Page 70 - 《中国药房》2022年5期

中药谱效关系研究将指纹图谱与中药药效相结合， 2.2 色谱条件
可更全面评价中药药效物质基础 。基于此，本研究采 色谱柱为YMC C30 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；以二氯
[8]
用高效液相色谱（HPLC）法建立枸杞类胡萝卜素的指纹 甲烷-甲基叔丁基醚（体积比 1 ∶ 1）为流动相 A、甲醇-乙
图谱，并借助灰色关联分析，研究指纹图谱中共有峰与 腈-水（体积比84 ∶ 11 ∶ 5）为流动相B，进行梯度洗脱（0～
抗氧化活性的谱效关系，以期为进一步阐明枸杞类胡萝 22 min，70％B；22～50 min，50％B；50～55 min，70％B）；
卜素抗氧化活性的药效物质基础提供参考。 流速为 1.0 mL/min，柱温为 25 ℃，检测波长为 517 nm，
1 材料 进样量为20 μL。
1.1 主要仪器 2.3 溶液的制备
本研究主要仪器有1206型HPLC仪（美国Agilent公 2.3.1 供试品溶液的制备 精密称取枸杞类胡萝卜素
司），SB25-12DTDN 型数控超声波清洗器（宁波新芝生 粉末 1.0 g 置于锥形瓶中，加入二氯甲烷 5 mL 溶解，滤
物科技股份有限公司），SQP 型万分之一电子分析天 过；取滤液 2 mL，置于 10 mL 量瓶中，以无水乙醇定容，
平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]，TU-1810 型紫 摇匀，即得供试品溶液。
外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。 2.3.2 混合对照品溶液的制备 精密称取玉米黄质双
1.2 主要药品与试剂 棕榈酸酯、玉米黄质对照品各1.0 mg，置于同一10 mL量
1，1- 二 苯 基 -2- 三 硝 基 苯 肼（DPPH）试 剂（批 号 瓶中，以无水乙醇溶解并定容，即得混合对照品溶液。
201424）、玉 米 黄 质 双 棕 榈 酸 酯 对 照 品（ 批 号 2.4 方法学考察
Z08M10H82528，纯度≥95％）、玉米黄质对照品（批号 2.4.1 精密度考察 取枸杞类胡萝卜素粉末（编号 S18
K13D8S50509，纯 度 ≥85％）、叶 黄 素 对 照 品（批 号 样品）1.0 g，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液，再按
F07A9M66853，纯度≥98％）、β-类胡萝卜素对照品（批 “2.2”项下色谱条件连续进样 6 次。以 4 号峰（玉米黄质
号 T28A9H60248，纯度≥98％）均购自上海源叶生物技 双棕榈酸酯，该峰分离度良好、峰面积大且稳定）为参
术科技有限公司。甲醇、乙腈为色谱纯，二氯甲烷、无水 照，记录各共有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果
乙醇、丙酮为分析纯，水为纯净水。 显示，各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 0.4％，相
本研究采集了不同产地枸杞样品 34 批（编号 S1～ 对峰面积的RSD均小于3.2％，表明仪器精密度良好。
S34，样品来源信息见表1），经北京中医药大学中药学院 2.4.2 稳定性考察 取枸杞类胡萝卜素粉末（编号 S18
孙志蓉教授鉴定为茄科植物枸杞 L. barbarum L.的干燥 样品）1.0 g，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液，于室温
成熟果实。 放置 0、2、4、8、12、24 h 后，按“2.2”项下色谱条件进样测
表1 枸杞样品来源信息 定。以4号峰为参照，记录各共有峰的相对峰面积和相
编号 产地 编号 产地 编号 产地 对保留时间。结果显示，各共有峰相对保留时间的RSD
S1 甘肃 S13 宁夏 S25 青海 均小于 0.6％，相对峰面积的 RSD 均小于 3.1％，表明供
S2 甘肃 S14 宁夏 S26 青海
S3 甘肃 S15 宁夏 S27 青海 试品溶液在室温放置24 h内稳定性良好。
S4 甘肃 S16 宁夏 S28 青海 2.4.3 重复性考察 取枸杞类胡萝卜素粉末（编号 S18
S5 甘肃 S17 宁夏 S29 青海 样品）1.0 g，共 6 份，按“2.3.1”项下方法平行制备供试品
S6 甘肃 S18 宁夏 S30 青海
S7 甘肃 S19 宁夏 S31 青海 溶液，按“2.2”项下色谱条件进样测定。以 4 号峰为参
S8 甘肃 S20 宁夏 S32 青海 照，记录各共有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果
S9 甘肃 S21 宁夏 S33 新疆 显示，各共有峰相对保留时间的 RSD 均小于 1.5％，相
S10 内蒙古 S22 宁夏 S34 新疆
S11 内蒙古 S23 宁夏 对峰面积的RSD均小于4.3％，表明该方法重复性良好。
S12 内蒙古 S24 宁夏 2.5 枸杞类胡萝卜素HPLC指纹图谱的生成、相似度评
2 方法与结果 价和共有峰指认
2.1 枸杞类胡萝卜素的制备 2.5.1 指纹图谱的生成 取 34 批枸杞类胡萝卜素粉末
将枸杞药材粉碎，过筛，取细粉2 g ，精密称定，加正 各1.0 g，按“2.3.1”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2”
己烷-无水乙醇-丙酮-二氯甲烷（体积比 10 ∶ 6 ∶ 7 ∶ 7）40 项下色谱条件进样测定。采用《中药色谱指纹图谱相似
mL，超声（频率 60 kHz，功率 300 W）20 min，振摇 30 度评价系统》（2012版）对34批枸杞类胡萝卜素的HPLC
min，在避光条件下皂化 12 h；收集上层溶液，下层样品 图进行分析，得到枸杞类胡萝卜素HPLC对照指纹图谱
重复上述提取工艺，直至下层无色；合并多次提取的上 （R）和叠加指纹谱图，详见图1、图2。
层溶液，加入20 g无水硫酸钠脱水过滤，于35 ℃浓缩蒸 2.5.2 相似度评价 采用《中药色谱指纹图谱相似度评
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干，再于真空冻干成粉末，即得枸杞类胡萝卜素 。 价系统》（2012 版）进行相似度评价。结果显示，34 批枸

·576 · China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 5 中国药房 2022年第33卷第5期