Page 61 - 《中国药房》2022年1期
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药材质量得分=(单根药材质量/单根药材质量均值)×
2 0.55×100,人参皂苷 Rd 含量得分=(人参皂苷 Rd 含量/
1 人参皂苷Rd含量均值)×0.32×100;总得分=主根直径得
分+单根药材质量得分+人参皂苷Rd含量得分。将K-均
0
t[2] 值聚类得到的中心值代入总得分公式,计算出各等级间
-1
总得分分界值分别为 135.40、61.82。因此,本研究将西
-2
洋参的等级标准制定如下:特等药材的总得分>135.40;
-3
-6 -4 -2 0 2 4 一等药材的总得分为 61.82~135.40;二等药材的总得
t[1]
分<61.82。按照此标准,样品 S8、S9、S11、S12、S13、
图3 PLS-DA得分图
S19、S21、S23 被划分为特等;样品 S2、S3、S4、S6、S10、
变量投影重要性分析值(variable importance in pro- S14、S17、S22 被划分为一等;样品 S1、S5、S7、S15、S16、
jection,VIP)可用来描述 PLS-DA 分析中变量的变异程 S18、S20、S24被划分为二等。
度:若某变量的 VIP>1,说明对应变量的变异程度较
3 基于HPLC-ELSD指纹图谱的西洋参药材质量
[21]
大 。本研究提取了模型中 8 个指标的 VIP,结果见图
评价
4。结果显示,在8个变量指标中,单根药材质量(VIP=
3.1 色谱条件
1.505 8)、主根直径(VIP=1.449 4)和人参皂苷 Rd 含量
除梯度洗脱时增加了 1 个时段(70~100 min,40%
(VIP=1.005 1)的 VIP 均大于 1,表明上述 3 个指标是影
A→100%A)外,其余色谱条件均与“2.3.3”项下相同。
响西洋参等级差异的重要指标。
3.2 方法学考察
依据 2020 版《中国药典》(四部)分析方法验证指
2.0
[1]
导原则进行方法学考察 。因 17 号峰(人参皂苷 Rb1)
1.5
的对称性和分离度均良好,故将其作为参照峰(S)计算
VIP 1.0 各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示,
精密度试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的
0.5
RSD 分别小于 1.95%、2.38%(n=6),重复性试验中各
0 共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别小于
单根药材质量 主根直径 人参皂苷Rd 人参皂苷Rc 主根长度 拟人参皂苷F11 人参皂苷Re 人参皂苷Rg1 1.05%、2.31%(n=6),稳定性试验中各共有峰相对保
图4 VIP柱状载荷图 留时间和相对峰面积的 RSD 分别小于 1.33%、2.92%
(n=6)。
2.4.4 西 洋 参 药 材 的 等 级 划 分 标 准 根 据 PCA 与 3.3 西洋参药材HPLC-ELSD指纹图谱的建立
PLS-DA结果,本研究拟将西洋参药材划分为3个等级, 取24批西洋参药材,按“2.3.1”项下方法制备样品溶
分别为特等、一等和二等;再根据VIP结果,确定以单根 液,然后按“2.3.3”项下色谱条件进样测定,记录色谱
药材质量、主根直径和人参皂苷 Rd 含量为西洋参药材 图。将24批西洋参药材的色谱图导入《中药色谱指纹图
等级划分的参考指标。采用SPSS 23.0软件对24批西洋 谱相似度评价系统(2012版)》中,以样品S1的色谱图为
参药材中上述3个指标进行K-均值聚类分析,得到等级
参照图谱,设置时间窗宽度为 0.1 min,采用多点校正的
标准制定中各指标的中心值,结果见表5。
方式生成 24 批西洋参药材的 HPLC-ELSD 叠加指纹图
表5 3个重要参考指标的K-均值聚类中心值
谱,并采用中位数法生成24批西洋参药材的对照指纹图
中心值 主根直径/cm 单根药材质量/g 人参皂苷Rd含量/(mg/g) 谱(R)。结果,在 24 批西洋药材中共标定出 25 个共有
1 1.10 5.89 4.23
2 0.94 3.64 1.36 峰。通过与混合对照品溶液图谱(图1B)比对,指认出了
采用SPSSAU 统计分析软件中CRITIC权重法对上 其中的 7 种成分,分别为峰 6(人参皂苷 Rg1 )、峰 7(人参
述 3 个指标赋予权重系数,得到主根直径、单根药材质 皂苷Re)、峰16(拟人参皂苷F11)、峰17(人参皂苷Rb1 )、
量、人参皂苷 Rd 含量的权重系数分别为 0.13、0.55、 峰 18(人参皂苷 Rc)、峰 19(人参皂苷 Rb2 )和峰 22(人参
0.32。根据各指标的权重系数,建立综合评分公式:主根 皂苷Rd)。24批西洋参药材的HPLC-ELSD叠加指纹图
直径得分=(主根直径/主根直径均值)×0.13×100,单根 谱及对照指纹图谱R见图5。
中国药房 2022年第33卷第1期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1 ·55 ·