Page 55 - 《中国药房》2022年6期

理，按“2.5.1”“2.5.2”项下色谱与质谱条件进样测定，记 述浓度保持一致，同法进样测定，记录峰面积（A2 ）。以
录峰面积，每个浓度进行双样本分析。以代谢产物的浓 A1除以 A2计算代谢产物、内标的基质因子，以代谢产物
度（x）为横坐标、其与内标的峰面积比值（y）为纵坐标进 的基质因子除以内标的基质因子计算经内标归一化的
行线性回归，结果见表4。 基质因子，结果见表6。
表 4 对乙酰氨基酚等 6 种代谢产物的回归方程、线性 表6 对乙酰氨基酚等6种代谢产物的基质效应（n＝6）
范围和定量下限 代谢产物 浓度/（μmol/L） 内标归一化基质因子/％
代谢产物 标准曲线 r 线性范围/（μmol/L） 定量下限/（μmol/L） 对乙酰氨基酚 0.000 326 92.87
对乙酰氨基酚 y＝0.146 9x+0.057 5 0.997 2 0.000 163～0.016 3 0.000 163 0.008 150 96.38
4-羟基美芬妥因 y＝0.200 1x+0.012 4 0.996 6 0.000 170～0.042 7 0.000 170 0.011 410 96.45
4-羟基双氯芬酸 y＝0.456 6x－0.001 2 0.997 9 0.000 170～0.042 7 0.000 170 4-羟基美芬妥因 0.000 340 92.91
7-羟基香豆素 y＝0.699 0x－0.036 0 0.998 9 0.000 170～0.042 7 0.000 170 0.021 350 95.57
右啡烷 y＝2.370 5x+0.155 5 0.997 8 0.000 170～0.042 7 0.000 170 0.029 890 94.87
6β-羟基睾酮 y＝1.585 0x+0.103 2 0.998 8 0.000 819～0.081 9 0.000 819 4-羟基双氯芬酸 0.000 340 94.50
0.021 350 95.50
2.5.5 精密度与准确度试验 按“2.5.4”项下方法配制6 0.029 890 94.52
种代谢产物定量下限和低、中、高浓度工作溶液，每个浓 7-羟基香豆素 0.000 340 94.89
0.021 350 97.40
度平行 6 份，按“2.4”项下方法处理，按“2.5.1”“2.5.2”项
0.029 890 95.52
下色谱与质谱条件进样测定，记录峰面积，计算批内精 右啡烷 0.000 340 95.25
密度 RSD 和批内准确度[准确度＝（测得值/真实值）× 0.021 350 97.42
100％，下同]；连续测定 3 d，计算批间精密度 RSD 和批 0.029 890 92.30
6β-羟基睾酮 0.001 638 96.59
间准确度，结果见表5。
0.040 950 94.03
表5 对乙酰氨基酚等6种代谢产物的精密度与准确度 0.057 330 94.22
试验结果 2.5.7 稳定性试验 按“2.5.4”项下方法配制6种代谢产
精密度RSD/％ 准确度/％ 物低、中、高浓度工作溶液，按“2.4”项下方法处理后，
代谢产物 浓度/（μmol/L）
批内（n＝6） 批间（n＝3） 批内（n＝6） 批间（n＝3） 分别考察室温下放置 4 h、进样器（4 ℃）中放置 24 h、
对乙酰氨基酚 0.000 163 8.81 5.30 95.03 91.87
0.000 326 4.57 6.03 100.40 101.20 －20 ℃冻存20 d条件下的稳定性，结果见表7。
0.008 150 5.50 6.30 97.87 105.00 表7 对乙酰氨基酚等6种代谢产物的稳定性试验结果
0.011 410 3.98 4.35 99.79 99.38
4-羟基美芬妥因 0.000 170 5.00 6.52 99.13 94.37 （n＝3）
0.000 340 4.54 7.85 102.60 99.34 RSD/％
0.021 350 7.14 5.70 94.64 99.15 代谢产物 浓度/（μmol/L） 室温下放置4 h 4 ℃放置24 h －20 ℃冻存20 d
0.029 890 2.83 4.22 101.30 100.30 对乙酰氨基酚 0.000 326 4.17 4.73 7.12
4-羟基双氯芬酸 0.000 170 5.86 6.63 95.00 96.28 0.008 150 2.89 3.22 3.43
0.000 340 6.80 5.21 101.80 96.25 0.011 410 1.91 3.16 3.22
0.021 350 5.56 6.27 99.15 99.74 4-羟基美芬妥因 0.000 340 4.73 4.79 6.04
0.029 890 2.78 3.61 101.20 100.70 0.021 350 4.03 3.34 3.78
7-羟基香豆素 0.000 170 8.65 7.11 97.83 93.75 0.029 890 2.31 3.13 1.12
0.000 340 5.05 4.56 95.43 93.06 4-羟基双氯芬酸 0.000 340 5.98 6.94 4.56
0.021 350 6.07 5.41 99.95 100.70 0.021 350 3.39 2.37 3.16
0.029 890 2.61 2.42 99.17 97.99 0.029 890 3.05 2.39 4.86
右啡烷 0.000 170 7.30 5.67 92.41 92.91 7-羟基香豆素 0.000 340 4.76 5.31 6.13
0.000 340 5.23 7.29 95.73 96.50 0.021 350 3.92 2.39 4.19
0.021 350 4.95 4.54 99.63 98.90 0.029 890 3.62 3.19 4.29
0.029 890 3.27 3.05 99.55 99.98 右啡烷 0.000 340 4.80 6.81 5.61
6β-羟基睾酮 0.000 819 7.35 6.54 93.23 92.19 0.021 350 2.25 2.31 3.19
0.001 638 7.07 6.23 94.48 96.25 0.029 890 1.93 2.86 3.99
0.040 950 3.53 2.64 101.90 101.00 6β-羟基睾酮 0.001 638 6.44 3.46 5.33
0.057 330 3.45 4.27 101.60 99.83 0.040 950 3.64 2.75 5.61
0.057 330 3.61 1.91 3.63
2.5.6 基质效应 取空白肝微粒体，按“2.4”项下方法处
理后，分别加入相应浓度的6种代谢产物的对照品溶液 2.6 肝微粒体孵育实验
（按“2.3”项下方法配制），制成低、中、高浓度工作溶液， 2.6.1 肝微粒体孵育方法 肝微粒体孵育实验设置为
每个浓度平行 6 份，按“2.5.1”“2.5.2”项下色谱与质谱条 空白对照组、阳性抑制剂组和毛蕊花糖苷组。按“2.4”项
件进样测定，记录峰面积（A1 ）。另制备不含肝微粒体但 下方法建立体外孵育体系，毛蕊花糖苷组孵育体系中分
含6种代谢产物和内标的对照品溶液，溶液终浓度与上 别加入浓度为0.1、0.3、1、3、10、30 μmol/L的毛蕊花糖苷

中国药房 2022年第33卷第6期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 6 ·689 ·