Page 69 - 《中国药房》2021年22期

各组小鼠脑组织线粒体，经 PMSF 裂解后提取总蛋白，
用 BCA 法测定浓度后，于 100 ℃下加热 10 min 使变性。
取变性蛋白样品进行SDS-PAGE分离、转膜后，用5％脱
脂奶粉于室温下封闭，加入 LC3、p62、PINK1、Parkin、
β-actin 一抗（稀释比例均为 1 ∶ 1 000），于 4℃下孵育过
夜；用 TBST 缓冲液洗涤 10 min×3 次，加入 HRP 标记的 A.正常对照组 B.模型组
山羊抗兔IgG二抗（稀释比例为1∶5 000），于室温下孵育
1.5 h，用 TBST 缓冲液洗涤 10 min×3 次，用 ECL 显色液
曝光并置于凝胶成像仪上成像。使用 Image J v1.8.0 软
件进行分析，以目标蛋白与内参蛋白（β-actin）的灰度值
比值作为目标蛋白的表达量。实验重复3次。
2.6 统计学方法 C. TEN低剂量组 D. TEN中剂量组
采用 GraphPad Prism 8.0 软件对数据进行统计分
析。数据均以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分
析，组间两两比较采用LSD检验。检验水准α＝0.05。
3 结果
3.1 TEN 对 APP/PS1 小鼠神经元内 LC3 阳性表达的
E. TEN高剂量组 E. TEN中剂量+3-MA组
影响
图 1 TEN 对 APP/PS1 小鼠神经元内 LC3 阳性分布影
与正常对照组比较，模型组小鼠神经元内LC3阳性
响的显微图（×400）
表达的 IOD 值显著升高（P＜0.01）。与模型组比较，
Fig 1 Micrographs of the effects of TEN on positive
TEN低、中剂量组小鼠神经元内LC3阳性表达的IOD值
distribution of LC3 in neuron of APP/PS1 mice
虽有升高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05），仅TEN （×400）
高剂量组小鼠神经元内 LC3 阳性表达的 IOD 值显著升
表 2 TEN 对 APP/PS1 小鼠神经元内 LC3 阳性表达的
高（P＜0.05）。与 TEN 中剂量组比较，TEN 中剂量+
影响（x±±s，n＝3）
3-MA组小鼠神经元内LC3阳性表达的IOD值显著降低
Tab 2 Effects of TEN on positive distribution of LC3
（P＜0.01）。结果见图1、表2。
in neuron of APP/PS1 mice（x±±s，n＝3）
3.2 TEN 对 APP/PS1 小鼠脑组织线粒体中 LC3、p62、
组别 IOD 组别 IOD
Cathepsin D、Rab7、PINK1、Parkin mRNA表达的影响 正常对照组 0.387±0.005 TEN中剂量组 0.494±0.028
与正常对照组比较，模型组小鼠脑组织线粒体中 模型组 0.466±0.023 ＊＊ TEN高剂量组 0.528±0.020 #
TEN低剂量组 0.504±0.014 TEN中剂量+3-MA组 0.427±0.003 ΔΔ
LC3、p62、PINK1、Parkin mRNA 的表达量均显著升高
＊＊
#
注：与正常对照组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05；与
（P＜0.05 或 P＜0.01），Cathepsin D、Rab7 mRNA 的表达
ΔΔ
TEN中剂量组比较，P＜0.01
量均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。与模型组比较， Note：vs. normal control group ＊ ＊ P＜0.01；vs. model group，P＜
#
ΔΔ
TEN低、中、高剂量组小鼠脑组织线粒体中LC3、Cathep- 0.05；vs. TEN medium-dose group， P＜0.01
sin D、Rab7、PINK1（除 TEN 低剂量组外）、Parkin（除 0.01）。与模型组比较，TEN 低、中、高剂量组小鼠脑组
TEN低剂量组外）mRNA的表达量均显著升高（P＜0.05 织线粒体中 LC3（除 TEN 中剂量组外）、PINK1（除 TEN
或 P＜0.01），p62（除 TEN 低剂量组外）mRNA 的表达量 高剂量组显著降低外）、Parkin（除TEN低剂量组显著降
均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）。与 TEN 中剂量组比 低外）蛋白的表达量均显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01），
较，TEN 中剂量+3-MA 组小鼠脑组织线粒体中 LC3、 p62 蛋白的表达量均显著降低（P＜0.01）。与 TEN 中剂
PINK1、Parkin mRNA 的表达量均显著降低（P＜0.05 或 量组比较，TEN 中剂量+3-MA 组小鼠脑组织线粒体中
P＜0.01），p62 mRNA的表达量显著升高（P＜0.01）。结 LC3、PINK1、Parkin 蛋白的表达量均显著降低（P＜0.05
果见表3。 或P＜0.01），p62蛋白的表达量显著升高（P＜0.01）。结
3.3 TEN 对 APP/PS1 小鼠脑组织线粒体中 LC3、p62、 果见图2、表4。
PINK1、Parkin蛋白表达的影响 4 讨论
与正常对照组比较，模型组小鼠脑组织线粒体中 由于 AD 的发病机制复杂，导致目前还没有可治愈
LC3、p62、PINK1、Parkin蛋白的表达量均显著升高（P＜ AD 的药物或方法，因此明确该病的发病机制和研发有

中国药房 2021年第32卷第22期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 22 ·2751 ·