Page 45 - 2021年19期

infiltration in the liver tissue of rats in Jianpi yiqi decoction low-dose and medium dose groups，while the inflammatory cell
infiltration of rats in high-dose group and inhibitor groups decreased significantly；the liver tissue injury index and above indexes
levels in serum and liver tissue were decreased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Jianpi yiqi decoction shows
therapeutic effect on liver cancer model rats，the mechanism of which may be associated with down-regulating the expression of
NLRP3 inflammasome and inhibiting programmed cell necrosis.
KEYWORDS Jianpi yiqi decoction；Liver cancer；Nod-like receptor family 3 inflammasome；Programmed necrosis

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。2020 年全球肝癌 系统（美国 Bio-Rad公司）。
新发病例数超90万例，其中我国占45％，且发病率居第 1.2 主要药品与试剂
5 位、病死率居第 2 位 。研究表明，癌细胞转移是导致 黄芪、白术、云苓、白芍、半夏、薏仁、神曲等药材均
[1]
大部分癌症患者死亡的主要原因，其中肿瘤炎症微环境 购自广西中医药大学第一附属医院，由广西中医药大
在癌细胞转移中发挥了重要作用 [2－3] 。 学中药鉴定教研室田慧教授鉴定均为真品。其他主
肝癌属于中医学“肝积”“肝壅”等范畴，临床实践证 要 药 品 与 试 剂 有 ：DEN（美 国 Sigma 公 司 ，批 号
明中医药治疗肝癌能改善患者的临床症状、延长其生存 N0756-10ML），TNF-α酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂
[4]
期 。健脾是目前中医临床防治肝癌的重要治则。健脾 盒（武汉华美生物工程有限公司，批号L17013096），白细
益气方是本课题组根据肝癌临床治疗经验和相关文献 胞介素 1β（IL- 1β）ELISA 试剂盒（武汉依莱瑞特生物科
研究归纳总结出的防治肝癌的基本方。该方由黄芪、白 技股份有限公司，批号 6S5915PQSP），兔源甘油醛-3-磷
术、云苓、白芍、半夏、薏仁和神曲等7味中药组成，对肝 酸脱氢酶（GAPDH）多克隆抗体、兔源 RIP1 多克隆抗体
癌具有良好的治疗作用 [5－6] 。本课题组前期研究发现， （武汉三鹰生物技术公司，批号分别为 17519-1-AP、
健脾益气方能明显下调 NOD 样受体家族 3（NLRP3）炎 00060976），兔源 RIP3 多克隆抗体、兔源 MLKL 多克隆
症小体核心分子胱天蛋白酶 1（caspase-1）的表达，抑制 抗体（武汉爱博泰克生物科技有限公司，批号分别为
肝癌细胞的增殖和侵袭，诱导肝癌细胞凋亡 [7－8] ，但其治 A5431、A13451），兔源 NLRP3 多克隆抗体（美国 Abcam
疗肝癌的具体作用机制尚不明确。 公司，批号B-3），鼠源ASC单克隆抗体、鼠源pro-caspase-
细胞程序性坏死是一种炎症相关的程序性死亡，可 1 单 克 隆 抗 体（美 国 Santa Cruz 公 司 ，批 号 分 别 为
由肿瘤坏死因子α（TNF-α）激发信号，使受体相互作用蛋 #J1518、#J1518），辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫
白 激 酶 1（RIP1）进 入 细 胞 质 ，然 后 招 募 RIP3 形 成 球蛋白 G（IgG）多克隆抗体（二抗）、辣根过氧化物酶标
RIP1-RIP3 复合物，使 RIP3 磷酸化，从而募集并磷酸化 记的山羊抗鼠IgG多克隆抗体（二抗）、ECL发光试剂盒
混合系激酶区域样蛋白（MLKL）；磷酸化后的MLKL转 （北京中杉金桥生物有限公司，批号分别为 00081002、
移至细胞膜，形成膜孔从而引起细胞坏死 [9－11] 。研究发 00062578、7E34E9）；MCC950、VX-765（美国MCE公司，
现，在肝癌发生发展中发挥重要作用的NLRP3炎症小体 批号分别为#39462、#32669）；其余试剂均为实验室常用
主要由NLRP3、衔接子凋亡相关斑点样蛋白（ASC）及效 规格，水为纯净水。
应分子caspase-1前体（pro-caspase-1）组成，激活的NLRP3 1.3 动物
炎症小体可以促进 TNF-α的释放 。因此，本课题组推 本研究所用动物为 SPF 级 SD 大鼠，雄性，体质量
[12]
测健脾益气方可能是通过下调 NLRP3 炎症小体的活性 （140±20）g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，
来影响 TNF-α的释放，进而抑制细胞程序性坏死，发挥 动物生产许可证号为 SCXK（湘）2016-0002。大鼠饲养
治疗肝癌的作用。 于广西中医药大学SPF级实验动物中心，均自由摄食饮
基于此，本研究采用二乙基亚硝胺（DEN）诱导建立 水。本研究动物实验均符合广西中医药大学动物伦理
大鼠肝癌模型，以 MCC950（NLRP3 抑制剂）和 VX-765 委员会标准。
（caspase-1抑制剂）为对照进行干预 [13－14] ，初探健脾益气 2 方法
方是否基于 NLRP3 炎症小体介导的程序性坏死来发挥 2.1 健脾益气方灌胃溶液的制备
治疗肝癌的作用，以期为肝癌的临床治疗提供参考。 按健脾益气方处方称取黄芪、白术、云苓、白芍、半
1 材料 夏、薏仁、神曲等药材适量，加10倍量（按L/kg计，下同）
1.1 主要仪器 水浸泡1 h后，煎煮1.5 h，过滤；再加8倍量水煎煮1 h，过
本研究所用主要仪器有：Epoch Biotek 型全波长酶 滤；合并2次滤液，浓缩制成质量浓度为1 g/mL（以生药
标仪（美国 Bio-Tek 公司）、DMI3000B 型倒置显微镜（德 量计）的药液，经过滤除菌后分装备用。
国Leica公司）、ST 16R型高速离心机（美国Thermo Fisher 2.2 分组、造模与给药
Scientific 公司）、DYCZ-24DN 型双垂直电泳槽（北京六 将80只大鼠适应性喂养3 d后，随机分为正常组、模
一生物科技有限公司）、ChemDoc MP 全能型成像分析 型组、NLRP3 抑制剂组（MCC950，4.5 mg/kg，剂量参考

中国药房 2021年第32卷第19期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19 ·2343 ·