Page 51 - 《中国药房》2022年6期

毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体中6种CYP酶的体外抑制作用 Δ

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王 志 1，2＊ ，张海波 ，居博伟 ，胡君萍 ，杨建华 （1.新疆医科大学药学院，乌鲁木齐 830054；2.新疆医科大
学第一附属医院药学部，乌鲁木齐 830011）
中图分类号 R285.5；R969.1 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）06-0685-08
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.06.07

摘 要 目的 考察毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体细胞色素P450（CYP）酶的体外抑制作用。方法 采用探针底物法，在大鼠肝微粒
体中加入0.1、0.3、1、3、10、30 μmol/L的毛蕊花糖苷，与探针底物非那西丁、美芬妥因、双氯芬酸、香豆素、右美沙芬、睾酮（分别为
CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4 酶的底物）共同孵育。在另设空白对照组和阳性抑制剂组[α-萘黄酮、
噻氯匹定、磺胺苯吡唑、毛果芸香碱、奎尼丁、酮康唑（分别为CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9、CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4酶的抑制
剂）]的基础上，以吲达帕胺为内标，采用超高效液相色谱-串联质谱法检测相应代谢产物（对乙酰氨基酚、4-羟基美芬妥因、4-羟基
双氯芬酸、7-羟基香豆素、右啡烷、6β-羟基睾酮）的含量，运用GraphPad v8.0软件计算半数抑制浓度（IC50 ）；采用计算机分子对接技
术，将毛蕊花糖苷和阳性抑制剂分别与 CYP 酶进行分子对接，分析二者分子结合方式及结合能力强弱。结果 毛蕊花糖苷对
CYP1A2、CYP2A6酶的IC50＞30 μmol/L，对CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9、CYP3A4酶的IC50分别为24.87、21.52、12.56、7.55 μmol/L。
毛蕊花糖苷与CYP3A4酶之间可形成氢键并产生疏水作用力，酮康唑与CYP3A4酶之间可形成氢键并产生静电相互作用；毛蕊花
糖苷和酮康唑与CYP3A4酶的结合自由能分别为－10.2、－12.4 kcal/mol（1 kcal/mol＝4.19 kJ）。结论 毛蕊花糖苷对大鼠肝微粒体
中CYP3A4酶有中等强度的抑制作用，且亲和力与阳性抑制剂相当；该化合物对其他5种CYP酶的抑制作用弱。
关键词 毛蕊花糖苷；大鼠肝微粒体；细胞色素P450酶；抑制作用；探针底物法；超高效液相色谱-串联质谱；分子对接技术

In vitro inhibitory effects of acteoside on 6 kinds of CYP enzymes in liver microsomes of rats
WANG Zhi ，ZHANG Haibo ，JU Bowei ，HU Junping ，YANG Jianhua （1. College of Pharmacy，Xinjiang
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Medical University，Urumqi 830054，China；2. Dept. of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Xinjiang
Medical University，Urumqi 830011，China）
ABSTRACT OBJECTIVE To investigate the in vitro inhibitory effects of acteoside on cytochrome P450（CYP）enzymes in liver
microsomes of rats. METHODS Using probe substrates method，acteoside（0.1，0.3，1，3，10，30 μmol/L）was incubated with
probe substrates phenacetin，mephentoin，diclofenac，coumarin，dextromethorphan and testosterone （substrates of CYP1A2，
CYP2C19，CYP2C9，CYP2A6，CYP2D6 and CYP3A4 enzymes，respectively）in liver microsomes of rats. Another blank control
group and positive inhibitor group [ α-naphthoflavone， ticlopidine， sulfabendazole， pilocarpine， quinidine and ketoconazole
（inhibitors of CYP1A2，CYP2C19，CYP2C9，CYP2A6，CYP2D6 and CYP3A4 enzymes，respectively）] were set up. Using
indapamide as the internal standard， the contents of corresponding metabolites （acetaminophen， 4-hydroxymephenytoin，
4-hydroxydiclofenac， 7-hydroxycoumarin， dextran， 6 β-hydroxytestosterone） were detected by ultra high performance liquid
chromatography-tandem mass spectrometry. The IC50 values were calculated by GraphPad v8.0 software. By computer molecular
docking technology，acteoside and positive inhibitors were molecularly docked with the CYP enzyme，and the binding mode and
strength of the two molecules were analyzed. RESULTS The IC50 values of acteoside to CYP1A2 and CYP2A6 enzymes were more
than 30 μmol/L，and those of acteoside to CYP2D6，CYP2C19，CYP2C9 and CYP3A4 enzymes were 24.87，21.52，12.56 and
7.55 μmol/L，respectively. The hydrogen bond and hydrophobic force could form between acteoside and CYP3A4 enzyme，and the
hydrogen bond and electrostatic interaction could form between ketoconazole and CYP3A4 enzyme. The binding free energy of
acteoside and ketoconazole to CYP3A4 enzyme were － 10.2 and － 12.4 kcal/mol （1 kcal/mol＝4.19 kJ）， respectively.
CONCLUSIONS Acteoside shows moderate inhibitory effect on CYP3A4 enzyme in liver microsomes of rats，and its affinity is
equivalent to that of positive inhibitor；the compound shows weak inhibitory effect on other 5 CYP enzymes.
KEYWORDS acteoside；liver microsome in rats；cytochrome P450 enzymes；inhibitory effect；probe substrates method；ultra
high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry；molecular docking technology

Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81860735）；新疆维 男性不育症是目前临床较为难治的疾病，其发病率
吾尔自治区科学技术厅科技创新领军人才后备人选项目（No.2019XS14）； 呈逐年上升的趋势 [1－2] 。现代医学认为，男性不育症的
新疆天然药物活性组分与释药技术重点实验室（No.XJDX1713） 病因复杂，发病机制尚不清晰，但可确定的是：人体的正
＊主管药师。研究方向：天然药物化学、临床药学。电话：0991-
常生殖活动是在下丘脑-垂体-性腺轴的协调下完成的，
4366579。E-mail：wzls913@163.com
# 通信作者：主任药师，教授，博士生导师，博士。研究方向：天然 所有异常的激素水平均可以影响男性生殖功能，导致男
[3]
药物化学。电话：0991-4362893。E-mail：yjh-yft@163.com 性生育能力降低 。睾酮是经典的生殖内分泌激素，在

中国药房 2022年第33卷第6期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 6 ·685 ·