Page 38 - 2021年19期

powder”volatile oil on the viability of FLS were examined by CCK-8 assay. KOA inflammatory cell model was induced by
lipopolysaccharide for 12 h. The effects of 10，250 μg/mL“Sanse powder”volatile oil on the protein and mRNA expression of
NLRP3，caspase-1 and apoptosis-associated speck-like protein（ASC）were detected. The levels of IL-1β and IL-18 in supernatants
of FLS were determined. RESULTS：Totally 0.51-0.61 g volatile oil with yellow clear and unique aromatic odor were extracted
from“Sanse powder”，and the extraction rate was 0.33％-0.41％（n＝9）. A total of 41 chemical components were isolated，and 30
of them were identified and their peak area accounted for 90.073 6％ of the total peak area. The components with high relative
content were gingerol flavonoids（17.573 9％），δ-junionene（15.434 5％），gingerol（11.509 5％），etc. When the concentration of
volatile oil was 10-250 μg/mL，there was no significant effect on survival rate of FLS（P＞0.05）. Compared with blank group，the
relative protein and mRNA expression of NLRP3，caspase-1 and ASC and the levels of IL-1 β and IL-18 in supernatant were
significantly increased in model group（P＜0.05）. Compared with model group，relative expression or levels of above indexes
were all decreased significantly in FLS and supernatant of“Sanse powder”volatile oil 10 and 250 μ g/mL groups （P＜0.05）.
CONCLUSIONS：“Sanse powder”volatile oil can inhibit NLRP3 inflammasome activation in FLS and reduce the downstream
inflammatory cascade response，thus exerting its efficacy in ameliorating synovial inflammation of KOA.
KEYWORDS Knee osteoarthritis；Synovial inflammation；Nod-like receptor family 3 inflammasome；Sanse powder；Volatile
oil；Fibroblast-like synovial cells

膝骨关节炎（KOA）是骨科最常见的退行性疾病，滑 脂质组学研究结果显示，其核心组成“三色散”在改善
[9]
膜炎症是其主要病理特征之一。该病的发病率和致残 KOA 模型大鼠脂质代谢紊乱方面具有积极作用 。与
率逐年升高且有年轻化的趋势。据统计，我国45岁以上 此同时，笔者通过文献调研发现，作为中药重要活性成
人群症状性KOA的发病率就高达8.1％ 。滑膜炎症作 分之一的挥发油具有抗炎、抗菌、镇痛等多种药理活
[1]
为 KOA 发病的始动因素，很可能在软骨变性之前就已 性 [10－11] 。“三色散”作为一种外敷方，挥发性成分（主要是
[2]
经发生，并贯穿于 KOA 的整个病程 。目前，针对 KOA 挥发油）是其外治有效的重要物质基础，具有重要的药
的治疗大多围绕在抗炎止痛方面，手段以口服非甾体抗 用价值 [5，8] 。有研究指出，在 KOA 滑膜炎症的相关研究
炎药和关节腔注射药物为主。然而，口服抗炎药可能引 中，成纤维样滑膜细胞（FLS）是滑膜中最常见的细胞，也
[2]
发胃出血、心血管疾病等不良反应，关节腔注射药物则 是滑膜炎症的主要效应细胞 ，因此在细胞层面研究药物
大大增加了患者的感染风险，使得两者的临床应用均受 的抗炎机制具有积极的指导意义。基于此，本研究拟利
限。祖国医学的传统贴敷疗法因经皮吸收，所以无明显 用气质联用（GC-MS）技术对“三色散”挥发油成分进行
的肝肾毒性，其引发胃肠道不良反应和心血管疾病的风 分析；并以大鼠 FLS 为对象，基于 NLRP3 炎症小体活化
[3]
险较低，其中“易层”贴敷就是该疗法的优秀代表之一 。 探讨“三色散”挥发油减轻 KOA 滑膜炎症的可能机制，
“易层”贴敷片由“三色散”和“三黄油膏”组方而成， 旨在为其相关新剂型的开发奠定基础。
是南京中医药大学附属医院骨伤科的院内制剂，已获得 1 材料
国家实用新型专利（专利号 ZL200820185241.8）。本研 1.1 主要仪器
究团队在长期的临床实践中发现，临床可根据 KOA 患 本研究所用主要仪器包括 7890A-5975C 型 GC-MS
者的证型变化加减贴敷片层次，以随证易层、对证下药， 仪 、NIST11 标 准 质 谱 检 索 库（美 国 Agilent 公 司），
治疗效果较好 ；同时，经近 10 年的临床研究证实，“易 AB7500 型实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）系统（美
[4]
层”贴敷技术是值得传承和推广的中医适宜外治技术 ， 国 Applied Biosystems 公司），ThermoMixer C 型舒适型
[5]
现已成为江苏省省级 KOA 非手术中医康复方案之一。 恒温混匀仪、BioPhotometer型核酸蛋白检测仪（德国Ep-
“三色散”为“易层”贴敷片的核心组成，是温经活血外治 pendorf 公司），GG17-5000mL 型挥发油提取器装置（南
法的代表方之一，由片姜黄、白芷、羌活、独活、川芎、当 京南奥科技有限公司），PTHW型可调温电热套（通州市
归、连翘、炒蔓荆子、丹参、川牛膝、防风、制马钱子、秦 申通电热器厂），170-3930 型蛋白电泳仪及转膜仪系统
艽、紫荆皮、木瓜、赤芍、天花粉、威灵仙、防己、甘草等20 （美国 Bio-Rad 公司），LAS4000 型超灵敏化学发光成像

味中药材按质量比0.25∶0.25∶0.25∶0.25∶0.12∶0.25∶0.12∶ 系统（美国 GE 公司），EL800 型酶标仪（美国 Enspire 公
1.00 ∶ 0.25 ∶ 0.25 ∶ 0.25 ∶ 0.25 ∶ 0.12 ∶ 1.00 ∶ 0.25 ∶ 0.25 ∶ 0.25 ∶ 司），ACB-4A1 型 超 净 工 作 台（新 加 坡 Esco 公 司），
0.25 ∶ 0.25 ∶ 0.06 组成 。本研究团队率先通过体内外实 HREAcell 150i 型 CO2 细胞培养箱（美国 Thermo Fisher
[6]
验证实了KOA的发生与NOD样受体家族3（NLRP3）炎 Scientific公司）等。
症小体为代表的焦亡途径高度相关 ；通过进一步的研 1.2 主要药品与试剂
[7]
究发现，“易层”贴敷片可通过高迁移率族蛋白 B1 “三色散”粉剂（批号 Z04000566，规格 2.5 kg/包）由
（HMGB1）途径来改善 KOA 模型大鼠的滑膜纤维化 ； 南京中医药大学附属医院药剂科提供；RNA快速提取试
[8]

·2336 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 19 中国药房 2021年第32卷第19期