Page 61 - 《中国药房》2021年23期

值表示这3种蛋白的磷酸化水平。 表 2 各组大鼠肝指数和血清中 AST、ALT、HA 水平测
2.8 肝组织中α-SMA、LC3-ⅡⅡ、p62、PI3K、Akt、mTOR 定结果（x±±s，n＝8）
的mRNA表达水平测定 Tab 2 Liver index，serum levels of AST，ALT and
采用实时荧光定量PCR法进行测定。取“2.2”项下 HA of rats in each group（x±±s，n＝8）
冻存的肝组织，于冰上常规解冻后，采用 TRIzol 试剂提 组别 肝指数，％ AST，U/L ALT，U/L HA，μg/L
取肝组织中总RNA，然后按反转录试剂盒说明书方法反 正常对照组 2.37±0.10 28.78±2.60 44.39±5.99 89.12±10.73
模型组 3.81±0.24 ＊ 83.81±6.53 ＊ 106.55±11.31 ＊ 161.57±16.07 ＊
转录合成cDNA，并以cDNA为模板进行PCR扩增（引物
白屈菜碱低剂量组 3.63±0.29 79.93±7.67 102.77±14.00 156.58±15.62
序列及扩增产物片段长度见表 1）。PCR 反应体系为： 白屈菜碱中剂量组 3.52±0.21 72.13±7.85 # 92.26±10.40 # 140.06±12.11
cDNA模板2 μL，dNTP溶液1.6 μL，上、下游引物各0.8 μL， 白屈菜碱高剂量组 3.06±0.17 # 61.33±4.53 # 77.68±6.28 # 123.83±10.92 #
阳性对照组 3.29±0.15 # 69.56±7.05 # 86.30±10.57 # 129.51±15.82 #
BeyoTaq Buffer 2 μL，BeyoTaq DNA Polymerase 0.1 μL，
＊
注：与正常对照组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
#
加双蒸水至总体积为20 μL。PCR 反应条件为：95 ℃预
＊
Note：vs. normal control group， P＜0.05；vs. model group，P＜
#
变性4 min；95 ℃变性20 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，
0.05
共 40 个循环。最后进行溶解曲线分析。以 GAPDH 为
3.2 大鼠肝组织中Hyp水平
内参，采用 2 － Δ Δ Ct 法计算肝组织中α-SMA、LC3、p62、
与正常对照组比较，模型组大鼠肝组织中Hyp水平
PI3K、Akt、mTOR 的 mRNA 表达水平（公式中 Ct 表示每
显著升高（P＜0.05）。与模型组比较，白屈菜碱中、高剂
个反应管内荧光信号强度达到设定阈值时所经历的循
量组和阳性对照组大鼠肝组织中 Hyp 水平均显著降低
环次数），并以正常对照组数据为标准（1.00）计算其余各
（P＜0.05）。各组大鼠肝组织中 Hyp 水平测定结果见
组结果的相对值。
表3。
表1 引物序列及扩增产物片段长度
表3 各组大鼠肝组织中Hyp水平和胶原纤维蛋白阳性
Tab 1 Primer sequence and the length of amplified
染色面积百分比测定结果（x±±s，n＝8）
product fragment
Tab 3 Level of Hyp and the percentage of positive
基因 引物序列 扩增产物片段长度，bp
α-SMA 上游：5′-AACTCCACGAGCACACAGG-3′ 164 staining area for collagen fibrin in liver tissue
下游：5′-GGCAGTCCGTCTCATACACA-3′ of rats in each group（x±±s，n＝8）
LC3 上游：5′-CGGAGCTTTGAACAAAGAGT-3′ 158
下游：5′-CTCTCTCACTCTCGTACAC-3′ 组别 Hyp，μg/g 胶原纤维蛋白阳性染色面积百分比，％
p62 上游：5′-TCCCTGTCAAGCAGTATCC-3′ 147 正常对照组 97.42±12.46 100.00±14.46
下游：5′-TCCTCCTTGGCTTTGTCTC-3′ 模型组 272.16±21.52 ＊ 664.26±79.31 ＊
PI3K 上游：5′-CAAAGCCGAGAACCTATTGC-3′ 226 白屈菜碱低剂量组 259.49±23.13 578.34±65.56
下游：5′-TTGAGGGAGTCATTGTGCTG-3′ 白屈菜碱中剂量组 238.22±19.21 # 516.09±59.75 #
Akt 上游：5′-TGGACTACTTGCACTCCGAG-3′ 155 白屈菜碱高剂量组 179.60±15.83 # 290.40±33.63 #
下游：5′-CGCAGAACGTCTTCATGGTG-3′ 阳性对照组 212.30±19.60 # 395.63±20.65 #
mTOR 上游：5′-TGGCTTCTAAGTCTACCACGAC-3′ 356 注：与正常对照组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
＊
#
下游：5′-GAGGTCCTGACATTCCCTGATT-3′ Note：vs. normal control group， P＜0.05；vs. model group，P＜
＊
#
GAPDH 上游：5′-GCCTCGTCTCATAGACAAGA-3′ 160
0.05
下游：5′-GAAGGCAGCCCTGGTAACC-3′
3.3 大鼠肝组织中纤维蛋白染色情况
2.9 统计学方法
正常对照组大鼠肝组织结构正常，汇管区及中央静
采用 SPSS 13.0 软件进行统计分析。实验数据以
x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两 脉周围无纤维增生。模型组大鼠肝组织汇管区扩大，胶
比较采用SNK检验。检验水准α＝0.05。 原纤维大量增生。与模型组比较，各给药组大鼠肝组织
3 结果 汇管区不同程度地缩小，胶原沉积不同程度地减少；其
3.1 大鼠肝指数和血清中AST、ALT、HA水平 中白屈菜碱高剂量组和阳性对照组大鼠肝组织汇管区
与正常对照组比较，模型组大鼠肝指数和血清中 及中央静脉周围仅有极少量的胶原沉积。与正常对照
AST、ALT、HA水平均显著升高（P＜0.05）。与模型组比 组比较，模型组大鼠肝组织中胶原纤维蛋白阳性染色面
较，白屈菜碱中剂量组大鼠血清中 AST、ALT 水平均显 积百分比显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，白屈菜碱
著降低（P＜0.05）；白屈菜碱高剂量组和阳性对照组大 中、高剂量组和阳性对照组大鼠肝组织中胶原纤维蛋白
鼠肝指数和血清中AST、ALT、HA水平均显著降低（P＜ 阳性染色面积百分比均显著降低（P＜0.05）。各组大鼠
0.05）。各组大鼠肝指数和血清中AST、ALT、HA水平测 肝组织中胶原纤维蛋白染色显微图见图 1，胶原纤维蛋
定结果见表2。 白阳性染色面积百分比测定结果见表3。

中国药房 2021年第32卷第23期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 23 ·2871 ·