Page 32 - 《中国药房》2022年3期

芦醇-4′-O-（6″-没食子酰基）-葡萄糖苷适量，精密称定， 3 300
3 000
用甲醇溶解并稀释，配制成质量浓度分别为 0.190 1、 2 700 S15
S14
0.165 3、0.082 6、0.082 6、0.107 4、0.082 6、0.082 6、0.082 6、 2 400 S13
S12
2 100 S11
0.082 6、0.082 6、0.107 4、0.082 6、0.082 6、0.148 8、0.082 6、 U/mV 1 800 S10
S9
0.061 1、0.061 1 mg/mL 的混合对照品溶液，过 0.22 μm 1 500 S8 S7
1 200
S6
微孔滤膜，即得。 900 S5
600 S4
2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取饮片粉末（过三号 300 S3 S2
0 S1
筛）1.0 g，置于50 mL具塞锥形瓶中，加甲醇25 mL，称定
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76
质量，超声（600 W，40 kHz）30 min后，补足减失质量，摇 t/min
A.掌叶大黄
匀，过滤，取滤液，用0.22 μm微孔滤膜过滤，即得。
3 400
2.2.3 精密度试验 精密称取S6样品，按“2.2.2”项下方 3 200
3 000
2 800 ZS15
法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样 6 2 600 ZS14
2 400 ZS13
次，以没食子酸为参照峰，计算各共有峰的相对保留时 2 200 ZS12
2 000
ZS11
ZS10
1 800
间和相对峰面积。结果，各共有峰相对保留时间和相对 U/mV 1 600 ZS9
ZS8
1 400
1 200 ZS7
峰面积的RSD均小于3.00％（n＝6），表明仪器进样精密 1 000 ZS6
800 ZS5
度良好。 600 ZS4
ZS3
400
200 ZS2
2.2.4 稳定性试验 精密称取S6样品，按“2.2.2”项下方 0 ZS1
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76
法制备供试品溶液，分别在室温下放置0、2、4、6、12、24 h t/min
时按“2.1”项下色谱条件进样分析，以没食子酸为参照 B.熟大黄
峰，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结 图1 各批次掌叶大黄和熟大黄样品的叠加指纹图谱
果，各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于 300 29
300
3.00％（n＝6），表明供试品溶液在室温24 h内是稳定的。 270 14 32 49
2.2.5 重复性试验 精密称取S6样品6份，按“2.2.2”项 240 5 27 45
210 60
下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样分 180
析，以没食子酸为参照峰，计算各共有峰的相对保留时 U/mV 150 16 22 23 25 30 38 43 59
120
间和相对峰面积。结果，各共有峰相对保留时间和相对 90 4 8 12 17 24 33 34 61
60 6 11 15 19 36 41 42 48 50 55
峰面积的 RSD 均小于 3.00％（n＝6），表明该方法重复 30 1 9 13 20 28 35 39 40 44 52 54 56 57 58
性好。 0
0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76
2.2.6 各批次掌叶大黄和熟大黄 HPLC 指纹图谱建立、 t/min
A.掌叶大黄
相似度评价及色谱峰指认 取 15 批掌叶大黄、15 批熟 5
440
大黄样品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按
400
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。将所得色谱 360 60
320 59
数据导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 280
版）》，采用中位数法，设定时间窗为 0.20 min，分别以 U/mV 240
200
S6、ZS6为参照图谱，经多点校正后，生成指纹图谱共有 160 1 7 27 49
120 8 10 17 26 37 50 61
模式，并以此作为对照指纹图谱（R、R′）。结果显示，掌 80 2 3 9 12 18 19 22 24 2930 31 34 39 42 45 46 54 46 58
43
叶大黄有48个共有峰，熟大黄有47个共有峰，详见图1、 40 21 23 25 28 32 35 41 44 47 51 53 57 62
0
图2。 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 40 44 48 52 56 60 64 68 72 76
t/min
采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012 B.熟大黄
版）》，对掌叶大黄酒蒸前后的各样品指纹图谱进行相似 图2 掌叶大黄和熟大黄样品的对照指纹图谱
度评价，结果见表 2。甘肃、四川产掌叶大黄相似度为 根据掌叶大黄、熟大黄样品的 HPLC 指纹图谱生成
0.779～0.840，青海产掌叶大黄相似度为 0.949～0.978， 结果，选择图谱中峰面积较大且分离度较好的色谱峰作
甘肃、青海、四川产熟大黄相似度为 0.873～0.972，表明 为特征峰。结果显示，掌叶大黄、熟大黄共有62个特征
各产区的掌叶大黄具有相似的色谱信息，且甘肃、四川 峰，与混合对照品溶液HPLC图（图3）进行比对，共指认
产掌叶大黄与青海产掌叶大黄之间存在着一定差异，熟 出17个色谱峰，分别为5号峰（没食子酸）、14号峰（儿茶
大黄的质量则较均一稳定。 素）、22 号峰（白藜芦醇-4′-O-葡萄糖苷）、24 号峰（异莲

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