Page 64 - 《中国药房》2022年5期
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少加工时间，提高生产效率。但是，虎杖经一体化工艺                            2 方法与结果
        处理后是否与传统工艺处理后的质量和药效存在差异，                            2.1 虎杖饮片的制备
        尚 不 明 确 。 基 于 此 ，本 研 究 拟 采 用 高 效 液 相 色 谱                根据课题组前期预实验，确定小档虎杖（直径≤2.5
        （HPLC）法建立虎杖一体化饮片与传统饮片的指纹图                           cm）传统饮片的制备工艺为：将虎杖新鲜药材浸泡 30
        谱，并以抗氧化活性为药效指标进行比较，以期为虎杖                            min 后，于 20 ℃下润制 24 h，切制成厚片，然后在 60 ℃
        饮片一体化生产工艺的可行性研究及其临床应用提供                             下干燥 4 h（使切片厚度约为 3 cm），干燥期间翻动 1
        实验依据。                                               次。大档虎杖（直径＞2.5 cm）传统饮片的制备工艺为：
        1 材料                                                将虎杖新鲜药材浸泡 30 min 后，于 20 ℃下润制45 h，切
        1.1 主要仪器                                            制成厚片，然后在 60 ℃下干燥 4 h（使切片厚度约为 4
            本研究所用主要仪器有1260型HPLC仪（美国Agi-                     cm），干燥期间翻动 1 次。虎杖一体化饮片的制备工艺
        lent 公司）、ES225SM-DR 型十万分之一天平（上海精科                   为：将虎杖新鲜药材用 18 倍水（L/kg）洗涤 3 次后，干燥
        天美科学仪器有限公司）、BS224 型分析天平[赛多利斯                        至含水量为 35％～45％时进行切片，再于 60 ℃下干燥
        科学仪器（北京）有限公司]、DTC-8J型超声波清洗机[鼎                       7 h（药材摊铺厚度为3 cm），干燥期间中翻动1次。
        泰（湖北）生化科技设备制造有限公司]、DFY-800C型摇                       2.2  虎杖一体化饮片与传统饮片的 HPLC 指纹图谱
        摆式高速粉碎机（温岭市林大机械有限公司）、Epoch 型                        比较
        全波长酶标仪（美国BioTek公司）                                  2.2.1  供试品溶液的制备          参考文献[11]方法进行制
        1.2 主要药品与试剂                                         备。取虎杖一体化饮片或传统饮片，粉碎，过三号筛，精
            本课题组所采集的虎杖鲜药材，经湖北中医药大学                          密称定0.2 g，置于锥形瓶中，精密加入60％乙醇25 mL，
        药学院刘义梅教授鉴定为蓼科植物虎杖 P. cuspidatum                     称定质量，超声（功率 250 W，频率 40 kHz）提取 30 min；
        Sieb. et Zucc.的干燥根和根茎，然后在湖北省中药炮制                    冷却至室温后再次称定质量，并用60％乙醇补足缺失质
        工程技术研究中心中试车间按本课题组前期优选工艺                             量，摇匀，过滤，取续滤液，即得供试品溶液。
        条件，将每批新鲜虎杖（具体样品信息见表 1）分别制成                          2.2.2  对照品溶液的制备         分别称取虎杖苷5 mg、大黄
        虎杖一体化饮片（编号 Y1～Y10）和传统饮片（编号                          素 3 mg、大黄素甲醚 4 mg，精密称定，分别置于 5 mL 量
        C1～C10）。虎杖苷对照品（批号 H-012-171216）、白藜                  瓶；分别取白藜芦醇 4 mg、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 4
        芦醇对照品（批号 B-002-170426）、大黄素-8-O-β-D-吡                mg，精密称定，分别置于10 mL量瓶；再以甲醇定容后制
        喃葡萄糖苷对照品（批号 D-018-171216）均购于成都瑞                     成各单一对照品溶液。精密吸取上述5种单一对照品溶
        芬思生物科技有限公司，纯度均大于 98.0％；大黄素对                         液各1 mL于10 mL量瓶中，以甲醇定容后，即得到混合
        照品（批号 T17A10F95418）、大黄素甲醚对照品（批号                     对照品溶液。
        T26A8F34784）均购于上海源叶生物科技有限公司，纯                       2.2.3  色谱条件     参考文献[12]的色谱条件，以 Agilent
        度均大于 98.0％；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，批                   Extend C18 （250 mm × 4.6 mm，5 μ m）为 色 谱 柱 ，乙 腈
        号 C11362866）、1，10-菲罗啉（无水）（批号 C11526129）            （A）-0.1％磷酸溶液（B）为流动相（梯度洗脱：0～14 min，
        均购于上海麦克林生化科技有限公司；焦性没食子酸                             10％ A→20％ A；14～21 min，20％ A→29％ A；21～45
        （批号20171127）、过氧化氢、乙二胺四乙酸二钠、三氯乙                      min，29％A→35％A；45～54 min，35％A→70％A；54～
        酸、氯化铁、七水合硫酸亚铁、L（+）-抗坏血酸均购于国                         70 min，70％A→84％A），检测波长为 290 nm，柱温为
        药集团化学试剂有限公司；总抗氧化能力比色法测试盒                            40 ℃，进样量为10 µL，流速为1.0 mL/min。
        （ABTS化学法）（批号4571TBLLSB）购于武汉伊莱瑞特                     2.2.4  精密度试验       精密吸取同一供试品溶液（编号
        生物科技股份有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯，乙醇为分                           Y1）10 μL，按“2.2.3”项下色谱条件连续进样 6 次，选取
        析纯，水为超纯水。                                           15 号峰为参照峰，记录其余共有峰的保留时间和峰面
                   表1 虎杖新鲜药材的样品信息                           积。结果显示，19个共有峰的相对保留时间和相对峰面

         编号       批号            产地               类型         积的RSD均小于3.0％，表明仪器精密度良好。
         S1       191104        湖北公安县松林村         野生         2.2.5  稳定性试验       取同一份供试品溶液（编号 Y1），
         S2       191020        湖北房县彭家湾          野生         于室温放置0、2、4、6、8、12 h后，按“2.2.3”项下色谱条件
         S3       191108        湖北公安县卷桥水库        野生
         S4       191029        湖北房县宋家店村         栽培3年生      进样测定，选取15号峰为参照峰，记录其余共有峰的保
         S5       191129        湖北房县宋家店村         栽培3年生      留时间和峰面积。结果显示，19个共有峰的相对保留时
         S6       191015        湖北房县草池垭村         栽培3年生      间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％，表明供试品溶液
         S7       201209        湖北房县彭家湾          栽培4年生      在室温放置12 h内稳定。
         S8       181015        湖北房县木瓜村          栽培3年生
         S9       181017        湖北房县顺发基地         栽培3年生      2.2.6  重复性试验       取虎杖饮片粉末（编号 Y1），按
         S10      191019        湖北房县彭家湾          栽培3年生     “2.2.1”项下方法平行制备 6 份供试品溶液，按“2.2.3”项


        ·570 ·  China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5                                    中国药房    2022年第33卷第5期
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