Page 97 - 《中国药房》2022年5期

pyranoside （4），HN-saponin F（5），clematoside S（6），prosapogenin CP4（7），cussonside B（8），pulsatilla saponin C（9），
clemastanoside D（10），3 β-O-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-β-L-arabinopyranosyl-hederagenin-28-O-β-D-glucopyranoside（11），
ciwujianoside C3（12），ciwujianoside A1（13），huzhangoside D（14），kalopanaxsaponin B（15）and hederacolchiside E（16）.
Compounds 3，4，6-9 displayed inhibitory activities on the proliferation of tumor cells to different extent，and compound 7 had the
strongest activity；compound 7 induced the apoptosis of U87MG cell so as to inhibit the proliferation of cancer cells in a
time-dependent manner. CONCLUSIONS The obtained 16 saponins are all identified as oleanolane-type，among which compound
1 is a new compound. The monodesmosidic saponins，the sugar chain of which attached at C-3 and a free carboxyl at C-28，
possess stronger antitumor activity than others.
KEYWORDS Anemone rivularis var. flore-minore； triterpenoid saponin； identification； antitumor activities； oleanane-type
triterpenoid saponins

毛茛科银莲花属植物在世界范围内分布广泛，我国 山区域，经陕西中医药大学药学院王继涛教授鉴定为毛
产52种，其中部分品种已作药用，如两头尖（多被银莲花 茛科银莲花属植物小花草玉梅 A. rivularis var. flore-
的根茎）、蜈蚣三七（林荫银莲花的根茎）、九节菖蒲（阿 minore，标本存于陕西中医药大学药学院中药标本室。
尔泰银莲花的根茎）等 [1－2] 。小花草玉梅 Anemone rivu- 正相柱色谱硅胶（规格 100～140 目、200～300 目）购自
laris var. flore-minore属于银莲花属传统药用植物，分布 青岛海洋化工厂；反相ODS-A硅胶（规格50 μm）购自日
于山西、河北、陕西、内蒙古、甘肃、四川等地，据《全国中 本 YMC 公司；Sephadex LH-20 凝胶（规格 40～70 mm）
草药汇编》记载，该植物的根或全草药用名称为“破牛 购自瑞典 GE 公司；胰蛋白酶（批号 1930154）、胎牛血清
[3]
膝”，用于肝炎、阴疽、痈肿作痛等症 。研究表明，银莲 （批号 1814986）均购自美国 Gibco 公司；DMEM 培养基
花属植物富含五环三萜类皂苷成分，是发挥药效的主要 （批号AD21573271）购自美国Hycolne公司；二甲基亚砜
活性成分 [4－5] 。本课题组前期已对包括小花草玉梅在内 （DMSO，批号 RNBC1433，纯度 99.7％）、L-半胱氨酸甲
的多种银莲花属植物进行了化学成分的分离鉴定及其 酯盐酸盐（批号 410209，纯度 98％）、N-（三甲基硅基）咪
活性研究，得到大量三萜皂苷类化合物，其中部分有显 唑（批号 394847，供气相色谱衍生用）、MTT 试剂（批号
著抗肿瘤药理活性 [6－14] 。为进一步探索本属植物抗肿瘤 M2128，纯度98％）、多柔比星（批号D1515，纯度98％）、
活性成分，本研究以小花草玉梅的根茎为研究对象，进 尼莫司汀（批号 L5918，纯度 98％）均购自美国 Sigma 公
一步开展系统研究，对其70％乙醇提取物正丁醇萃取部 司；Annexin V-FITC/PI 试剂盒（批号 7312394）购自美国
位进行分离、纯化，根据化合物波谱数据和理化性质鉴 BD 公司；色谱纯甲醇购自天津市科密欧化学试剂有限
定其化学结构，得到16个三萜皂苷类化合物，其中包含 公司，其他分析纯试剂均购自天津市富宇精细化工有限
1个新化合物（1）；同时，采用MTT法检测了上述化合物 公司，水为纯净水。
抑制5种人源肿瘤细胞增殖的活性，并采用流式细胞术 1.3 细胞株
评价了化合物7对人脑星形胶质母细胞瘤U87MG细胞 本研究所用人急性早幼粒白血病HL-60细胞、人肺
的促凋亡作用，为进一步阐明本属植物抗肿瘤活性的物 癌 A549 细胞、人肝癌 HepG2 细胞、人宫颈癌 HeLa 细胞
质基础及后续相关研究提供依据。 和人脑星形胶质母细胞瘤U87MG细胞均购自中国科学
1 材料 院上海细胞保存库。
1.1 主要仪器与色谱柱 2 方法与结果
本研究所用主要仪器包括 Perkin-Elmer 341 型旋光 2.1 提取分离
仪（美国 Perkin-Elmer 公司），Bruker AVANCE-500 型核 取小花草玉梅干燥根茎5 kg，打成粗粉，加入5倍量
磁共振（NMR）仪（瑞士Bruker公司），Micromass Quattro （L/kg）70％乙醇回流提取 3 次（每次 2 h），合并提取液，
型质谱仪（美国Waters公司），Finnigan Voyager型气相色 过滤浓缩得 1.1 kg 醇提物浸膏。醇提物浸膏用 10 L 水
谱仪（美国 Finnigan 公司），Dionex P680 型液相色谱仪 分散后，加入等体积石油醚（10 L）萃取3次；水层再加入
（美国Dionex公司），SW-CJ-1D型超净工作台（苏州净化 等体积正丁醇（10 L）萃取3次，合并正丁醇层，浓缩得正
设备有限公司），M680 型酶标仪（美国 Bio-Rad 公司）， 丁醇部位浸膏 230 g。取正丁醇浸膏 120 g，采用正相硅
Avanti J30 型低温高速离心机（美国 Beckman 公司）， 胶柱色谱进行粗分离，用三氯甲烷-甲醇-水（10∶1∶0.04→
FACSCalibur型流式细胞仪（美国BD公司）。L-Chirasil- 6∶4∶0.7）进行梯度洗脱，得8个片段Fr.1～Fr.8。
Val气相色谱柱（25 m×0.32 mm，0.25 μm）购自美国Agilent Fr.1～Fr.5 采用正相硅胶柱色谱分离，用三氯甲烷-
公司，YMC-Pack R&D ODS-A 制备型液相色谱柱（20 甲醇-水（8 ∶ 2 ∶ 0.05→6 ∶ 4 ∶ 0.7）进行梯度洗脱，分别得亚
mm×250 mm，5 μm）购自日本YMC公司。 片段 Fr.1.1～Fr.1.3、Fr.2.1～Fr.2.3、Fr.3.1～Fr.3.6、Fr.4.1～
1.2 主要药品与试剂 Fr.4.3和Fr.5.1～Fr.5.6。所有亚片段均经Sephadex LH-20
小花草玉梅药材采自秦岭山脉的陕西太白县太白 凝胶柱色谱除杂，再采用半制备高效液相色谱纯化得到

中国药房 2022年第33卷第5期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 ·603 ·