Page 98 - 《中国药房》2022年5期

以下化合物：化合物2[24 mg，流动相为甲醇-水（89 ∶ 11，
V/V），Fr.1.2]、化合物3[22 mg，流动相为甲醇-水（88 ∶ 12，
V/V），Fr.2.2]、化合物4[22 mg，流动相为甲醇-水（85 ∶ 15，
V/V），Fr.2.3]、化合物5[24 mg，流动相为甲醇-水（75 ∶ 25，
V/V），Fr.3.1]、化合物6[31 mg，流动相为甲醇-水（80 ∶ 20，
V/V），Fr.3.4]、化合物7[33 mg，流动相为甲醇-水（77 ∶ 23，
V/V），Fr.3.6]、化合物8[33 mg，流动相为甲醇-水（77 ∶ 23，
化合物序号
V/V），Fr.4.3]、化合物9[25 mg，流动相为甲醇-水（80 ∶ 20，
V/V），Fr.5.1]、化合物10[20 mg，流动相为甲醇-水（70∶30，
V/V），Fr.5.5]、化合物11[17 mg，流动相为甲醇-水（68∶32，
V/V），Fr.5.6]。
Fr.6～Fr.8 采用反相 ODS 柱色谱进行分离，用甲醇-
水（3 ∶ 7→9 ∶ 1）进行梯度洗脱，分别得亚片段 Fr.6.1～
Fr.6.5、Fr.7.1～Fr.7.6和Fr.8.1～Fr.8.5。其中Fr.6.1、Fr.7.6、
Fr.8.2 和 Fr.8.3 再次经反相 ODS 柱色谱分离，用甲醇-水
（4 ∶ 6→9 ∶ 1）进 行 梯 度 洗 脱 ，获 得 Fr.6.1.1～Fr.6.1.3、
Fr.7.6.1～Fr.7.6.6、Fr.8.2.1～Fr.8.2.3和Fr.8.3.1～Fr.8.3.4，
采用半制备高效液相色谱纯化得到以下化合物：化合物
12[15 mg，流动相为甲醇-水（72 ∶ 28，V/V），Fr.6.1.2]、化合
物13[56 mg，流动相为甲醇-水（72∶28，V/V），Fr.6.1.2]、化
合物1[35 mg，流动相为甲醇-水（75 ∶ 25，V/V），Fr.6.2]、化
合物14[15 mg，流动相为甲醇-水（70∶30，V/V），Fr.7.6.1]、
图1 化合物1～16的化学结构
化 合 物 15[15 mg，流 动 相 为 甲 醇 - 水（58 ∶ 42，V/V），
+
Fr.8.2.3）]、化合物 16[12 mg，流动相为甲醇-水（55 ∶ 45， [M+Na]（计算值 1 213.598 2，C58H94O25Na），确定化合物
1
V/V），Fr.8.3.2]。 1的分子式为C58H94O25。分析1D-NMR，在 H-NMR（500
2.2 酸水解、糖基衍生及气相色谱分析 MHz，C5D5N）中可观察到 7 个甲基质子信号：δ H 0.91（s，
取待分析化合物 5 mg，加入 5 mL 三氟醋酸溶液（2 3H），0.92（s，6H，2×CH3 ），1.09（s，3H），1.12（s，3H），1.26
mol/L），置于密闭容器中加热 8 h（110 ℃）；反应完毕后 （s，3H）和 1.27（s，3H）；5 个糖端基质子信号：δ H 4.89（d，
放冷至室温，加入 20 mL 纯净水，用乙酸乙酯等体积萃 J＝6.3 Hz），5.00（d，J＝7.8 Hz），5.09（d，J＝7.4 Hz），5.86
取 3 次；水层浓缩蒸干，向残留物加 1 mL L-半胱氨酸甲 （s）和 6.25（d，J＝8.1 Hz）；1 个烯氢信号：δ H 5.43（br s）。
酯盐酸盐的吡啶溶液（2 mg/L），水浴（60 ℃）反应1 h，氮 结合无畸变极化转移增强碳谱（DEPT，135°）和碳氢近
气吹干；向残留物加入0.2 mL N-（三甲基硅基）咪唑和2 程相关谱（HSQC），在 C-NMR（125 MHz，C5D5N）中可
13
mL吡啶，水浴（60 ℃）反应1 h，氮气吹干；残留物用水分 观察到 7 个甲基碳信号：δ C 15.5，16.3，17.4，23.6，25.9，
散，用环己烷等体积萃取3次，合并萃取液，蒸干即得化 27.8 和 33.0；5 个糖端基碳信号：δ C 95.5，102.6，104.7，
合物糖基的三甲基硅醚化衍生物 [15－16] 。采用L-Chirasil- 105.0和106.6；2个烯碳信号：δC 122.7和144.0；在低场区
Val气相色谱柱进行气相色谱分析，程序升温：初始柱温 存在1个羰基碳信号：δ C 176.4。以上均为齐墩果烷型三
140 ℃，保持5 min后，以2 ℃/min的速度加温至180 ℃， 萜皂苷特征波谱信号，通过对比文献波谱数据 [17－18] ，确
保持 5 min 后，以 10 ℃/min 的速度加温至 320 ℃，保持 定化合物1的苷元为齐墩果酸；综合分析2D-NMR，包括
1
1
10 min；检测器温度设定为 280 ℃；气化温度设定为 同核质子相关谱（H- H COSY）、碳氢远程相关谱（HM-
250 ℃；载气为氮气；进样量为1 μL。标准糖采用同样方 BC）、HSQC、氢氢空间相关谱（NOESY）和氢氢全相关
法进行衍生和分析。根据样品峰面积以及与标准糖保 谱（TOCSY）对苷元碳氢信号进行了全归属（表 1）。根
留时间的比对，可确定化合物的糖基比例和种类。 据δ C 88.8（C-3）和δ C 176.4（C-28），可知化合物1为在C-3
2.3 结构鉴定 和C-28位均连有寡糖基单元的双糖链皂苷。
根据化合物波谱数据和理化性质鉴定化合物结构， 按照“2.2”项下所述方法，对化合物 1 进行酸水解，
化合物1～16的化学结构见图1。 并制备糖基的三甲基硅醚化衍生物，进行气相色谱分
化合物 1：白色无定形粉末。高分辨电喷雾离子化 析，与标准糖进行对比。结果表明，化合物1中含有4种
质谱（HR-ESI-MS）显示质荷比m/z实测值为1 213.597 8 糖基单元，分别为 2 种五碳糖：L-吡喃阿拉伯糖（Ara）和

·604 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 中国药房 2022年第33卷第5期