品药品检定研究院；金
        炎、抗病毒、抗肿瘤等生物活性             [4－10] 。然而，近年来有部        松双黄酮对照品（批号 P20N10F103774，纯度 99.4％）、
        分学者关注到银杏双黄酮类成分的毒性，比如穗花杉双                           银杏双黄酮对照品（批号 P09N8F47765，纯度 98.4％）、
                        [11]
        黄酮是酶强抑制剂 ，银杏叶中双黄酮具有潜在的肝毒                           异 银 杏 双 黄 酮 对 照 品（批 号 Y10N8Y47776，纯 度
                  [12]
        性和肾毒性 ，金松双黄酮和白果黄素均可导致严重的                           99.7％）、白果黄素对照品（批号 Y15J9L63710，纯度
        肾功能障碍和溶血等并发症            [13－14] 。                  95.6％）均购自上海源叶生物科技有限公司；甲醇、磷酸
            德国植物药企业 Dr. Willmar Schwabe GmbH & Co.         均为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
        KG 于 1965 年研发出银杏叶提取物，定名为 EGb761，成                  2 方法与结果
        分包括黄酮类（24％）和萜类内酯（6％）。该提取物组成                        2.1 溶液的制备
                                                     [15]
        被认为是黄金配比，其质量标准也被沿用至今 。                             2.1.1  单一对照品储备液          取白果黄素对照品 12 mg、
        EGb761 的生产工艺包含以丙酮-水为起始溶剂的粗提                        银杏双黄酮对照品 8 mg、异银杏双黄酮对照品 11 mg，
        取，脱脂，除去银杏酚酸、原花青素、银杏双黄酮，富集萜                         精密称定，分别置于 50 mL 量瓶中；另取穗花杉双黄酮
        类内酯，富集黄酮醇类等 15 道工序            [15－16] 。其中，有一道      对照品10 mg、金松双黄酮对照品6 mg，精密称定，分别
        工序为去除银杏双黄酮，且其质量标准中还对双黄酮类                           置于 100 mL 量瓶中；均用二甲基亚砜溶解并稀释至刻
        成分进行了限量。2020年版《中国药典》（一部）中提及，                       度，即得单一对照品储备液。
        银杏叶提取物以银杏Ginkgo biloba L.的干燥叶为原料，                  2.1.2  混合对照品溶液         分别精密吸取“2.1.1”项下各
        用乙醇回流提取，合并提取液并浓缩至适量后，上样至                           单一对照品储备液1 mL，置于100 mL量瓶中，加甲醇至
                                                           刻度，即得混合对照品溶液。
        大孔吸附树脂柱上，依次用水及不同浓度的乙醇洗脱，
                                                           2.1.3  供试品溶液      取银杏叶片10片，除去包衣，研细，
        收集相应洗脱液，回收乙醇，干燥，即得有效成分富集的
                                                           称取相当于总黄酮醇苷 9.6 mg 的样品粉末，精密称定，
        浅黄棕色至棕褐色的银杏叶提取物粉末，但其检查项并
                                                           置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，称定质
        不涉及双黄酮类成分 。本研究拟采用超高效液相色
                           [17]
                                                           量，超声（功率250 W，频率33 kHz）处理20 min，放冷，再
        谱法联合一测多评法，建立测定银杏叶片中5种双黄酮
                                                           次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续
        类成分（穗花杉双黄酮、金松双黄酮、银杏双黄酮、异银
                                                           滤液，即得。
        杏双黄酮、白果黄素）含量的方法，旨在摸查国产制剂银
                                                           2.2  色谱条件
        杏叶片中双黄酮类成分的含量，为银杏叶制剂的质量控
                                                               以 Waters Acquity UPLC HSS T3（2.1 mm×100 mm，
        制提供参考。
                                                           1.8 μm）为色谱柱，以乙腈（A）-0.4％磷酸溶液（B）为流
        1 材料
                                                           动相进行梯度洗脱（0～1.5 min，1％A；1.5～21.5 min，
        1.1  主要仪器
                                                           1％A→40％A；21.5～35.5 min，40％A→99％A；35.5～
            本研究所用主要仪器包括Acquity UPLC H-CLASS
                                                           40 min，99％ A→1％ A）；流 速 为 0.4 mL/min；柱 温 为
        型超高效液相色谱仪及配备的二极管阵列检测器（美国
                                                           35 ℃；检测波长为 340 nm；混合对照品溶液进样量为
        Waters 公司），UlitiMate 3000 型高效液相色谱仪及配备
                                                           1 μL，供试品溶液进样量为10 μL。在该色谱条件下，混合
        的紫外检测器（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），
                                                           对照品溶液、供试品溶液（批号A1902004）的色谱图见图
        Nexera UHPLC LC-30A 型超高效液相色谱仪及配备的                  1，空白溶液（即甲醇）不干扰各待测成分的测定（图略）。
        二极管阵列检测器（日本Shimadzu公司），AE240型十万                    2.3 方法学考察
        分之一电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司），Milli-Q              2.3.1  线性关系考察        分别精密吸取混合对照品溶液
        型超纯水处理系统[默克密理博实验室设备（上海）有限                          0.1、0.5、1、2、5、8 μL，按“2.2”项下色谱条件进样分析，记
        公司]等。                                              录峰面积。以进样量为横坐标（x/ng）、峰面积为纵坐标
        1.2 主要药品与试剂                                        （y），绘制标准曲线并进行回归分析，得穗花杉双黄酮、
            7 批银杏叶片来源于 2019 年国家药品评价抽验样                     白果黄素、银杏双黄酮、异银杏双黄酮、金松双黄酮的回
        品，生产厂家包括云南某药业股份有限公司（厂家 1，样                         归方程和线性范围，结果见表1。
        品批号分别为20190302、20190303）、湖南某药厂股份有                  2.3.2  定量限考察       取混合对照品溶液适量，用甲醇逐
        限公司（厂家 2，样品批号分别为 181201、190301）、江苏                 步稀释，以信噪比10∶1所对应的对照品溶液质量考察定
        某药业有限公司（厂家 3，样品批号分别为 180508、                       量限。结果显示，穗花杉双黄酮、白果黄素、银杏双黄
        180509）、石家庄某药业股份有限公司（厂家4，样品批号                      酮、异银杏双黄酮、金松双黄酮的定量限分别为 0.10、
        为A1902004），规格均为每片含总黄酮醇苷9.6 mg、萜类                   0.24、0.16、0.22、0.06 ng。


        中国药房    2022年第33卷第10期                                            China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 10  ·1221 ·
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