Page 63 - 《中国药房》2021年23期

表 5 各组大鼠肝组织中α-SMA、LC3、p62 和 PI3K/ 可抑制 HSC 活化，进而抑制肝纤维化。自噬相关蛋白
Akt/mTOR 信号通路相关基因 mRNA 表达水平 LC3在自噬小体的形成中具有重要作用，是细胞自噬的
测定结果（x±±s，n＝8） 特异性标志物 。LC3 可分为Ⅰ型（LC3-Ⅰ）和Ⅱ型
[24]
Fig 5 mRNA expression of α-SMA，LC3，p62 and （LC3-Ⅱ），当自噬发生时，LC3 于细胞质内转变为可溶
PI3K/Akt/mTOR signaling pathway-related 性LC3-Ⅰ；LC3-Ⅰ被自噬相关蛋白Atg7识别并活化后，
gene in liver tissue of rats in each group（x±±s，
再经泛素化加工修饰生成 LC3-Ⅱ——LC3-Ⅱ的表达水
n＝8）
平与自噬体数量成正比，且LC3-Ⅱ在自噬过程的晚期阶
组别 α-SMA LC3 p62 PI3K Akt mTOR 段表达，因此常作为反映自噬强度的指标 。p62 蛋白
[25]
正常对照组 1.00±0.16 1.00±0.15 1.00±0.10 1.00±0.14 1.00±0.12 1.00±0.08
＊
＊
模型组 4.88±0.43 ＊ 3.58±0.38 ＊ 0.22±0.03 ＊ 0.21±0.04 0.36±0.05 0.19±0.03 ＊ 作为自噬降解的底物之一，也是反映自噬水平的重要指
白屈菜碱低剂量组 4.76±0.44 3.44±0.36 0.26±0.04 0.26±0.06 0.39±0.06 0.21±0.06 标 。本研究结果显示，给予不同剂量白屈菜碱处理
[26]
白屈菜碱中剂量组 4.14±0.25 # 3.02±0.33 # 0.33±0.05 # 0.36±0.05 0.50±0.04 0.32±0.04 #
#
#
#
#
白屈菜碱高剂量组 3.04±0.31 # 2.71±0.24 # 0.49±0.06 # 0.46±0.09 0.69±0.07 0.40±0.06 # 后，肝纤维化模型大鼠肝组织中LC3 mRNA及其蛋白的
#
#
阳性对照组 3.18±0.23 # 3.14±0.34 # 0.41±0.06 # 0.53±0.10 0.75±0.09 0.43±0.10 # 表达水平均不同程度地降低，p62 mRNA 及其蛋白的表
＊
#
注：与正常对照组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
达水平均不同程度地升高，提示白屈菜碱能够对肝内自
Note：vs. normal control group， P＜0.05；vs. model group，P＜
＊
#
0.05 噬产生影响。
PI3K/Akt/mTOR 信号通路在自噬过程中起到关键
4 讨论
的调节作用，其中 PI3K 是一种存在于细胞质中的复合
CCl4进入体内后，可在肝脏中生成三氯甲基自由基
体，是该信号通路的重要组成部分 。激活的 PI3K（即
[27]
和氯自由基，进而溶解肝细胞膜，使肝细胞中大量肝内
p-PI3K）会将磷脂酰肌醇二磷酸（PIP2）磷酸化为磷脂酰
[15]
酶（AST、ALT 等）渗入血液，造成肝损伤和肝纤维化 。
肌醇三磷酸（PIP3），PIP3 再将目标蛋白 Akt 募集到细胞
因此，本研究选择腹腔注射CCl4-橄榄油溶液来建立大鼠
膜上，进而磷酸化激活Akt分子；激活后的Akt分子再磷
肝纤维化模型。护肝片具有保护肝损伤的作用，在肝损
酸化激活下游的mTOR；而mTOR是抑制自噬过程的关
伤相关研究中常用作阳性对照药物进行对照观察 [16－17] 。
键蛋白，可阻碍自噬小体的形成，进而抑制细胞自
血清中肝内酶（AST、ALT）水平是评价肝损伤和肝
噬 。本研究结果显示，给予不同剂量白屈菜碱处理
[28]
纤维化程度的重要指标，轻度的肝细胞损伤即可使血液
后，肝纤维化模型大鼠肝组织中 PI3K、Akt、mTOR 的蛋
中肝内酶的浓度增加数倍 。肝损伤后会导致组织中
[18]
白磷酸化水平及相应基因的 mRNA 表达水平均不同程
HSC 激活并合成α-SMA，产生大量以胶原蛋白为主的
度地升高。这表明白屈菜碱能够调节 PI3K/Akt/mTOR
ECM沉积。Hyp是胶原蛋白特有的氨基酸，HA是ECM
通路相关基因mRNA及其蛋白的表达，进而影响细胞自
中糖胺聚糖的主要成分，随着ECM的不断沉积，肝组织
噬标志蛋白 LC3、p62 的表达，阻止 HSC 的活化，并抑制
中 Hyp、HA 含 量 也 随 之 增 加 ，因 此 检 测 肝 组 织 中
肝纤维化的发生。
α-SMA、Hyp、HA 水平对于判断肝组织损伤和肝纤维化
综上所述，白屈菜碱可改善CCl4诱导大鼠的肝纤维
[19]
程度具有重要意义 。本研究结果显示，模型组大鼠肝
化，其机制可能与激活 PI3K/Akt/mTOR 信号通路、抑制
指数和血清中 AST、ALT 水平以及肝组织中α-SMA、
细胞自噬有关。然而，自噬是一把“双刃剑”，其与肝纤
Hyp、HA 水平较正常对照组均显著升高，肝组织纤维化
维化的关系复杂。因此，白屈菜碱通过调控自噬抗肝纤
明显，表明肝纤维化大鼠模型制备成功。当给予不同剂
维化的作用机制还需后续进一步深入研究。
量白屈菜碱处理后，大鼠肝指数和血清中 AST、ALT 水
参考文献
平以及肝组织中α-SMA（mRNA 及其蛋白表达）、Hyp、
[ 1 ] EZHILARASAN D，SOKAL E，NAJIMI M. Hepatic fi-
HA 水平较模型组均不同程度地降低，肝组织纤维化程
brosis：it is time to go with hepatic stellate cell-specific
度减轻，说明白屈菜碱对CCl4诱导的大鼠肝纤维化损伤
therapeutic targets[J]. Hepatobiliary Pancreat Dis Int，
具有较好的改善作用。
2018，17（3）：192-197.
肝内自噬是肝细胞对自身结构蛋白及细胞器进行
[ 2 ] CHEN G，XIA B，FU Q，et al. Matrix mechanics as regula-
降解的一种方式，在肝纤维化损伤中具有重要作用 [20－21] 。 tory factors and therapeutic targets in hepatic fibrosis[J].
[22]
自噬可以通过分解、减少脂滴而促进 HSC 活化 。 Int J Biol Sci，2019，15（12）：2509-2521.
[23]
Thoen 等 用 3-甲基腺嘌呤抑制 HSC 自噬时，细胞内脂 [ 3 ] WANG S，FRIEDMAN S L. Hepatic fibrosis：a conver-
滴的数量和体积明显增加、脂肪酸合成明显减弱，HSC gent response to liver injury that is reversible[J]. J Hepatol，
的活化受到抑制。上述结果提示，通过调节细胞自噬， 2020，73（1）：210-211.
中国药房 2021年第32卷第23期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 23 ·2873 ·