Page 66 - 《中国药房》2022年5期

表2 10批虎杖一体化饮片的相似度评价结果 测吸光度值。每个样品平行测定 3 次。按公式计算
编号 Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 Y6 Y7 Y8 Y9 Y10 R DPPH 自由基清除率[DPPH 自由基清除率=（1－A/A0 ）×
Y1 1.000 0.994 0.913 0.870 0.683 0.920 0.933 0.976 0.983 0.950 0.977 100％，其中A为实验组吸光度值，A0为空白组吸光度值]，
Y2 0.994 1.000 0.932 0.884 0.705 0.927 0.932 0.972 0.981 0.956 0.978
Y3 0.913 0.932 1.000 0.944 0.846 0.956 0.759 0.852 0.922 0.945 0.933 再根据结果进行回归分析，计算半数抑制浓度（IC50 ）。
Y4 0.870 0.884 0.944 1.000 0.950 0.970 0.698 0.821 0.896 0.955 0.942 结果显示，虎杖一体化饮片、传统饮片以及L（+）-抗坏血
Y5 0.683 0.705 0.846 0.950 1.000 0.891 0.457 0.619 0.733 0.848 0.801 酸对 DPPH 自由基清除作用的 IC50 分别为 0.42、0.61、
Y6 0.920 0.927 0.956 0.970 0.891 1.000 0.775 0.886 0.954 0.990 0.970 0.15 mg/mL。结果见图6。
Y7 0.933 0.932 0.759 0.698 0.457 0.775 1.000 0.971 0.919 0.839 0.888
Y8 0.976 0.972 0.852 0.821 0.619 0.886 0.971 1.000 0.982 0.932 0.961 100
Y9 0.983 0.981 0.922 0.896 0.733 0.954 0.919 0.982 1.000 0.978 0.988
Y10 0.950 0.956 0.945 0.955 0.848 0.990 0.839 0.932 0.978 1.000 0.987 80
R 0.977 0.978 0.933 0.942 0.801 0.970 0.888 0.961 0.988 0.987 1.000 虎杖一体化饮片
表3 10批虎杖传统饮片的相似度评价结果 DPPH自由基清除率/％ 60 虎杖传统化饮片
编号 C1 C2 C3 C4 C5 C6 C7 C8 C9 C10 R 40 L（+）-抗坏血酸
C1 1.000 0.968 0.988 0.987 0.968 0.828 0.690 0.991 0.907 0.976 0.994
C2 0.968 1.000 0.927 0.974 0.910 0.923 0.808 0.978 0.959 0.919 0.976 20
C3 0.988 0.927 1.000 0.963 0.962 0.740 0.633 0.964 0.839 0.967 0.972
C4 0.987 0.974 0.963 1.000 0.976 0.878 0.721 0.989 0.943 0.967 0.996 0
0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
C5 0.968 0.910 0.962 0.976 1.000 0.793 0.567 0.963 0.892 0.984 0.975
质量浓度/（mg/mL）
C6 0.828 0.923 0.740 0.878 0.793 1.000 0.800 0.873 0.975 0.786 0.869
C7 0.690 0.808 0.633 0.721 0.567 0.800 1.000 0.701 0.734 0.553 0.699 图6 虎杖一体化饮片和传统饮片对DPPH自由基的清
C8 0.991 0.978 0.964 0.989 0.963 0.873 0.701 1.000 0.942 0.977 0.995 除率
C9 0.907 0.959 0.839 0.943 0.892 0.975 0.734 0.942 1.000 0.891 0.940
C10 0.976 0.919 0.967 0.967 0.984 0.786 0.553 0.977 0.891 1.000 0.979 2.3.3 ABTS 自由基清除率的测定 参考文献[14]方
R 0.994 0.976 0.972 0.996 0.975 0.869 0.699 0.995 0.940 0.979 1.000 法，取虎杖一体化饮片、传统饮片以及L（+）-抗坏血酸的
表 4 20 批虎杖一体化饮片和传统饮片的相似度分析 不同质量浓度样品溶液适量，使用总抗氧化能力比色法
结果 测试盒（ABTS化学法）检测其对ABTS自由基的清除能
一体化饮片 相似度 传统饮片 相似度 力。每个样品平行测定3次。按公式计算ABTS自由基
Y1 0.929 C1 0.978 清除率 ，再根据结果进行回归分析，计算IC50。结果显
[14]
Y2 0.938 C2 0.987
Y3 0.943 C3 0.938 示，虎杖一体化饮片、传统饮片以及 L（+）-抗坏血酸对
Y4 0.976 C4 0.990 ABTS 自由基清除作用的 IC50分别为 0.47、0.54、0.000 3
Y5 0.817 C5 0.953 mg/mL。结果见图7。
Y6 0.992 C6 0.923
Y7 0.800 C7 0.831 150
Y8 0.901 C8 0.992
Y9 0.955 C9 0.972
Y10 0.993 C10 0.956 100 虎杖一体化饮片
2.3 虎杖一体化饮片与传统饮片的抗氧化活性比较 ABTS自由基清除率/％ 虎杖传统化饮片
2.3.1 样品溶液的制备 取虎杖一体化饮片粉末0.2 g， 50 L（+）-抗坏血酸
精密称定，放入锥形瓶中，精密加入60％乙醇25 mL，称
质量；超声（功率 250 W，频率 40 kHz）提取 30 min，冷却
0
至室温后称定质量，用60％乙醇补足缺失质量，摇匀，过 0 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00
质量浓度/（mg/mL）
滤，即得样品母液；然后取样品母液稀释成质量浓度分
图7 虎杖一体化饮片和传统饮片对ABTS自由基的清
别 0.125、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL 的系列样品
除率
溶液（以生药量计算）。同法制备虎杖传统饮片和L（+）-
抗坏血酸的系列浓度样品溶液，备用。 2.3.4 超氧自由基清除率的检测 参考文献[15]方法，
2.3.2 DPPH 自由基清除率的测定 参考文献[13]方 取虎杖一体化饮片、传统饮片以及 L（+）-抗坏血酸的不
法，分别取虎杖一体化饮片、传统饮片以及L（+）-抗坏血 同质量浓度样品溶液 12 μL、磷酸盐缓冲液（pH8.2）264
酸的不同质量浓度样品溶液200 μL、甲醇400 μL、DPPH μL 置于 96 孔板中，于 25 ℃条件下孵育 10 min；加入
溶液 400 μL 加入 1.5 mL EP 管中，上下颠倒混匀 10 次， 1.25 mmol/L 邻苯三酚溶液 24 μL，快速振荡摇匀，采用
金属浴 25 ℃条件下避光反应 20 min。另设以磷酸盐缓 酶标仪于320 nm波长处每隔30 s测定1次吸光度值，连
冲液（pH7.4）代替药液的空白组，同法操作。取 200 μL 续 5 min。另设以乙醇代替药液的空白组，同法操作。
混合反应液置于 96 孔板中，采用酶标仪于 515 nm 处检 每个样品平行测定 3 次。按公式计算超氧自由基清除

·572 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 中国药房 2022年第33卷第5期