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猴耳环 Archidendron clypearia（Jack）Benth 为含羞 2 方法与结果
草科猴耳环属植物，主要分布在广东、海南、广西、湖南 2.1 双水相相图的绘制
等地，是我国南方的特色中药材，具有清热解毒、凉血消 根据浊点滴定法绘制双水相相图 。取一定量的
[18]
肿、止泻、去湿敛疮的功效 。猴耳环的主要活性成分有 硫酸铵，加水超声（功率350 W，频率53 kHz，下同）使溶
[1]
黄酮类、黄烷类和有机酚酸类等多酚物质，具有抗炎、抗 解，冷却至室温后加入适量乙醇，溶液由澄清变为浑浊
菌、抗病毒、降血糖等作用 [2－6] 。 （静置，振摇再静置，均为浑浊），此时为相变点，记录体
多酚提取方法包括溶剂回流/超声提取法、酶提取 系总质量及乙醇质量；加水约2 mL，体系由浑浊变为澄
法、超临界流体萃取法等 [7－9] ，这些方法存在提取率低、 清（静置，振摇再静置，均为澄清），即可进行下一个相变
设备昂贵等缺点 [7－9] 。双水相萃取是利用物质在两相中 点的测定。重复上述操作，采用Origin 2019b软件，以硫
分配系数的差异进行分离提取的方法，其中醇-盐双水 酸铵质量分数（x）为横坐标、乙醇质量分数（y）为纵坐标
相体系（如乙醇-硫酸铵）因其成本低、生物相容性好、条 绘制双水相相图，结果见图1。
件温和、配制简单等优点，在生物提取、天然产物分离等
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方面的应用日益广泛 [10－11] 。乙醇-硫酸铵双水相萃取是 A
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利用乙醇和硫酸铵共同竞争水，从而使乙醇在水中的溶 35
解度降低而导致分层，其中上相是含硫酸铵的乙醇溶 ％ 30 两相区
液，下相是含乙醇的硫酸铵溶液。上相富含乙醇，有利 乙醇质量分数， 25 B
于有效成分从药材中溶出释放，而大极性杂质则转移至 20
下相（水相）。但这一提取方法会在分离提取的同时引入 15 单相区
硫酸铵，因此有必要对双水相萃取体系进行改良 [12－14] 。 10 C
目前，猴耳环常用水、乙醇、甲醇为溶剂进行提取， 5
提取后还需要进一步纯化或者萃取才能得到有效部 10 15 20 25 30 35 40
硫酸铵质量分数，％
位 [15－17] 。本课题从有效部位研究的角度出发，以多酚含
图1 乙醇-硫酸铵双水相相图
量、提取效率和分配系数为指标，优化双水相萃取工艺
Fig 1 Phase diagram of ethanol-（NH4 ） 2SO4 aqueous
参数，并在此基础上，加入改良剂（如乙酸乙酯、正丁醇
two-phase system
等）建立改良型双水相萃取体系，以期达到一步分离提
取猴耳环多酚的目的，为植物多酚的提取和双水相萃取 由图 1 可见，AC 为双节曲线，其下方为单相区，上
的应用提供参考。 方为两相区，曲线上的点为成相临界点；ABC 为系
1 材料 线 [19－20] 。采用 Excel 2016 软件计算，得系线方程如下：
1.1 主要仪器 y＝－1.229 5x+53.317。
本研究所用主要仪器包括ACQUITY型超高效液相 2.2 猴耳环多酚的双水相萃取
色谱（UPLC）仪及配备的光电二极管阵列（PDA）检测器 按图 1 中双相区内乙醇-硫酸铵的比例取硫酸铵适
（美国Waters公司）、UV1800型紫外-可见光分光光度计 量，加水超声使溶解，冷却至室温后加入相应量的乙醇，
（日本 Shimadzu 公司）、RV8 型旋转蒸发仪（德国 IKA 公 分相后即为双水相萃取体系。向该体系中加入猴耳环
司）、BSA224S-CW 型电子分析天平（德国 Sartorius 公 药材粉末 1 g，超声提取 20 min，滤去药渣，分别取上相
司）、SK7200LHC 型超声波清洗器（上海科导超声仪器 和下相溶液用于后续测定。
有限公司）等。 2.3 多酚含量、提取效率、分配系数的测定
1.2 主要药品与试剂 采用福林酚比色法测定多酚含量 。以没食子酸
[21]
猴耳环药材[批号 DLS-20200422，经课题组检测其 为对照品，以紫外-可见分光光度计在 753 nm 波长处测
多酚含量为 25.82％（g/g）]由广东态合堂实业有限公司 定吸光度，以待测物质量浓度（x）为横坐标、吸光度（y）
提供，经广东药科大学何伟教授鉴定为真品；没食子酸 为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y＝0.013 8x+
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对照品（批号 110831-201605，纯度 90.8％）购自中国食 0.021 3（R ＝0.999 8），并按此回归方程计算上、下相溶
品药品检定研究院；乙醇、石油醚（60～90 ℃）、乙酸乙 液中多酚的浓度（以没食子酸计）。该方法的方法学考
酯、正丁醇、硫酸铵、磷酸、碳酸钠均购自天津市致远化 察见文献[21]。按如下公式计算多酚含量（Y）、提取效率
学试剂有限公司；福林酚、1，1-二苯基-2-三硝基苯肼 （R）和 分 配 系 数（K）：Y＝ctVt/M，R＝ctVt/（ctVt + cbVb ）×
（DPPH）、2，2′-联氮-双（3-乙基苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐 100％，K＝ct/cb。式中，ct为上相多酚浓度，Vt为上相体
（ABTS）均购自上海麦克林生化科技有限公司；甲醇为 积，M 为药材取样量，cb 为下相多酚浓度，Vb 为下相体
色谱纯，其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为 积。其中，提取效率是指上相中的物质含量占双水相萃
纯化水。 取出的总物质含量的比例，分配系数是指物质在两相中

中国药房 2021年第32卷第18期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 18 ·2237 ·