Page 71 - 《中国药房》2022年2期
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香霉素组（200 mg/kg 番石榴叶总黄酮+1 mg/kg 茴香霉                 然后转膜，以 5％脱脂奶粉封闭 1 h；以 TBST 洗膜 10
        素）、番石榴叶总黄酮组（200 mg/kg），每组 11 只。茴香                  min × 4 次 ，加 入 p38 MAPK、p-p38 MAPK、ERK1/2、
        霉素剂量参考文献[8]设置，番石榴叶总黄酮剂量参考文                         p-ERK1/2、JNK、p-JNK、β-actin 一 抗（稀 释 度 均 为 1 ∶
        献[9]设置。正常组大鼠术中仅分离腹主动脉，不作其他                         1 000），4 ℃孵育过夜；以 TBST 洗膜 10 min×4 次，加入
        处理。正常组、模型组大鼠灌胃 3％羟甲基纤维素钠                           二抗（稀释度为 1 ∶ 2 500），室温孵育 2 h；以 TBST 洗膜
        溶液，其余各组大鼠灌胃相应药液，灌胃体积均为 10                          10 min×4次，加入ECL试剂显色5 min，采用生物分子成
        mL/kg，每天1次，连续6周。                                   像仪显影曝光。采用 Image J v1.8.0 软件对条带灰度值
        2.2 大鼠血压水平的检测                                      进行分析，以目的蛋白与内参β-actin灰度值的比值表示
            末次给药后24 h，采用尾袖法将各组大鼠的尾部连                       目的蛋白的表达水平。
        接至小动物无创血压仪，然后检测各组大鼠的收缩压、                           2.8 统计学方法
        舒张压、平均动脉压（平行测定3次，取平均值）。                                采用SPSS 19.0统计软件对数据进行分析。数据以
        2.3 大鼠心肌肥厚指标的检测                                    x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两
                                                           比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。
            血压检测结束后，各组随机取 5 只大鼠，称定体质
        量，随后腹腔注射2％戊巴比妥钠进行麻醉，快速断头处                          3 结果
        死，打开胸腔取出心脏，以生理盐水冲洗，残余液体以滤                          3.1 番石榴叶总黄酮对大鼠血压水平的影响
                                                               与正常组比较，模型组和茴香霉素组大鼠的收缩
        纸吸除干净，然后称定全心质量；将心脏置于冰块上，去
                                                           压、舒张压、平均动脉压水平均显著升高（P＜0.05）；与
        除大血管、心包组织，沿室间隔去除心房、右心室，称定
                                                           模型组和茴香霉素组比较，番石榴叶总黄酮组、番石榴
        左心室湿质量；分别计算心脏指数（心脏指数＝全心质
                                                           叶总黄酮+茴香霉素组大鼠的上述血压水平均显著降低
        量/体质量）、左心室指数（左心室指数＝左心室湿质量/
                                                           （P＜0.05）；与番石榴叶总黄酮+茴香霉素组比较，番石
        体质量）。
                                                           榴叶总黄酮组大鼠的上述血压水平均显著降低（P＜
        2.4  取材及处理
                                                           0.05）。结果见表1。
            从各组剩余大鼠中随机取 5 只，腹腔注射 2％戊巴
                                                             表1   各组大鼠血压水平的检测结果（x±±s，mmHg）
        比妥钠进行麻醉，快速断头处死，迅速打开胸腔，剥取心
                                                            组别             n    收缩压        舒张压      平均动脉压
        脏，沿房室环剪除心房及右心室游离壁，即得心肌组                             正常组            10  120.62±2.02  88.62±3.26  102.32±2.85
        织。将各组大鼠的心肌组织分为 3 份，其中 2 份置于液                        模型组            11  152.13±4.25 a  120.13±3.05 a  134.21±2.69 a
        氮中冷冻保存，1份置于4％多聚甲醛中固定，备用。                            茴香霉素组          11  168.62±5.21 a  129.65±4.25 a  146.32±3.23 a
                                                            番石榴叶总黄酮组       11  130.65±2.12 bcd  94.21±1.68 bcd  114.21±1.62 bcd
        2.5  大鼠心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平的检测                   番石榴叶总黄酮+茴香霉素组  11  141.62±3.15 bc  112.51±2.12 bc  128.12±2.03 bc
            采用酶联免疫吸附试验进行检测。各组分别取1份                             a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与茴香霉
        冻存的心肌组织，以生理盐水冲洗，冰浴条件下研磨，以                          素组比较，P＜0.05；d：与番石榴叶总黄酮+茴香霉素组比较，P＜0.05
        制备 10％心肌组织匀浆；将组织匀浆以 10 000 r/min 离                 3.2  番石榴叶总黄酮对大鼠心肌肥厚指标的影响
        心 15 min，取上清液，按酶联免疫吸附试验试剂盒说明                           与正常组比较，模型组和茴香霉素组大鼠心脏指
        书方法操作，采用酶标仪于450 nm波长处测定大鼠心肌                        数、左心室指数均显著升高（P＜0.05）；与模型组和茴香
        组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。                            霉素组比较，番石榴叶总黄酮组、番石榴叶总黄酮+茴香
        2.6 大鼠心肌组织病理形态学观察                                  霉素组大鼠心脏指数、左心室指数均显著降低（P＜
            取各组固定于 4％多聚甲醛中的心肌组织适量，以                        0.05）；与番石榴叶总黄酮+茴香霉素组比较，番石榴叶
        流水冲洗，再进行乙醇梯度脱水、二甲苯透明、石蜡包                           总黄酮组大鼠心脏指数、左心室指数均显著降低（P＜
                                                           0.05）。结果见表2。
        埋、切片（厚度为4 μm）。将所有切片经乙醇梯度脱蜡后
                                                           表 2   各组大鼠心肌肥厚指标的检测结果（x±±s，n＝5，
        进行 HE 染色，然后于光学显微镜下观察各组大鼠心肌
                                                                 mg/g）
        组织的病理形态学变化。
        2.7  大鼠心肌组织中p38 MAPK信号通路相关蛋白表                       组别                      心脏指数          左心室指数
                                                            正常组                     3.08±0.12     1.76±0.11
        达水平的检测                                              模型组                     4.31±0.32 a   2.91±0.31 a
            采用 Western blot 法进行检测。取各组另 1 份冻存                茴香霉素组                   4.95±0.42 a   3.85±0.34 a
                                                            番石榴叶总黄酮组                3.34±0.16 bcd  2.03±0.18 bcd
        的心肌组织适量，加入裂解液裂解，以14 000 r/min离心                     番石榴叶总黄酮+茴香霉素组           3.75±0.25 bc  2.38±0.24 bc
        15 min，取上清液，以 BCA 法测定蛋白含量。蛋白经煮                         a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05；c：与茴香霉
        沸变性后，进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，                          素组比较，P＜0.05；d：与番石榴叶总黄酮+茴香霉素组比较，P＜0.05


        中国药房    2022年第33卷第2期                                               China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 2  ·193 ·
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