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高质量浓度（1、5、30 μg/mL）待测样品，按“2.4.2”项下方 LSM-13低、中、高质量浓度（1、5、30 μg/mL）的QC样品，
法孵育15 min并处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测 均平行5份操作。各样品按“2.4.2”项下方法孵育15 min
定，记录LSM-13与内标的峰面积比值（A1 ）；取未加药的 并处理，处理后的样品分别于室温放置 12 h、4 ℃放置
灭活的肝微粒体适量，按“2.4.2”项下方法孵育15 min并 24 h、反复冻融 3 次（－80 ℃～室温）后，再按“2.1”项下
处理，随后加入“2.3.1”项下LSM-13贮备液适量，使最终 色谱条件进样测定，考察样品的稳定性。结果，在上述
质量浓度与上述待测样品对应，再按“2.1”项下色谱条件 条件下，各样品实测质量浓度的 RSD 均小于 5％，表明
进样测定，记录LSM-13与内标的峰面积比值（A2 ）；精密 样品的稳定性良好，详见表3。
量取“2.3.1”项下的 LSM-13 贮备液适量，加至灭活的大 表3 LSM-13定量分析的稳定性试验结果（n＝5）
鼠肝微粒体孵育体系中，配制成与上述待测样品质量浓 Tab 3 Results of stability tests of LSM-13 quantita-
度对应的质控（QC）样品，按“2.4.2”项下方法孵育 15 tive analysis（n＝5）
min 并处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录 室温放置 12 h 4 ℃冷藏 24 h 反复冻融3次
理论质量浓
LSM-13与内标的峰面积比值（A3 ）。每个质量浓度平行 实测质量浓度 RSD， 实测质量浓度 RSD， 实测质量浓度 RSD，
度，μg/mL
5份操作。按以下公式计算：基质效应＝（A2/A1 ）×100％； （x±s），μg/mL ％ （x±s），μg/mL ％ （x±s），μg/mL ％
1 1.06±0.44 4.11 1.05±0.14 8.07 1.05±0.04 3.41
提取回收率＝（A3/A2 ）×100％。结果，提取方法和基质效 5 4.80±0.11 2.25 4.81±0.11 2.25 4.86±0.16 3.31
应均不会影响LSM-13质量浓度的测定，详见表1。 30 28.96±0.55 1.90 29.29±0.61 2.09 29.42±0.75 2.56
表 1 LSM-13 定量分析的提取回收率与基质效应试验 2.6 LSM-13在SD大鼠肝微粒体中的稳定性考察
结果（n＝5） 按“2.4”项下方法进行体外代谢稳定性研究，采用底
Tab 1 Results of extraction recovery and matrix ef- 物消除法 考察 LSM-13 的代谢情况。将孵育 0 min 时
[9]
fect tests of LSM-13 quantitative analysis LSM-13 的质量浓度记为 100％，计算不同孵育时间点
（n＝5） LSM-13在大鼠肝微粒体中的剩余百分比。每个时间点
基质效应，％ 提取回收率，％ 平行 3 次操作，结果见表 4。由表 4 可知，在大鼠肝微粒
待测物 理论质量浓度，μg/mL
结果（x±s） RSD 结果（x±s） RSD 体中孵育 60 min 后，LSM-13 的剩余百分比为（56.07±
LSM-13 1 95.32±1.15 1.21 84.85±6.88 8.11
5 88.86±6.93 7.80 90.50±4.32 4.77 0.95）％。
30 96.98±4.12 4.25 89.72±2.04 2.27 表4 不同孵育时间下LSM-13在大鼠肝微粒体中的剩
内标 2 90.63±4.59 5.06 91.67±2.21 2.27
余百分比（x±±s，n＝3）
2.5.4 准确度与精密度试验 精密量取“2.3.1”项下的
Tab 4 The remaining percentage of LSM-13 in rat
LSM-13 贮备液适量，加至灭活的大鼠肝微粒体孵育体
liver microsomes after incubated for different
系中，制得 LSM-13 定量下限质量浓度（0.5 μg/mL）和
time（x±±s，n＝3）
低、中、高质量浓度（1、5、30 μg/mL）的QC样品，均平行5
孵育时间，min 剩余百分比，％ 孵育时间，min 剩余百分比，％
份操作。各样品按“2.4.2”项下方法孵育 15 min 并处理 0 100.00±3.10 20 82.52±8.48
后，再按“2.1”项下色谱条件重复进样 3 次，考察日内精 5 95.21±4.19 30 78.30±7.53
密度；连续进样3 d，考察日间精密度。将实测质量浓度 10 93.34±0.74 45 55.81±6.72
15 82.74±1.00 60 56.07±0.95
与理论质量浓度进行比较，考察准确度。结果，定量下
将各孵育时间点LSM-13的平均剩余百分比的自然
限质量浓度和低、中、高质量浓度 QC 样品的日内、日间
对数对孵育时间作线性回归，求得斜率k；根据k可计算
RSD 均小于 5％，准确度（以平均值计）为 94.30％～
出 LSM-13 在大鼠肝微粒体中的酶动力学参数[半衰期
[12]
110.08％，符合生物样品定量分析的要求 。
（t1/2 ）与 固 有 清 除 率（CLint ）]。 其 中 ，t1/2＝－ 0.693/k，
表 2 LSM-13 定量分析的精密度和准确度试验结果
CLint＝[0.693/t1/2 × 孵 育 液 体 积（mL）]/肝 微 粒 体 质 量
（n＝5）
[10]
Tab 2 Results of accuracy and precision tests of （mg） 。结果，LSM-13的t1/2为42.78 min，CLint为0.032 4
mL/（min·mg）。肝微粒体代谢稳定性的评价标准如下：
LSM-13 quantitative analysis（n＝5）
t1/2＜30 min，表明受试化合物不稳定；t1/2为 30～90 min，
精密度，％
理论质量浓度，μg/mL 准确度（x±s），％
日内RSD 日间RSD 表明受试化合物稳定性为中等；t1/2＞90 min，表明受试化
0.5 3.46 4.12 110.08±3.62 合物稳定 。由此可见，LSM-13 在大鼠肝微粒体中具
[10]
1 0.45 4.95 106.37±0.47
5 1.01 1.45 94.30±0.95 有中等稳定性。
30 0.92 1.15 95.92±0.88 2.7 LSM-13代谢产物的定性分析
2.5.5 稳定性试验 精密量取“2.3.1”项下的LSM-13贮 收集“2.6”项下孵育 60 min 时的肝微粒体孵育样品
备液适量，加至灭活的大鼠肝微粒体孵育体系中，制得 与空白孵育样品（空白大鼠肝微粒体同“2.4”项下方法孵

·2062 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 17 中国药房 2021年第32卷第17期