Page 61 - 《中国药房》2022年1期
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药材质量得分=(单根药材质量/单根药材质量均值)×

             2                                             0.55×100,人参皂苷 Rd 含量得分=(人参皂苷 Rd 含量/
             1                                             人参皂苷Rd含量均值)×0.32×100;总得分=主根直径得
                                                           分+单根药材质量得分+人参皂苷Rd含量得分。将K-均
             0
           t[2]                                            值聚类得到的中心值代入总得分公式,计算出各等级间
           -1
                                                           总得分分界值分别为 135.40、61.82。因此,本研究将西
           -2
                                                           洋参的等级标准制定如下:特等药材的总得分>135.40;
           -3
             -6    -4     -2     0     2      4            一等药材的总得分为 61.82~135.40;二等药材的总得
                                t[1]
                                                           分<61.82。按照此标准,样品 S8、S9、S11、S12、S13、
                      图3 PLS-DA得分图
                                                           S19、S21、S23 被划分为特等;样品 S2、S3、S4、S6、S10、
            变量投影重要性分析值(variable importance in pro-         S14、S17、S22 被划分为一等;样品 S1、S5、S7、S15、S16、
        jection,VIP)可用来描述 PLS-DA 分析中变量的变异程                 S18、S20、S24被划分为二等。
        度:若某变量的 VIP>1,说明对应变量的变异程度较
                                                           3   基于HPLC-ELSD指纹图谱的西洋参药材质量
          [21]
        大 。本研究提取了模型中 8 个指标的 VIP,结果见图
                                                           评价
        4。结果显示,在8个变量指标中,单根药材质量(VIP=
                                                           3.1 色谱条件
        1.505 8)、主根直径(VIP=1.449 4)和人参皂苷 Rd 含量
                                                               除梯度洗脱时增加了 1 个时段(70~100 min,40%
       (VIP=1.005 1)的 VIP 均大于 1,表明上述 3 个指标是影
                                                           A→100%A)外,其余色谱条件均与“2.3.3”项下相同。
        响西洋参等级差异的重要指标。
                                                           3.2  方法学考察
                                                               依据 2020 版《中国药典》(四部)分析方法验证指
              2.0
                                                                                 [1]
                                                           导原则进行方法学考察 。因 17 号峰(人参皂苷 Rb1)
              1.5
                                                           的对称性和分离度均良好,故将其作为参照峰(S)计算
             VIP  1.0                                      各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示,
                                                           精密度试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的
              0.5
                                                           RSD 分别小于 1.95%、2.38%(n=6),重复性试验中各
               0                                           共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别小于
                   单根药材质量  主根直径  人参皂苷Rd  人参皂苷Rc  主根长度  拟人参皂苷F11  人参皂苷Re  人参皂苷Rg1  1.05%、2.31%(n=6),稳定性试验中各共有峰相对保



                      图4 VIP柱状载荷图                          留时间和相对峰面积的 RSD 分别小于 1.33%、2.92%
                                                           (n=6)。
        2.4.4  西 洋 参 药 材 的 等 级 划 分 标 准      根 据 PCA 与      3.3  西洋参药材HPLC-ELSD指纹图谱的建立
        PLS-DA结果,本研究拟将西洋参药材划分为3个等级,                            取24批西洋参药材,按“2.3.1”项下方法制备样品溶
        分别为特等、一等和二等;再根据VIP结果,确定以单根                         液,然后按“2.3.3”项下色谱条件进样测定,记录色谱
        药材质量、主根直径和人参皂苷 Rd 含量为西洋参药材                         图。将24批西洋参药材的色谱图导入《中药色谱指纹图
        等级划分的参考指标。采用SPSS 23.0软件对24批西洋                      谱相似度评价系统(2012版)》中,以样品S1的色谱图为
        参药材中上述3个指标进行K-均值聚类分析,得到等级
                                                           参照图谱,设置时间窗宽度为 0.1 min,采用多点校正的
        标准制定中各指标的中心值,结果见表5。
                                                           方式生成 24 批西洋参药材的 HPLC-ELSD 叠加指纹图
            表5 3个重要参考指标的K-均值聚类中心值
                                                           谱,并采用中位数法生成24批西洋参药材的对照指纹图
        中心值     主根直径/cm       单根药材质量/g    人参皂苷Rd含量/(mg/g)  谱(R)。结果,在 24 批西洋药材中共标定出 25 个共有
        1          1.10          5.89          4.23
        2          0.94          3.64          1.36        峰。通过与混合对照品溶液图谱(图1B)比对,指认出了
            采用SPSSAU 统计分析软件中CRITIC权重法对上                    其中的 7 种成分,分别为峰 6(人参皂苷 Rg1 )、峰 7(人参
        述 3 个指标赋予权重系数,得到主根直径、单根药材质                         皂苷Re)、峰16(拟人参皂苷F11)、峰17(人参皂苷Rb1 )、
        量、人参皂苷 Rd 含量的权重系数分别为 0.13、0.55、                    峰 18(人参皂苷 Rc)、峰 19(人参皂苷 Rb2 )和峰 22(人参
        0.32。根据各指标的权重系数,建立综合评分公式:主根                        皂苷Rd)。24批西洋参药材的HPLC-ELSD叠加指纹图
        直径得分=(主根直径/主根直径均值)×0.13×100,单根                     谱及对照指纹图谱R见图5。


        中国药房    2022年第33卷第1期                                                China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1  ·55 ·
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