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乳腺癌是近几年来我国女性发病率和病死率较高                           1.2 主要药品与试剂
        的恶性肿瘤，严重威胁到女性健康 。化学治疗是传统                                本 研 究 所 用 DTX-S-S-DHA 对 照 品（ 纯 度 为
                                      [1]
        癌症治疗的主要方法之一，但是多药耐药性（multidrug                       95.71％）和 DTX-S-S-DHA 样品均由本实验室自制。维
        resistance，MDR）限制了单一药物对癌症的治疗效果，因                    生 素 E 聚 乙 二 醇 单 硬 脂 酸 甘 油 酯（TPGS，批 号
        此两种或两种以上药物的联合治疗得到了人们的广泛                             A1620651）购自西安阿拉丁生物科技有限公司；二硫苏
             [2]
        关注 。多西紫杉醇（docetaxel，DTX）是治疗乳腺癌的                     糖醇（DTT，批号 420P041）购自北京索莱宝科技有限公
        一线化疗药物之一，是一种半合成紫杉烷类抗癌药，其                            司；RPMI 1640 培养基（批号 GP20060600426）购自西安
        作用机制是促进微管聚合、抑制解聚，进而阻碍肿瘤细                            阿拉丁生物试剂有限公司；异氟烷购自深圳瑞沃德生命
        胞的有丝分裂，达到治疗癌症的目的                 [3－6] 。DTX 水溶性     科技有限公司；DiR 染料[DilC18（7）]（批号 60017）购自
        低，因此市售制剂（如泰索帝，TAXOTERE ）中常使用聚                       美国 Biotium 公司；甲醇、乙腈均为色谱纯，其余试剂均
                                            ®
        山梨酯 80 等辅料来增加其溶解度，从而提高疗效。然                          为分析纯，水为纯净水。
        而，赋形剂的使用带来了较大的毒副作用，如急性超敏                            1.3 动物
                                                 [7]
        反应、溶血反应，继而限制了 DTX 的临床应用 。双氢                             本研究所用动物为健康 Balb/c 小鼠，6 只，体质量
        青蒿素（dihydroartemisinin，DHA）是从菊科植物黄花蒿               （20±2）g，由山西医科大学实验动物中心提供，动物生
        Artemisia annua Linn.中提取的青蒿素衍生物，毒性较                 产许可证号为SCXK（晋）2015-0001。
        小，且对肿瘤细胞具有良好的抑制作用，是一种具有抗                            1.4 细胞
        癌潜力的中药活性成分           [8－11] 。相关研究发现，DHA与其               本研究所用乳腺癌 4T1 细胞由山西医科大学药学
                                             [12]
        他化疗药结合使用时，可增强其抗癌功效 。基于此，                            院药剂教研室提供。
        本课题组在前期实验中以 DTX 和 DHA 为模型药物、以                       2 方法与结果
        二硫键为连接臂，合成了 DTX 和 DHA 的偶联前药                         2.1  DTX-S-S-DHA体外分析方法的建立
        （DTX-S-S-DHA），采用纳米沉淀法制备了该偶联前药                       2.1.1  色谱条件      色谱柱为 Agilent-C18 （250 mm×4.6
        的自组装纳米粒（DTX-S-S-DHA NPs），并考察了两药联                    mm，5 µm）；流动相为乙腈-水（90 ∶ 10，V/V）；检测波长为
        合的体内外抗肿瘤活性，结果发现两者联合应用可提高                            230 nm；柱温为 35 ℃；流速为 0.8 mL/min；进样量为
                                         [13]
        肿瘤治疗效果，且具有一定的协同作用 。                                 20 µL。
            由于本课题组在前期实验中并未对DTX-S-S-DHA                      2.1.2  供试品溶液的制备         取 DTX-S-S-DHA 样品 10.0
        和 DTX-S-S-DHA NPs 的稳定性、体外释放等方面进行                    mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，以乙腈溶解并稀释至
        考察，存在一定不足。因此，本研究在前期研究的基础                            刻度，混匀，以0.22 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得
        上，采用高效液相色谱（HPLC）法建立 DTX-S-S-DHA                     供试品溶液。
        NPs 中 DTX-S-S-DHA 的体外分析方法；以粒径、多分散                   2.1.3  对照品溶液的制备           取 DTX-S-S-DHA 对照品
        系数（PDI）和包封率（EE）为评价指标，考察该纳米粒在                        10.0 mg，精密称定，置于10 mL量瓶中，同“2.1.2”项下方
        水、生理盐水、磷酸盐缓冲液（PBS，pH 7.4）和 RPMI                     法操作，即得对照品溶液。
        1640培养基中的初步稳定性；考察该纳米粒的体外释放                          2.1.4  专属性    取空白溶剂（乙腈）和“2.1.2”项下供试
        特征和在乳腺癌荷瘤模型小鼠体内的组织分布，以期为                            品溶液适量，按“2.1.2”项下色谱条件进样分析，记录色
        DTX-S-S-DHA的制剂开发和临床应用提供参考。                          谱 图 。 结 果 ，溶 剂 不 干 扰 DTX-S-S-DHA 的 测 定 ，
        1 材料                                                DTX-S-S-DHA 的理论板数不低于 3 000，表明该方法专
        1.1 主要仪器                                            属性良好，详见图1。
            本研究所用的主要仪器有：DF-101型集热式磁力搅                       2.1.5  标准曲线的绘制         精密吸取“2.1.3”项下对照品
        拌器（常州国华电器有限公司）、DF-101S型集热式恒温                        溶液适量，以乙腈稀释，分别制成质量浓度为10.0、20.0、
        加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）、                             50.0、100.0、250.0、500.0 µg/mL的系列标准曲线溶液，再
        ME104E 型分析天平[瑞士梅特勒托利多仪器（中国）有                        按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积。以峰面
        限公司]、LC-2030 型 HPLC 仪（日本 Shimadzu 公司）、              积为纵坐标（A）、DTX-S-S-DHA 质量浓度为横坐标（c，
        Zetasizer Nano-ZS90 型粒度电位分析仪（英国 Malvern             µg/mL）进行线性回归，得回归方程A＝13 949.3c－8 054.8
                                                              2
        公司）、HA-BA型气浴恒温振荡器（金坛市荣华仪器制造                        （R ＝0.999 8）。结果表明，DTX-S-S-DHA 在检测质量
        有限公司）、SB-5200DTDN 型超声波清洗机（宁波新芝                      浓度10.0～500.0 µg/m L范围内线性关系良好。
        生物科技股份有限公司）、HC-2064型高速离心机（安徽                        2.1.6  定量限与检测限试验           精密吸取“2.1.3”项下对
        中科中佳科学仪器有限公司）、In-Vivo Xtreme型小动物                    照品溶液适量，以乙腈逐级稀释，再按“2.1.1”项下色谱
        活体成像仪（德国Bruker公司）。                                  条件进样分析，记录峰面积。分别以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1


        ·2372 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19                                 中国药房    2021年第32卷第19期
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