Page 66 - 《中国药房》2022年2期

2.5.2 线性关系考察 精密称取花椒毒素对照品0.745
mg、佛 手 柑 内 酯 对 照 品 2.838 mg、欧 前 胡 素 对 照 品
7.771 mg、蛇床子素对照品 35.594 mg，置于 20 mL 量瓶
中，加甲醇溶解并定容，作为混合对照品贮备液。精密
量取上述混合对照品贮备液 5、2、1、0.4、0.2 mL，分别置
于20 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得系列浓度的
混合对照品溶液。精密吸取上述混合对照品贮备液及
系列浓度的混合对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样
测定，记录峰面积。以峰面积（y）为纵坐标、对照品质量
浓度（x，μg/mL）为横坐标绘制标准曲线，所得回归方程
及线性范围如表3所示。
表3 花椒毒素等4种成分的线性回归方程及线性范围
待测成分 回归方程 r 线性范围，μg/mL
花椒毒素 y＝30.256 0x－1.986 2 0.999 9 0.365～36.505
佛手柑内酯 y＝21.026 0x－5.437 9 0.999 9 1.391～139.062
欧前胡素 y＝47.784 6x－157.503 1 0.999 8 3.870～386.996
蛇床子素 y＝5.352 9x－8.842 6 1.000 0 17.708～1 770.802
2.5.3 精密度试验 取“2.2.1”项下混合对照品溶液适
量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面
积。结果显示，花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素和蛇床
子 素 峰 面 积 的 RSD 分 别 为 0.83％ 、1.41％ 、0.12％ 、
0.24％（n＝6），表明仪器精密度良好。
2.5.4 重复性试验 取同批次蛇床子药材粉末（编号
S8）6 份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按
“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法计
算含量。结果显示，花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、
蛇床子素含量的 RSD 分别为 0.50％、0.71％、0.55％、
0.74％（n＝6），表明该方法重复性良好。
2.5.5 稳定性试验 取蛇床子药材（编号 S8）供试品溶
液适量，分别在室温下放置0、2、4、6、8、12 h时按“2.1”项
下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，花椒毒
素、佛手柑内酯、欧前胡素和蛇床子素峰面积的 RSD 分
别为 0.38％、0.49％、0.69％、0.28％（n＝6），表明供试品
溶液在室温下放置12 h内稳定性良好。
2.5.6 加样回收率试验 取已知含量的蛇床子药材粉
末（编号S8）约0.15 g，精密称定，按样品中4种成分已知
量的0.5、1、1.5倍加入花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、
蛇床子素的混合对照品溶液（配制方法同“2.5.2”项），每
种质量浓度平行 3 份。按“2.2.2”项下方法制备供试品
溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并
计算加样回收率，结果见表 4。结果显示，花椒毒素、
佛手柑内酯、欧前胡素、蛇床子素的加样回收率分别为
100.26％ ～107.45％ 、101.47％ ～106.01％ 、98.42％ ～
103.11％、98.44％～103.11％，RSD均小于3.0％（n＝9），
表明该方法准确度良好。
2.5.7 相对校正因子的计算 以蛇床子素为内参物，按
下式计算其他组分与内参物的相对校正因子（fk/m ）：fk/m＝
fk/fm＝（Wk×Am ）/（Wm×Ak ）。式中，Ak为内参物的峰面积，
Wk为内参物的质量浓度，Am为m组分的峰面积，Wm为m
[9]
组分的质量浓度 。根据“2.5.2”项下线性关系考察结
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表4 花椒毒素等4种成分的加样回收率试验结果
待测成分 已知量/mg 加入量/mg 测得量/mg 加样回收率/％ 平均加样回收率/％ RSD/％
花椒毒素 0.075 1 0.038 3 0.113 5 100.26 105.29 2.06
0.075 1 0.038 3 0.116 2 107.31
0.076 1 0.038 3 0.115 9 103.92
0.076 1 0.076 5 0.157 4 106.27
0.075 3 0.076 5 0.156 2 105.75
0.076 5 0.076 5 0.158 7 107.45
0.075 7 0.114 8 0.197 4 106.01
0.077 1 0.114 8 0.198 1 105.40
0.076 1 0.114 8 0.196 9 105.23
佛手柑内酯 0.173 4 0.088 2 0.266 9 106.01 103.58 1.65
0.173 4 0.088 2 0.264 8 103.63
0.175 6 0.088 2 0.265 5 101.93
0.175 6 0.176 5 0.362 1 105.67
0.173 8 0.176 5 0.354 0 102.10
0.176 6 0.176 5 0.362 5 105.33
0.174 8 0.264 7 0.447 9 103.17
0.178 0 0.264 7 0.446 6 101.47
0.175 6 0.264 7 0.447 9 102.87
欧前胡素 0.662 8 0.336 0 0.998 7 99.97 100.16 1.43
0.662 8 0.336 0 0.993 7 98.48
0.670 8 0.336 0 1.001 5 98.42
0.670 8 0.671 9 1.363 6 103.11
0.664 1 0.671 9 1.332 8 99.52
0.674 8 0.671 9 1.351 8 100.76
0.668 1 1.007 9 1.685 0 100.89
0.680 2 1.007 9 1.684 1 99.60
0.670 8 1.007 9 1.685 6 100.68
蛇床子素 2.701 1 1.366 4 4.067 6 100.01 100.17 1.43
2.701 1 1.366 4 4.047 1 98.51
2.733 8 1.366 4 4.078 9 98.44
2.733 8 2.732 8 5.551 6 103.11
2.706 5 2.732 8 5.426 2 99.52
2.750 2 2.732 8 5.503 7 100.76
2.722 9 4.099 2 6.858 9 100.90
2.772 0 4.099 2 6.855 2 99.61
2.733 8 4.099 2 6.861 2 100.69
果，以对照品的质量浓度及其对应色谱峰的峰面积分别
计算花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素的相对校正因子，
结果见表5。结果显示，花椒毒素、佛手柑内酯和欧前胡
素的平均相对校正因子分别为0.181 4、0.258 6、0.731 6，
RSD分别为1.14％、0.30％、2.51％（n＝6）。
表5 花椒毒素等3种成分的相对校正因子
蛇床子素质量浓度/（μg/mL） f 蛇床子素/花椒毒素 f 蛇床子素/佛手柑内酯 f 蛇床子素/欧前胡素
17.708 0.178 7 0.258 0 0.716 3
35.416 0.178 7 0.257 4 0.732 3
88.540 0.183 1 0.258 7 0.726 3
177.080 0.182 7 0.258 7 0.709 5
442.700 0.182 4 0.259 1 0.746 6
1 770.802 0.182 5 0.259 6 0.758 3
平均值 0.181 4 0.258 6 0.731 6
RSD/％ 1.14 0.30 2.51
2.5.8 耐用性考察 精密吸取“2.2.1”项下混合对照品
溶液 1 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，分别考察
Waters H-Class、Agilent 1290、Thermo Vanquish型超高效
液相色谱仪，YMC Trait C18 （2.1 mm×100 mm，1.9 μm）、
Waters BEH C18 （2.1 mm×100 mm，1.7 μm）、Agilent SB
中国药房 2022年第33卷第2期