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文献[13]设置）、caspase-1抑制剂组（VX-765，4.5 mg/kg， 和方差齐性的数据均以x±s表示，多组间比较采用单因
剂量参考文献[15]设置）和健脾益气方低、中、高剂量组 素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；符合非正态
（5.25、10.5、21 g/kg，剂量分别为临床等效剂量的3、6、12 分布的数据以中位数表示，采用 Mann-Whitney U 秩和
倍），除模型组 20 只大鼠外，其余每组 10 只。除正常组 检验。检验水准α＝0.05。
大鼠腹腔注射生理盐水外，其余各组大鼠腹腔注射DEN 3 结果
[16]
（70 mg/kg）以复制肝癌模型 。造模前和造模后分别从 3.1 健脾益气方对肝癌模型大鼠肝组织病理学形态的
模型组中取5只大鼠处死进行对比分析，当造模后大鼠 影响
肝组织病理学形态等指标显著变化时，则表明肝癌模型 正常组大鼠的肝细胞完整、大小均匀、无核分裂，在
[17]
复制成功 。造模成功后，正常组和模型组大鼠灌胃生 肝小叶中央静脉周围呈放射状排列；与正常组比较，模
理盐水，各抑制剂组大鼠腹腔注射相应药物，健脾益气 型组大鼠的肝细胞可见不同程度的脂肪变性、细胞核增
方各剂量组大鼠灌胃相应药物，每日1次，连续4周。 大和呈团块状，部分可见出血和坏死，并伴有增生灶和
2.3 样本采集 结节，其肝组织损伤指数显著升高（P＜0.01）；与模型组
末次处置后1 h，各组大鼠腹腔注射3％戊巴比妥进 比较，健脾益气方低、中剂量组大鼠的肝组织仍有大量
行麻醉，腹主动脉采血；血样静置 4 h 后，以 3 000 r/min 炎性细胞浸润，而其高剂量组和 NLRP3 抑制剂组、cas-
离心15 min，取上层血清，备用。取血完成后，处死各组 pase-1 抑制剂组大鼠肝组织的炎性细胞浸润均明显减
大鼠，取其肝组织，一部分固定于4％多聚甲醛中，备用； 少，且健脾益气方各剂量组和各抑制剂组大鼠的肝组织
另一部分保存于－80 ℃条件下，备用。 损伤指数均显著降低（P＜0.01），详见图1、表1。
2.4 大鼠肝组织病理学形态观察
取“2.3”项下各组大鼠固定于 4％多聚甲醛的肝组
织，进行石蜡包埋、切片和常规苏木精-伊红（HE）染色，
然后于光学显微镜下观察大鼠肝组织病理学变化，并参
考文献[18－19]方法，评价肝组织的损伤指数：0分为无
细胞变性、坏死及炎性细胞浸润；1 分为轻度充血、水肿
及炎症；2分为充血水肿、部分炎性细胞浸润；3分为高度 A.正常组 B.模型组
充血水肿、部分肝细胞坏死；4 分为大量肝细胞坏死、纤
维化。
2.5 大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量的检测
采用 ELISA 法进行检测。取“2.3”项下各组大鼠血
清，按试剂盒说明书相关方法操作，采用酶标仪于 450
nm波长处测定血清中TNF-α、IL-1β的含量。
2.6 大鼠肝组织中NLRP3、ASC、pro-caspase-1、RIP1、 C.健脾益气方低剂量组 D.健脾益气方中剂量组
RIP3、MLKL蛋白表达水平的检测
采 用 Western blot 法 进 行 检 测 。 取“2.3”项 下 于
－80 ℃条件下保存的各组大鼠肝组织20 mg，加入RIPA
裂解液于冰上裂解；按BCA法测定蛋白浓度，将各组蛋
白稀释至同一浓度水平，加入5倍上样缓冲液混匀，并于
100 ℃条件下变性5 min。取变性后蛋白，进行十二烷基 E.健脾益气方高剂量组 F. NLRP3抑制剂组
硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），转膜，以封
闭液室温封闭 1 h，然后分别加入 NLRP3、ASC、pro-cas-
pase-1、RIP1、RIP3、MLKL、GAPDH 一抗（稀释度均为
1 ∶ 600），于4 ℃孵育过夜；以TBST洗膜10 min×3次，加
入相应二抗（稀释度均为 1 ∶ 5 000），于 37 ℃孵育 1 h；以
TBST 洗膜 10 min×3 次，以 ECL 化学发光试剂显色后，
置于全能型成像分析系统中成像。采用 Image J 1.49v G. caspase-1抑制剂组
软件进行分析，以目标蛋白与内参蛋白 GAPDH 的灰度 图1 各组大鼠肝组织病理学形态的显微图（HE染色，×
值比值表示目标蛋白的表达水平。 400）
2.7 统计学方法 Fig 1 Histopathological micrograph of liver tissue of
采用 SPSS 20.0软件进行统计分析。符合正态分布 rats in each group（HE staining，×400）

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