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ASC mRNA 的相对表达量均显著升高（P＜0.05）；与模                     药材均含有丰富的挥发油，如片姜黄、当归、白芷、川芎、
        型组比较，“三色散”挥发油10、250 μg/mL组细胞中上述                     羌活、独活、连翘、川牛膝等。该贴敷技术自创立以来，
        mRNA的相对表达量均显著降低（P＜0.05），详见表5。                       已在南京中医药大学附属医院应用数十年；且经临床实
        表 5 “三色散”挥发油对 FLS 中 NLRP3、caspase-1、                践证实，其对KOA滑膜炎症的治疗效果显著，具有良好
              ASC mRNA相对表达量的影响（x±±s，n＝3）                    的社会及经济效益 。但是，有关该贴敷片的作用靶点
                                                                            [18]
        Tab 5 Effects of“Sanse powder”volatile oil on the   及具体作用过程尚未被阐明，因此本课题组对该贴敷片
                relative mRNA expression of NLRP3， cas-     核心组成“三色散”的挥发油成分进行了研究，并初步探
                pase-1 and ASC in FLS（x±±s，n＝3）             讨了该挥发油的体外抗炎作用及机制，旨在为新治疗方

         组别                NLRP3/GAPDH  caspase-1/GAPDH  ASC/GAPDH  式的开发和完善提供参考。
         空白组                  1          1         1            本研究首先利用水蒸气蒸馏法提取了“三色散”挥
         模型组                2.16±0.03 ＊  2.17±0.13 ＊  3.04±0.17 ＊
         “三色散”挥发油10 μg/mL组  1.65±0.11 #  1.27±0.16 #  1.51±0.28 #  发油，所得挥发油具有独特的芳香气味。随后，通过
         “三色散”挥发油250 μg/mL组  1.16±0.09 #  1.20±0.13 #  1.01±0.37 #  GC-MS法分析了“三色散”挥发油的化学组成，共分离得
            注：与空白组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05                   到41种化学成分，并鉴定了其中的30种（共占总峰面积
                                          #
                        ＊
                          ＊
            Note：vs. blank group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
                                            #
                                                            的90.073 6％）；而其余组分由于含量太低或质谱匹配度
        3.5 “三色散”挥发油对 FLS 上清液中 IL-1β、IL-18 水
                                                            过低而无法得以确认。同时本研究结果显示，在“三色
        平的影响
                                                            散”挥发油成分中，来自于片姜黄的相关成分占比高达
            与空白组比较，模型组细胞上清液中 IL-1β、IL-18
                                                            40.961 6％。有研究指出，片姜黄同时具有食用和药用
        水平均显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，“三色散”挥
                                                            价值，主要分布于热带和亚热带地区 ，在亚洲和非洲
                                                                                            [19]
        发油 10、250 μg/mL 组细胞上清液中上述因子水平均显
                                                            传统医学中被广泛用于疼痛、咳嗽、创伤、炎症性疾病等
        著降低（P＜0.05），详见表6。
                                                            的防治 。现代研究进一步表明，片姜黄的生物活性可
                                                                  [20]
        表 6 “三色散”挥发油对 FLS 上清液中 IL-1β、IL-18 水
                                                                                             [21]
                                                            归因于其中所含的挥发性萜类化合物 。这可能意味
              平的影响（x±±s，n＝3，ng/L）
                                                            着“三色散”治疗 KOA 可能与其中的片姜黄高度相关，
        Tab 6   Effects of“Sanse powder”volatile oil on the
                                                            为未来“三色散”加减方及新药的开发提供了一定的
                levels of IL-1β and IL-18 in the supernatant of
                                                            依据。
                FLS（x±±s，n＝3，ng/L）
                                                                最近一项研究表明，NLRP3炎症小体可能是挥发油
         组别                      IL-1β          IL-18                                                 [22]
         空白组                   18.658±0.972   45.728±3.291  中二萜类和其他成分发挥抗炎作用的重要靶点 。在
         模型组                   29.437±1.168 ＊  113.532±10.721 ＊  过去的10年中，研究者在自身免疫性和自身炎症性疾病
         “三色散”挥发油10 μg/mL组     24.368±0.863 #  93.907±4.778 #  （包括代谢紊乱）的多个领域中对NLRP3炎症小体进行
         “三色散”挥发油250 μg/mL组    20.153±1.049 #  68.163±4.637 #
                                                            了大量的研究，结果显示，NLRP3 炎症小体介导的信号
                                          #
                        ＊
            注：与空白组比较，P＜0.05；与模型组比较，P＜0.05
                                                            转导对KOA的发生具有重要的调控作用，与KOA软骨
                          ＊
                                            #
            Note：vs. blank group，P＜0.05；vs. model group，P＜0.05
        4 讨论                                                破坏和滑膜炎症密切相关           [7，23] 。目前，学者已提出NLRP3
            挥发油又称为精油，广泛存在于植物中，是一种天                          炎症小体激活的可能机制：第1步于转录水平上启动，其
        然的、具有挥发性和特殊气味、与水密度不同且不相容                            中 Toll 样受体（TLRs）识别微生物物质（PAMPs）或内源
        的油状液体，具有吸收快、疗效广、不滞留等优势 。已                           物质（DAMPs）以激活核因子κB（NF-κB）介导的信号转
                                                  [12]
        有研究表明，挥发油不仅可发挥局部作用，也可以产生                            导，这增加了 IL-1β、IL-18 前体蛋白（pro-IL-1β、pro-
        与口服药物相同的全身效应，并可降低口服药物某些不                            IL-18）和 NLRP3 蛋白的表达量；第 2 步是激活信号，该
        良反应（比如胃肠道不良反应和心血管疾病）的发生风                            信号启动NLRP3寡聚，并导致NLRP3、ASC和caspase-1
          [13]
        险 。中药或多或少都含有挥发油，发挥着各种各样的                            前体蛋白（pro-caspase-1）聚集在一起形成炎症小体，随
        治疗作用，应用十分广泛：比如薄荷油具有抗菌消炎、抗                           后pro-caspase-1发生自我剪切活化为caspase-1 p10、p20
        氧化和驱虫的特性，可作为漱口水、牙膏、香烟、药品和                           等 亚 型 ，同 时 被 活 化 后 的 caspase-1 能 将 pro-IL-1 β 、
                    [14]
                                               [15]
        食品的调味剂 ；肉桂油具有较强的抗炎作用 ；生姜油                           pro-IL-18剪切成成熟的IL-1β、IL-18，后者大量释放至胞
                                                                                          [24]
                                            [16]
        具有抗炎、抗氧化、止痛等多种生物活性 。与中药及                            外，从而导致炎症反应的级联放大 。基于此，本研究
        其复方制剂相比，挥发油具有成分分析难度较低、药理                            利用现代分子生物学技术，提取大鼠 FLS，通过 LPS 模
        活性较强的优点，故探究其生物活性及对不同疾病的治                            拟KOA炎症环境，从细胞层面初步探讨了KOA可能存
                                              [17]
        疗潜力或可成为药物研发的有效路径之一 。本研究                             在的发病机制及“三色散”挥发油抗炎作用的潜在机
        中的“三色散”为“易层”贴敷片的核心组成，其中的多种                          制。结果表明，用 LPS 诱导后，模型组细胞中 NLRP3、
        ·2340 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19                                 中国药房    2021年第32卷第19期
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