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300 12、24 h 时，取样 0.1 mL，同时补充相同体积的释放介
水
生理盐水
PBS 质。将所取样品溶液按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，
250
RPMI 1640培养基
测定DTX-S-S-DHA的含量，计算累积释放率 ，并绘制
[14]
nm 200 其累积释放曲线（图4），然后采用Origin 9.1软件拟合其
粒径， 150 释放模型，详见表2。
100
不含DTT的释放介质
100
含10 mmol/L DTT的释放介质
80
50
0 7 14 21 27 ％
t，h 60
A.粒径 累积释放率， 40
0.4 水
生理盐水
PBS 20
RPMI 1640培养基
0.3
0
0 4 8 12 16 20 24
PDI 0.2 时间，h
图 4 DTX-S-S-DHA NPs 中 DTX-S-S-DHA 的累积释
0.1
放曲线
Fig 4 Accumulative release curve of DTX-S-S-DHA
0
0 7 14 21 27 in DTX-S-S-DHA NPs
t，h
B. PDI 表2 DTX-S-S-DHA NPs中DTX-S-S-DHA的体外释放
水 动力学模型
生理盐水
PBS Tab 2 The in vitro release kinetics models of DTX-S-
100 RPMI 1640培养基
S-DHA from DTX-S-S-DHA NPs
释放模型 方程 R
％ 零级动力学模型 Q＝49.34t+0.287 2 0.683 0
EE， 75 一级动力学模型 ln（1－Q）＝－93.80－0.129 0t 0.969 6
注：Q为每个时间点DTX-S-S-DHA的释放量
Note：Q is the release of DTX-S-S-DHA at each time point
50
0 7 14 21 27 由图 4 可知，DTX-S-S-DHA NPs 中 DTX-S-S-DHA
t，h
C. EE 在含10 mmol/L DTT的释放介质中基本不释放；而在不
图3 DTX-S-S-DHA NPs的长期稳定性考察结果 含 DTT 的释放介质中，DTX-S-S-DHA 可一定程度地缓
Fig 3 Long-term stability of DTX-S-S-DHA NPs 慢释放，其 24 h 累积释放率可达 83％。由表 2 可知，
由图 2 可知，DTX-S-S-DHA NPs 在水、生理盐水、 DTX-S-S-DHA 的释放符合一级动力学模型，进一步说
明DTX-S-S-DHA在还原条件下（10 mmol/L DTT），其二
PBS、RPMI 1640培养基中振荡24 h内，其粒径、PDI、EE
硫键能迅速断裂释放出母药。其累积释放结果与本课
均无明显变化，表明其具有良好的物理稳定性。由图 3
题组前期实验中DTX和DHA在不同条件下各个时间点
可知，DTX-S-S-DHA NPs 在 4 ℃条件下保存时，随着保
[13]
的累积释放结果相似 。
存时间的增加，其在生理盐水中的粒径逐渐增大至 206
2.4 DTX-S-S-DHA NPs的组织分布研究
nm，在PBS中的粒径逐渐减小至156 nm，且在两者中的
2.4.1 小鼠乳腺癌荷瘤模型的建立 采用胰蛋白酶将
EE 逐渐降低至 75％以下；而其在水和 RPMI 1640 培养
生长状态良好的乳腺癌4T1细胞消化后，均匀分散于无
基中的粒径、PDI、EE均无明显变化，表明其在这两种介
－1
6
菌 PBS 中，使其密度为 5×10 mL 。取上述细胞悬液
质中可保持稳定，具有良好的长期稳定性。
100 µL，皮下注射于小鼠右侧第4对乳房垫附近，以复制
2.3 DTX-S-S-DHA NPs的体外释放特征考察 小鼠乳腺癌荷瘤模型。隔天观察并记录小鼠肿瘤生长
采用小杯法 [14] 测定 DTX-S-S-DHA 的体外释放特 状态，待肿瘤体积生长至 100～150 mm 时进行后续
3
征。精密吸取DTX-S-S-DHA NPs（2 mg/mL）2 mL，分别 实验。
置于 20 mL 含或不含 10 mmol/L DTT（用以模拟肿瘤细 2.4.2 DiR 标记的 DTX-S-S-DHA NPs（DTX-S-S-DHA/
胞的还原环境）的 30％乙醇溶液（即释放介质）中，然后 DiR NPs）的制备 取DiR和DTX-S-S-DHA适量溶于乙
于（37±2）℃恒温水浴振荡器中振荡0、1、2、4、6、8、10、 醇中，在一定搅拌速度下缓慢滴加至水中，然后减压蒸

·2374 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19 中国药房 2021年第32卷第19期