Page 69 - 2021年18期

表1 猴耳环不同极性部位各项指标的结果（n＝3） 0.20
0.18
Tab 1 Results of various indexes of different polar
0.16
parts in A. clypearia（n＝3） 0.14
0.12
不同极性部位 多酚含量（x±s），％ DPPH的IC50，mg/mL ABTS的IC50，mg/mL AU 0.10
石油醚 ＞100. ＞100.
0.08
乙酸乙酯 43.77±1.26 ＜0.05 0.073 0.06 水部位
正丁醇 11.31±0.84 0.297 1.155 0.04 正丁醇部位
水 4.08±0.59 1.228 ＞100. 0.02 乙酸乙酯部位
0 石油醚部位
白溶液（水+DPPH 乙醇溶液）的吸光度，计算样品对
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55
[23]
DPPH自由基的清除率 。（2）ABTS自由基清除实验：取 t，min
“2.5.1”项下不同极性部位的系列样品溶液各0.4 mL，分 图3 猴耳环不同极性部位的超高效液相色谱图
别加入 ABTS 工作液（7 mmol/L 的 ABTS 溶液与 5.16 Fig 3 UPLC chromatograms of different polar parts
mmol/L 的过硫酸钾溶液等体积混合）4 mL，混匀，室温 of A. clypearia
下避光反应 6 min 后，在 734 nm 波长处测定吸光度，同 表2 猴耳环不同极性部位各色谱峰的峰面积
法测定对照溶液（样品+无水乙醇）和空白溶液（水+ Tab 2 Peak areas of chromatographic peaks of dif-
ABTS工作液）的吸光度，计算样品对ABTS自由基的清 ferent polar parts of A. clypearia
[24]
除 率 。（3）DPPH 或 ABTS 清 除 率 的 计 算 ：DPPH 或 峰号 石油醚部位 乙酸乙酯部位 正丁醇部位 水部位
1 1 300 468 182 1 040 402 486 897
ABTS清除率（％）＝[1－（A 样品－A 对照 ）/A 空白]×100％。采
2 － 359 060 54 279 －
用 SPSS 25.0 软件建立 Probit 回归以计算半数抑制浓度 3 － 9 939 56 874 5 211
（IC50 ）。结果显示，对 DPPH 自由基的清除活性由强到 4 － 10 737 54 855 18 647
弱依次为乙酸乙酯部位＞正丁醇部位＞水部位＞石油 5 － 55 439 64 716 －
6 － 59 047 47 635 －
醚部位，对ABTS自由基的清除活性由强到弱依次为乙 7 － 375 610 261 990 －
酸乙酯部位＞正丁醇部位＞水部位≈石油醚部位，由此 8 － 60 832 29 859 －
可见，乙酸乙酯部位对 DPPH 和 ABTS 自由基的清除作 9 － 422 731 301 987 －
10 － 70 990 39 784 －
用最强，正丁醇部位次之，石油醚部位清除 DPPH 和 11 － 75 109 29 575 －
ABTS自由基的IC50较大，基本无抗氧化活性，详见表1。 12 － 246 631 161 648 －
2.5.4 猴耳环不同极性部位色谱峰与抗氧化活性的关 13 － 195 153 126 699 －
14 7 324 4 550 979 2 850 695 －
联度分析 取“2.5.1”项下质量浓度为5.0 mg/mL的各极 15 6 340 2 711 519 1 857 437 －
性部位样品溶液，按如下色谱条件进行 UPLC-PDA 分 16 4 693 792 766 580 572 －
析：以ACQUITY UPLC T3 C 18 （100 mm × 2.1 mm，1.8 μm） 17 － 88 788 85 795 －
18 － 1 755 761 1 158 267 －
为色谱柱，以甲醇为流动相 A、0.2％磷酸溶液为流动相 19 － 55 430 35 840 －
B 进行梯度洗脱（0～2.00 min，6％A→17％A；2.00～ 注：“－”表示未检出
10.00 min，17％A→23％A；10.00～15.00 min，23％A→ Note：“－”means not detected
26％A；15.00～20.00 min，26％A→30％A；20.00～25.00 表 3 猴耳环多酚各色谱峰峰面积与 IC50 的关联度
min，30％A→32％A；25.00～30.00 min，32％A；30.00～ （DPPH，前10位）
40.00 min，32％ A→38％ A；40.00～50.00 min，38％ A→ Tab 3 Correlation of peak area of polyphenols from
48％A；50.00～55.00 min，48％A→6％A），流速为 0.3 A. clypearia with IC50 （DPPH，top 10）
mL/min，检测波长为 270 nm，柱温为 30 ℃，进样量为 3 序号 峰号 关联度 序号 峰号 关联度
[21]
μL 。其色谱图见图 3，峰面积见表 2。以 DPPH 和 1 3 0.810 9 6 16 0.625 6
2 4 0.722 2 7 15 0.609 5
ABTS的IC50的倒数为参考数列、多酚含量为评价数列、
3 17 0.687 6 8 19 0.601 9
色谱图中各色谱峰的峰面积为比较数列进行灰色关联 4 1 0.670 5 9 5 0.601 9
度分析 [25－26] ，结果见表3、表4。 5 2 0.633 6 10 12 0.600 9
由表 3、表 4 可知，猴耳环多酚各色谱峰峰面积与 2.6 猴耳环多酚的改良型双水相萃取
DPPH、ABTS的IC50关联度（前10位）均大于0.5，表明猴 按“2.4”项下方法超声，将其中冷却至室温后加入的
耳环对DPPH和ABTS自由基的清除活性与其多酚含量 乙醇替换为乙酸乙酯-乙醇混合溶液，分相后即为改良
具有一定的相关性。由图3、表2可知，抗氧化活性贡献 型双水相萃取体系。向改良型双水相萃取体系中加入
较大的多酚类成分大部分富集在猴耳环的乙酸乙酯部 猴耳环药材粉末 1 g，超声提取 20 min，滤去药渣，分别
位。综合考虑，选择乙酸乙酯作为改良剂。 取上相和下相溶液用于后续测定。

中国药房 2021年第32卷第18期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 ·2239 ·