Page 67 - 《中国药房》2022年5期

率 ，再根据结果进行回归分析，计算 IC50。结果显示， 应孔加入50 μL 1％ H2O2溶液或水；轻轻摇晃，于37 ℃
[15]
虎杖一体化饮片、传统饮片以及 L（+）-抗坏血酸对超氧 条件下孵育 30 min 后，采用酶标仪于 536 nm 波长处检
自由基清除作用的 IC50 分别为 0.99、1.52、0.35 mg/mL。 测吸光度值，每个样品平行测定3次。按公式计算羟自
[17]
结果见图8。 由基清除率 ，再根据结果进行回归分析，计算 IC50。
150 结果显示，虎杖一体化饮片、传统饮片以及L（+）-抗坏血
酸对羟自由基清除作用的 IC50 分别为 0.53、0.76、0.25
超氧自由基清除率/％ 100 虎杖传统化饮片 100
mg/mL。结果见图10。
虎杖一体化饮片
L（+）-抗坏血酸
80
50
羟自由基清除率/％ 60 虎杖一体化饮片
虎杖传统化饮片
0
0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 40 L（+）-抗坏血酸
质量浓度/（mg/mL）
图 8 虎杖一体化饮片和传统饮片对超氧自由基的清 20
除率
0
3+
2.3.5 Fe 还原能力的检测 参考文献[16]方法，取虎杖 0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
质量浓度/（mg/mL）
一体化饮片、传统饮片以及 L（+）-抗坏血酸的不同质量 图 10 虎杖一体化饮片和传统饮片对羟自由基的清
浓度样品溶液 1 000 μL 和 1％铁氰化钾 125 μL 加入 1.5 除率
mL EP管中，置于50 ℃水浴条件下反应20 min后，再加
入10％三氯乙酸溶液125 μL终止反应；以3 000 r/min离 3 讨论
心2 min，取60 μL上清液加入96孔板中，加入0.1％氯化 相关文献报道，在一定条件下，虎杖中虎杖苷与白
铁溶液90 μL，快速振荡摇匀，采用酶标仪于700 nm波长 藜芦醇会发生一定程度的转化 [19－22] 。本文通过HPLC法
建立了虎杖一体化饮片和传统饮片的指纹图谱，结果发
处检测吸光度值。另设置以磷酸盐缓冲液（pH6.6）代替
现，虎杖传统饮片中13号峰（白藜芦醇）的峰高明显高于
药液的空白组，同法操作。每个样品平行测定3次。按
一体化饮片，由此可知，虎杖传统炮制工艺可使虎杖苷
3+
3+
公式计算其对Fe 的还原能力[Fe 还原能力＝A1－A0，其
向白藜芦醇转化。笔者推测其原因可能是虎杖苷发生
中 A1为实验组吸光度值，A0为空白组吸光度值；所得差
了水解，从而使白藜芦醇的含量升高，但具体的转化机
3+
值越大，表明样品的 Fe 还原能力越强]。结果显示，虎
制还有待进一步验证。
杖一体化饮片和传统饮片均对 Fe 具有一定的还原能
3+
[23]
现代药理研究表明，虎杖中的虎杖苷 、白藜芦醇 [24]
3+
力，且随着样品质量浓度升高，其对 Fe 的还原能力越
等均具有良好的抗氧化活性，因此，本文选择抗氧化活
强。结果见图9。
性作为比较虎杖一体化饮片与传统饮片药效的评价指
1.5
标。结果发现，虎杖一体化饮片和传统饮片对DPPH自
由基、ABTS自由基、超氧自由基和羟自由基均具有一定
虎杖一体化饮片
1.0
3+
虎杖传统化饮片 的清除能力，对Fe 也具有一定的还原能力，且虎杖一体
吸光度 L（+）-抗坏血酸 化饮片的抗氧化活性强于虎杖传统饮片。
0.5
综上所述，一体化炮制工艺较传统炮制工艺可更好
地保留虎杖的成分，且虎杖一体化饮片的体外抗氧化活
0 性强于传统饮片。
0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
质量浓度/（mg/mL） 参考文献
3+
图9 虎杖一体化饮片和传统饮片对Fe 的还原能力 [ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S]. 2020年
版.北京：中国医药科技出版社，2020：217-218.
2.3.6 羟自由基清除率的检测 参考文献[17－18]方
[ 2 ] 梁明辉.中药虎杖的研究进展[J].中国医药指南，2019，17
法，将 4.950 mL 1，10-菲罗啉溶液、4.95 mL FeSO4溶液、
（10）：47，54.
4.95 mL 乙二胺四乙酸溶液和 3.3 mL 磷酸盐缓冲液
[ 3 ] 时圣明，潘明佳，王文倩，等.虎杖的化学成分及药理作用
（pH7.4）混合，制成混合液。将混合液置于37 ℃条件下 研究进展[J].药物评价研究，2016，39（2）：317-321.
孵育15 min后，按137.5 μL/孔加入96孔板中，再向相应 [ 4 ] 狄红杰.复方虎杖方治疗非酒精性脂肪性肝病的疗效和
孔中分别加入 37.5 μL 虎杖一体化饮片、传统饮片以及 机制研究[D].南京：南京中医药大学，2017.
L（+）-抗坏血酸的不同质量浓度样品溶液或水，再向相 [ 5 ] BRALLEY E E，GREENSPAN P，HARGROVE J L，et al.
中国药房 2022年第33卷第5期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 ·573 ·