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的分配情况，即上下相质量浓度之比 。 2.4.2 乙醇质量分数 固定料液比为1∶45、超声时间为
[22]
2.4 双水相萃取体系优化 20 min，考察不同乙醇质量分数（20％、25％、30％、
采用单因素实验优化猴耳环多酚的双水相萃取体 35％、40％）对猴耳环多酚提取的影响。结果显示，乙醇
系。以多酚含量、提取效率和分配系数为指标，考察料 质量分数影响分水能力，当乙醇质量分数为20％～30％
时，分配系数较高；当乙醇质量分数＞30％时，多酚含量
液比（g/mL，下同）、乙醇质量分数和超声时间对猴耳环
随乙醇质量分数的增加呈缓慢升高的趋势，提取效率呈
多酚提取的影响。
先降低后升高的趋势，分配系数明显下降，详见图 2B。
2.4.1 料液比 固定乙醇质量分数为25％、超声时间为
综合考虑，选择乙醇质量分数为40％。
20 min，考察不同料液比（1 ∶ 25、1 ∶ 30、1 ∶ 35、1 ∶ 40、1 ∶ 45、
2.4.3 超声时间 固定料液比为1∶45、乙醇质量分数为
1 ∶ 50、1 ∶ 60）对猴耳环多酚提取的影响。结果显示，多酚
25％，考察不同超声时间（10、20、30、40、50、60 min）对
含量随着料液比的变化（1 ∶ 25→1 ∶ 60）呈先升高后降低 猴耳环多酚提取的影响。结果显示，当超声时间为20～
的趋势，且在料液比1 ∶ 45时达到峰值；提取效率随着料 40 min时，分配系数较高；超声时间的变化对多酚含量、
液比的变化（1 ∶ 25→1 ∶ 60）呈先升高后降低再升高的趋 提取效率的影响不大，超声20 min后多酚含量和提取效
势，且在料液比 1 ∶ 40 时达到峰值；当料液比在 1 ∶ 30～ 率不再明显增加，详见图2C。综合考虑，选择超声时间
1 ∶ 45范围内，分配系数较高且趋于平稳，详见图2A。综 为20 min。
合考虑，选择料液比为1∶45。 2.4.4 验证实验 在料液比 1 ∶ 45、乙醇质量分数 40％、
30 多酚含量，％ 90 18 硫酸铵质量分数11％（根据系线方程计算）、室温超声提
提取效率，％
28 分配系数 89 取 20 min 的条件下，重复提取 3 次，按“2.3”项下方法测
88 17
26
87 定并计算多酚含量、提取效率、分配系数。结果显示，猴
％ 24 86 ％ 16
多酚含量， 22 85 提取效率， 15 分配系数 耳环多酚含量为（28.35±1.01）％（RSD＝3.56％，n＝3），
84
20
18 83 14 提取效率为（98.87±0.19）％（RSD＝0.19％，n＝3），分配
82 系数为 13.25±0.71（RSD＝5.39％，n＝3），表明该体系
16 13
81
14 80 12 稳定、可行，可用于猴耳环中多酚的提取。
1 ∶ 25 1 ∶ 30 1 ∶ 35 1 ∶ 40 1 ∶ 45 1 ∶ 50 1 ∶ 60
料液比 2.5 改良剂的筛选
A.料液比 本研究结合药效学实验考察不同极性萃取剂对多
32 多酚含量，％ 96 28
30 提取效率，％ 94 24 酚富集情况的影响，选出最佳改良剂，以扩大两相极性
分配系数
28 92 差异，去除双水相萃取体系引入的硫酸铵。
％ 26 90 ％ 20 2.5.1 样品的制备 按“2.4”项所得最优双水相萃取体
多酚含量， 22 86 提取效率， 12 分配系数 系提取猴耳环多酚。取上相依次加入等体积的石油醚、
88
16
24
84
20
82 8 乙酸乙酯和正丁醇，浓缩后于60 ℃干燥，用甲醇复溶并
18 80
16 78 4 稀释、定容至10 mL量瓶中；剩余少量水层经60 ℃烘干
14 76 0
20 25 30 35 40 后用水复溶并稀释、定容至 10 mL 量瓶中，分别得到石
乙醇质量分数，％ 油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水等4个部位的样品溶液，质
B.乙醇质量分数
量浓度均为 200 mg/mL（以生药量计）。取各部位样品
30 多酚含量，％ 100 24
提取效率，％
28 分配系数 22 溶液适量，用水稀释成质量浓度分别均为 5.0、2.0、1.0、
98
26 20 0.5、0.05 mg/mL（均以生药量计）的不同极性部位的系列
％ 24 96 ％ 18 样品溶液。
多酚含量， 22 94 提取效率， 16 分配系数 2.5.2 猴 耳 环 不 同 极 性 部 位 多 酚 含 量 的 测 定 取
14
20
18 12 “2.5.1”项下不同极性部位的样品溶液，按“2.3”项下方法
92 10
16 8 测定多酚含量。每份样品平行操作3次。结果显示，石
14 90 6
10 20 30 40 50 60 油醚部位中未见多酚，乙酸乙酯部位中多酚含量最高，
超声时间，min
C.超声时间 正丁醇部分次之，详见表1。
图2 双水相萃取体系中不同参数对猴耳环多酚提取的 2.5.3 猴耳环不同极性部位抗氧化活性的检测 （1）
影响 DPPH 自由基清除实验：取“2.5.1”项下不同极性部位的
Fig 2 Effects of different parameters on the extrac- 系列样品溶液各2 mL，分别加入0.1 mmol/L DPPH乙醇
tion of polyphenols from A. clypearia in aqueous 溶液 2 mL，混匀，暗处放置 30 min 后，在 517 nm 波长处
two-phase system 测定吸光度，同法测定对照溶液（样品+无水乙醇）和空
·2238 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 中国药房 2021年第32卷第18期
