Page 65 - 《中国药房》2022年1期
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制作用，其作用机制可能与抑制肿瘤细胞迁移或侵袭、                           1.4 细胞
        促进细胞周期阻滞、诱导细胞凋亡以及干扰肿瘤细胞信                               本研究所用小鼠乳腺癌 4T1 细胞购自中国科学院
        号通路有关 。由于 API 的水溶性较差，对肿瘤细胞缺                        上海生科院细胞资源中心。
                  [6]
        乏选择性，且其半衰期短、生物利用度相对较低，极大地                          2 方法与结果

                               [7]
        限制了其进一步临床应用 。因此，有必要改善 API 的                        2.1 SF的制备
        溶解性和生物利用度，以获得更好的抗肿瘤效果。                                 参考文献[9]方法，将0.02 mol/L Na2CO3溶液加热煮
            丝素蛋白（silk fibroin，SF）作为一种天然高分子生                沸后，加入桑蚕丝素 1 g，继续煮沸 30 min，以 60 ℃水洗
        物材料，具有良好的生物相容性、降解性和可再生性；当                          涤3次，然后置于60 ℃烘箱中烘干过夜，即得丝素纤维；
        其作为药物载体时，可增强药物的控释性、减少药物的                           将丝素纤维溶于 9.3 mol/L LiBr 溶液中，置于 60 ℃烘箱
                        [8]
        副作用和用药次数 。基于此，本研究制备芹菜素丝素                           中烘干 2 h；将上述溶液转移至截留分子量为 14 000 Da
        蛋白（API@SF）纳米粒，并评价其安全性和抗肿瘤活性，                       的透析袋中透析 12 h，每隔 4 h 更换 1 次水，即得 SF 溶
        以期为该纳米粒的临床应用提供实验依据。                                液；将SF溶液置于60 ℃烘箱中烘干过夜，即得SF。
        1 材料                                               2.2 API@SF纳米粒的制备
        1.1 主要仪器                                               采用纳米沉淀法进行制备。称取 SF 适量，以水制
            本研究所用主要仪器有 UV-1200 型紫外可见分光                     成质量浓度为 1 mg/mL 的 SF 溶液；将一定量 API 加入 2
        光度计[尤尼柯（上海）仪器有限公司]、FA2004型万分之                      mol/L pH 8.0的磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，
        一电子天平（瑞士Mettler-Toledo公司）、pHS-3C型pH计               PBS）中溶解，再加入 5 倍体积的 SF 溶液，混合均匀，于
       （上海仪电科学仪器股份有限公司）、KQ-500DB 型数控                       4 ℃条件下静置 4 h 后，置于 40 ℃水浴条件下磁力搅拌
        超声仪（昆山市超声仪器有限公司）、1510-02820C 型酶                    12 h；以 12 000 r/min 离 心 3 min，弃 上 清 液 ，即 得
        标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司）、JEM-F200 型      API@SF纳米粒。
        透射电子显微镜（日本Jeol公司）、CKX53型倒置荧光显                      2.3  API的含量测定
                                                                                                   [7]
        微镜（日本Olympus公司）、Mastersizer-2000型粒度分析                  采用紫外可见分光光度法测定API的含量 。
        仪（英国Malvern公司）。                                    2.3.1  溶液制备      精确称取 API 对照品适量，置于 10
        1.2  主要药品与试剂                                       mL 量瓶中，加入 30％乙醇-DMSO 混合溶液（9 ∶ 1，V/V，
            溴化锂（LiBr）、API 对照品、二甲基亚砜（dimethyl               下同），超声（频率 40 kHz，功率 200 W，下同）溶解并稀
        sulfoxide，DMSO）（批号分别为 C12143081、A800499、           释成质量浓度为 250 μg/mL 的 API 贮备液。另取“2.2”
        20191228，纯度均大于 98.0％）均购自上海麦克林生化                    项下的 API@SF 纳米粒适量，置于 10 mL 量瓶中，加入
        科技有限公司；API 原料药（批号 Le031663875，纯度                   30％乙醇-DMSO 混合溶液 2 mL，超声溶解并定容，以
        99.22％）购自上海皓鸿生物医药科技有限公司；磷酸二                        0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得供试品溶液（API 质量浓度
        氢钾（KH2PO4，批号 20200818）购自中国医药集团有限                   为250 μg/mL）。
        公司；无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，批号20181207）购自上                  2.3.2  标准曲线绘制        精密量取“2.3.1”项下 API 贮备
        海 沪 试 化 工 有 限 公 司 ；无 水 碳 酸 钠（Na2CO3，批 号            液适量，以 30％乙醇-DMSO 混合溶液逐级稀释，即得
        20210401）购自无锡市亚盛化工有限公司；桑蚕丝素（批                      API 质量浓度分别为 50、40、30、20、10、5 μg/mL 的系列
        号180301）购自湖州新天丝生物科技有限公司；MTT试                       溶液；以30％乙醇-DMSO混合溶液为空白，采用紫外可
        剂（批号20201105）购自美国Sigma公司；2，7-二氯二氢荧                 见分光光度计于 342 nm 波长处测定吸光度。以吸光度
        光素二乙酸酯（2，7-dichlorodihydrofluorescein diacetate，   （y）为纵坐标、API质量浓度（x，μg/mL）为横坐标进行线性

        DCFH-DA，批号20210505）购自上海碧云天生物技术有                    回归，得到回归方程y＝0.021 8x+0.009 0（R ＝0.999 2），
                                                                                                2
        限公司；其余试剂为实验室常用规格，水为去离子水。                           表明API的检测质量浓度在5～50 μg/mL范围内线性关
        1.3 动物                                             系良好。
            本研究所用动物为BALB/c小鼠，雌性，体质量18～                     2.3.3  方法学考察 （1）精密度试验：取“2.3.1”项下API
        24 g，购自上海市计划生育科学研究所，动物生产许可证                        贮备液适量，以 30％乙醇-DMSO 混合溶液制成 API 低、
        号 为 SCXK（沪）2018-0006。 小 鼠 饲 养 于 温 度 22～            中、高质量浓度（10、20、30 μg/mL）溶液，采用紫外可见
        25 ℃、相对湿度50％的环境中，期间自由饮食。                           分光光度计于342 nm波长处测定吸光度，以考察日内精


        中国药房    2022年第33卷第1期                                                China Pharmacy 2022 Vol. 33 No. 1  ·59 ·
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