Page 63 - 《中国药房》2022年3期

仙鹤草不同提取部位抗肝纤维化作用的研究 Δ

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李 麟 ，饶春燕 ，雷青松 ，黄 祎 ，刘华宝 ，张长江 （1.重庆市中医院肝病科，重庆 400021；2.重庆大学附
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属肿瘤医院肿瘤放射治疗中心，重庆 400030）
中图分类号 R285.5 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）03-0313-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.03.10
摘 要 目的 研究仙鹤草不同提取部位的抗肝纤维化作用。方法 以大鼠肝星状细胞 HSC-T6 为研究对象，检测不同质量浓度
（0.5、5、50、500、5 000 μg/mL，均以生药量计）的仙鹤草不同提取部位（总提取物、乙酸乙酯部位、石油醚部位和正丁醇部位）对该细
胞增殖的影响（作用24、48、72 h后），并计算半数抑制浓度（IC50 ）。采用血小板衍生生长因子（PDGF-BB）刺激HSC-T6细胞以复制
肝纤维化细胞模型，采用流式细胞仪检测仙鹤草不同提取部位对HSC-T6细胞凋亡的影响，采用酶联免疫吸附试验检测细胞培养
上清液中Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达水平，采用 Western blot 法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Col-Ⅰ、B 细胞淋巴瘤 2
（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶3（caspase-3）的表达水平。结果 仙鹤草总提取物、乙酸乙酯部位、石油醚部位和正丁
醇部位均可显著升高 HSC-T6 细胞凋亡率（P＜0.01）；作用 24 h 时，上述各部位的 IC50分别为 50.17、20.75、5.82、4.09 μg/mL。经
PDGF-BB 干预后，HSC-T6 细胞培养上清液中 Col-Ⅰ和细胞中 Col-Ⅰ、α-SMA、Bcl-2、Bax、caspase-3 蛋白表达水平均显著升高
（P＜0.01）；经仙鹤草不同提取部位干预后，HSC-T6细胞培养上清液或细胞中上述蛋白表达水平大部分均较PDGF-BB组显著逆
转（P＜0.05或P＜0.01），其中仙鹤草正丁醇部位干预作用最为显著。结论 仙鹤草不同提取部位均可抑制HSC-T6细胞增殖，并诱
导其凋亡；正丁醇部位可能是仙鹤草发挥抗肝纤维化作用的有效部位。
关键词 仙鹤草；肝纤维化；细胞凋亡；有效部位

Study on the different extraction fractions of Agrimonia pilosa against hepatic fibrosis
LI Lin ，RAO Chunyan ，LEI Qingsong ，HUANG Yi ，LIU Huabao ，ZHANG Changjiang（1. Dept. of Hepatic
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Diseases，Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital，Chongqing 400021，China；2. Oncology Radiotherapy
Center，Chongqing University Cancer Hospital，Chongqing 400030，China）
ABSTRACT OBJECTIVE To study different extraction fractions of Agrimonia pilosa against hepatic fibrosis. METHODS Using
hepatic stellate cells HSC-T6 of rats as objects，the effects of different extraction fractions（total extract，ethyl acetate fraction，
petroleum ether fraction and n-butanol fraction）with different concentrations（0.5，5，50，500，5 000 μg/mL，calculated by raw
drug） of A. pilosa on the proliferation of HSC-T6 cells were detected （after treated for 24，48，72 h）；median inhibition
concentration（IC50 ）was also caculated. Platelet-derived growth factor（PDGF-BB）was used to induce the activation of HSC-T6
cells to establish hepatic fibrosis cell model. Flow cytometry was used to detect the effects of different extraction fractions of A.
pilosa on apoptosis of HSC-T6 cells. The expression of collagen Ⅰ（Col-Ⅰ）in the supernatant was detected by enzyme linked
immunosorbent assay. The expressions of α-smooth muscle actin（α-SMA），Col-Ⅰ，B-cell lymphoma-2（Bcl-2），Bcl-2-associated
X protein（Bax）and caspase-3 were detected by Western blot assay. RESULTS Total extract，ethyl acetate fraction，petroleum
ether fraction and n-butanol fraction of A. pilosa could significantly increase the apoptotic rate of HSC-T6 cells（P＜0.01）. After
treated for 24 h，IC50 of above fractions were 50.17，20.75，5.82，4.09 μg/mL，respectively. After intervened with PDGF-BB，the
expression of Col-Ⅰ in supernatant of HSC-T6 cells as well as protein expression of Col-Ⅰ，α-SMA，Bcl-2，Bax and caspase-3 in
HSC-T6 cells were increased significantly（P＜0.01）. After intervened with different extraction fractions of A. pilosa，most of the
expressions of above proteins in HSC-T6 cell culture supernatant or cells were significantly reversed compared with PDGF-BB
group （P＜0.05 or P＜0.01）， and the intervention effect of n-butanol fraction of A. pilosa was the most significant.
CONCLUSIONS Different extraction fractions of A. pilosa can inhibite the proliferation of HSC-T6 cells and induce their
apoptosis；n-butanol fraction from A. pilosa may be an effective fraction to exert the effect of anti-hepatic fibrosis.
KEYWORDS Agrimonia pilosa； hepatic fibrosis； cell
Δ 基金项目：重庆市自然科学基金面上项目（No.cstc2019jcyj-
apoptosis；effective fraction
msxmX0049）；重 庆 市 技 术 创 新 与 应 用 发 展 专 项 重 点 项 目（No.
cstc2019jscx-dxwtBX0023）；重庆市科研机构绩效激励引导专项（No.
jxyn2020-4） 肝纤维化是指由各种致病因子所致肝内结缔组织
＊主治医师，博士。研究方向：中医药防治慢性肝病。E-mail：
异常增生，导致肝内弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理
lilin515626@126.com
过程，表现为肝功能减退、门静脉高压等，可导致肝硬
# 通信作者：副主任医师，硕士。研究方向：中医药防治慢性肝
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病。电话：023-67667190。E-mail：changjiang78@163.com 化、肝癌等严重后果 。目前，肝纤维化的治疗策略主要

中国药房 2022年第33卷第3期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 3 ·313 ·