Page 61 - 《中国药房》2022年1期

药材质量得分＝（单根药材质量/单根药材质量均值）×

2 0.55×100，人参皂苷 Rd 含量得分＝（人参皂苷 Rd 含量/
1 人参皂苷Rd含量均值）×0.32×100；总得分＝主根直径得
分+单根药材质量得分+人参皂苷Rd含量得分。将K-均
0
t[2] 值聚类得到的中心值代入总得分公式，计算出各等级间
－1
总得分分界值分别为 135.40、61.82。因此，本研究将西
－2
洋参的等级标准制定如下：特等药材的总得分＞135.40；
－3
－6 －4 －2 0 2 4 一等药材的总得分为 61.82～135.40；二等药材的总得
t[1]
分＜61.82。按照此标准，样品 S8、S9、S11、S12、S13、
图3 PLS-DA得分图
S19、S21、S23 被划分为特等；样品 S2、S3、S4、S6、S10、
变量投影重要性分析值（variable importance in pro- S14、S17、S22 被划分为一等；样品 S1、S5、S7、S15、S16、
jection，VIP）可用来描述 PLS-DA 分析中变量的变异程 S18、S20、S24被划分为二等。
度：若某变量的 VIP＞1，说明对应变量的变异程度较
3 基于HPLC-ELSD指纹图谱的西洋参药材质量
[21]
大 。本研究提取了模型中 8 个指标的 VIP，结果见图
评价
4。结果显示，在8个变量指标中，单根药材质量（VIP＝
3.1 色谱条件
1.505 8）、主根直径（VIP＝1.449 4）和人参皂苷 Rd 含量
除梯度洗脱时增加了 1 个时段（70～100 min，40％
（VIP＝1.005 1）的 VIP 均大于 1，表明上述 3 个指标是影
A→100％A）外，其余色谱条件均与“2.3.3”项下相同。
响西洋参等级差异的重要指标。
3.2 方法学考察
依据 2020 版《中国药典》（四部）分析方法验证指
2.0
[1]
导原则进行方法学考察 。因 17 号峰（人参皂苷 Rb1）
1.5
的对称性和分离度均良好，故将其作为参照峰（S）计算
VIP 1.0 各共有峰的相对保留时间和相对峰面积。结果显示，
精密度试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的
0.5
RSD 分别小于 1.95％、2.38％（n＝6），重复性试验中各
0 共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 分别小于
单根药材质量 主根直径 人参皂苷Rd 人参皂苷Rc 主根长度 拟人参皂苷F11 人参皂苷Re 人参皂苷Rg1 1.05％、2.31％（n＝6），稳定性试验中各共有峰相对保

图4 VIP柱状载荷图 留时间和相对峰面积的 RSD 分别小于 1.33％、2.92％
（n＝6）。
2.4.4 西 洋 参 药 材 的 等 级 划 分 标 准 根 据 PCA 与 3.3 西洋参药材HPLC-ELSD指纹图谱的建立
PLS-DA结果，本研究拟将西洋参药材划分为3个等级， 取24批西洋参药材，按“2.3.1”项下方法制备样品溶
分别为特等、一等和二等；再根据VIP结果，确定以单根 液，然后按“2.3.3”项下色谱条件进样测定，记录色谱
药材质量、主根直径和人参皂苷 Rd 含量为西洋参药材 图。将24批西洋参药材的色谱图导入《中药色谱指纹图
等级划分的参考指标。采用SPSS 23.0软件对24批西洋 谱相似度评价系统（2012版）》中，以样品S1的色谱图为
参药材中上述3个指标进行K-均值聚类分析，得到等级
参照图谱，设置时间窗宽度为 0.1 min，采用多点校正的
标准制定中各指标的中心值，结果见表5。
方式生成 24 批西洋参药材的 HPLC-ELSD 叠加指纹图
表5 3个重要参考指标的K-均值聚类中心值
谱，并采用中位数法生成24批西洋参药材的对照指纹图
中心值 主根直径/cm 单根药材质量/g 人参皂苷Rd含量/（mg/g） 谱（R）。结果，在 24 批西洋药材中共标定出 25 个共有
1 1.10 5.89 4.23
2 0.94 3.64 1.36 峰。通过与混合对照品溶液图谱（图1B）比对，指认出了
采用SPSSAU 统计分析软件中CRITIC权重法对上 其中的 7 种成分，分别为峰 6（人参皂苷 Rg1 ）、峰 7（人参
述 3 个指标赋予权重系数，得到主根直径、单根药材质 皂苷Re）、峰16（拟人参皂苷F11）、峰17（人参皂苷Rb1 ）、
量、人参皂苷 Rd 含量的权重系数分别为 0.13、0.55、 峰 18（人参皂苷 Rc）、峰 19（人参皂苷 Rb2 ）和峰 22（人参
0.32。根据各指标的权重系数，建立综合评分公式：主根 皂苷Rd）。24批西洋参药材的HPLC-ELSD叠加指纹图
直径得分＝（主根直径/主根直径均值）×0.13×100，单根 谱及对照指纹图谱R见图5。

中国药房 2022年第33卷第1期 China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1 ·55 ·