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母液（均以浸膏质量计）。取上述母液，以 13 000 r/min 0.90
0.75
离心 15 min；取上清液，以 0.45 μm 的微孔滤膜过滤，即 AU 0.60
0.45
得供试品溶液。 0.30
0.15
0
2.2.3 混合对照品溶液的制备 分别精密称定新绿原 0 15 30 45 60 75 90
t，min
酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸C的对照品 A.总部位
各适量，置于同一量瓶中，以 80％甲醇溶解、定容，制成 0.216
0.180
上述成分质量浓度分别为 0.035、0.88、0.036、0.08、0.055 AU 0.144
0.108
0.072
mg/mL的混合对照品溶液。 0.036
0
2.2.4 精密度试验 取“2.1”项下华佗豆总部位浸膏适 0 15 30 45 60 75 90
t，min
量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项 B.乙酸乙酯部位
下色谱条件连续进样测定 6 次。以 5 号峰为参照峰（色 1.80
1.50
谱峰峰形较好，下同），计算各共有峰的相对峰面积和相 AU 1.20
0.90
0.60
对保留时间。结果显示，各共有峰相对峰面积的RSD为 0.30
0
0.03％ ～2.47％ ，相 对 保 留 时 间 的 RSD 为 0.01％ ～ 0 15 30 45 60 75 90
t，min
1.99％（n＝6），表明仪器精密度良好。 C.正丁醇部位
2.2.5 重复性试验 取“2.1”项下华佗豆总部位浸膏适 0.72
0.60
量，再按“2.2.2”项下方法平行制备供试品溶液 6 份，按 AU 0.48
0.36
0.24
“2.2.1”色谱条件进样测定，以5号峰为参照峰，计算各共 0.12
0
有峰的相对峰面积和相对保留时间。结果，各共有峰的 0 15 30 45 60 75 90
t，min
相对峰面积的 RSD 为 0.53％～1.56％，相对保留时间的 D.水部位
RSD 为 0.01％～0.08％（n＝6），表明该制备方法重复性 图1 华佗豆不同极性部位的HPLC图
良好。 Fig 1 HPLC chromatogram of different polar parts
2.2.6 稳定性试验 取“2.1”项下华佗豆总部位浸膏适 of C. muricatum
量，再按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，于室温下放 3 200
3 000
置 0、2、4、8、16、24 h 时，再按“2.2.1”项下色谱条件进样 2 800
2 600
测定。以5号峰为参照峰，计算各共有峰相对峰面积和 2 400
2 200
相对保留时间。结果显示，各共有峰相对峰面积的RSD 2 000 水部位
mV 1 800
为 0.03％～2.88％，相对保留时间的 RSD 为 0.09％～ U， 1 600 正丁醇部位
1 400
1.45％（n＝6），表明该供试品溶液在室温下放置 24 h 内 1 200
1 000
稳定性良好。 800 乙酸乙酯部位
600
400
2.2.7 指纹图谱建立 取华佗豆不同极性部位浸膏适 200 总部位
0
量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 85 90 95
“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。将 t，min
上述华佗豆不同极性部位的色谱图导入到《中药色谱指 图2 华佗豆不同极性部位的HPLC叠加指纹图谱
Fig 2 HPLC superimposed fingerprint of different po-
纹图谱相似度评价系统》（2012A 版）中，以华佗豆总部
lar parts of C. muricatum
位的图谱为参照（其峰形较好、峰面积适中、分离度较
好），设置时间宽度为 0.1 s，经多点校正后进行全峰匹 2.3 华佗豆不同极性部位的镇痛作用考察
配，得到华佗豆不同极性部位的指纹图谱，详见图2。采 将 60 只小鼠分为空白组、罗通定组（0.03 g/kg）、华
用中位数法生成对照图谱R，详见图3。 佗豆总部位组（25 g/kg，以生药量计，下同）、华佗豆乙酸
由图2、图3可知，华佗豆不同极性部位共有11个共 乙酯部位组（25 g/kg）、华佗豆正丁醇部位组（25 g/kg）、
有峰。取“2.2.3”项下混合对照品溶液，按“2.2.1”项下色 华佗豆水部位组（25 g/kg），每组10只。上述各给药剂量
谱条件进样测定，记录色谱图，见图4。通过与图3进行 均参考本课题组前期实验结果设置 。空白组小鼠灌胃
[4]
比对，指认共有峰中 3 号峰为新绿原酸、5 号峰为绿原 水，其余各组小鼠灌胃相应药物，灌胃体积为2 mL/g，每
酸、6 号峰为隐绿原酸、10 号峰为异绿原酸 A、11 号峰为 天1次，连续给药3 d。末次给药后1 h，各组小鼠腹腔注
异绿原酸C。 射 0.7％醋酸溶液，并观察其 20 min 内的扭体次数。采

中国药房 2021年第32卷第17期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 17 ·2081 ·