Page 61 - 2021年15期
P. 61

2.7.8  色谱峰的定位        根据“2.7.7”项下耐用性试验结             UPLC 仪在 20 min 内即可实现主要色谱峰的良好分离，
        果，以虎杖苷色谱峰为参照峰，计算白藜芦醇、大黄                            大大节约了分析时间。针对虎杖中的蒽醌类和二苯乙
        素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素色谱峰相对于参照峰的相                      烯类成分，笔者分别选择254、290、306 nm这3个不同的
        对保留时间。结果发现，采用不同的UPLC仪、色谱柱、                         检测波长对其进行考察，结果显示各色谱峰在254 nm波
        柱温和流速时，各待测成分相对保留时间的RSD均小于                          长处的信号较弱；虎杖苷在306 nm波长处的响应较强，
        5.0％，说明相对保留时间稳定，可以用于待测成分色谱                         但其他色谱峰的响应较弱；当选择290 nm作为检测波长
        峰的定位。                                              时，所有色谱峰的基线平稳且干扰较小，同时能检测出
        2.7.9  样品含量测定       精密称取15批虎杖药材粉末，分                更多特征成分，且各色谱峰的峰面积相差不大，因此最
        别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色                    终选取 290 nm 作为本研究的检测波长。在流动相的选
        谱条件进样测定，以外标法计算样品中虎杖苷的含量；                           择方面，笔者选择乙腈-0.2％甲酸溶液、甲醇-0.2％甲酸
        再分别采用外标法和一测多评法（以虎杖苷为内参物）                           溶液、乙腈-0.2％磷酸溶液、乙腈-0.2％乙酸溶液等 4 种
        计算虎杖药材中白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、                      不同的流动相系统进行试验，结果显示以乙腈-0.2％甲
        大黄素的含量，并计算两种方法所测含量的相对平均偏                           酸溶液为流动相进行梯度洗脱时，各色谱峰的分离度及
        差，结果如表5所示。                                         对称因子较好；进一步通过优化乙腈-0.2％甲酸溶液的
         表5 15批虎杖药材中4种有效成分的含量测定结果                          洗脱程序，可使虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄
        Tab 5 Results of content determination of 4 active  糖苷、大黄素的分离度均达到1.5以上，满足一测多评法
               components in 15 batches of P. cuspidatum   的分析要求。
                                                           3.2  指纹图谱分析
            虎杖                  大黄素-8-O-β-D-
            苷，％    白藜芦醇，％        葡萄糖苷，％        大黄素，％           本研究建立了15批虎杖药材的UPLC指纹图谱，确
        编号
            外标法 外标法  一测多 相对平  外标法  一测多 相对平  外标法  一测多 相对平   定了12个共有峰，并指认了其中5个成分。15批虎杖药
                     评法  均偏差       评法  均偏差      评法 均偏差
        S1  2.68  0.55  0.54  0.92  1.48  1.46  0.68  0.55  0.55  0  材的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度为 0.865～
        S2  2.66  0.61  0.59  1.67  1.40  1.37  1.08  0.61  0.61  0  0.976。安徽和重庆所产虎杖药材的质量与江西、浙江产
        S3  2.67  0.63  0.61  1.61  1.37  1.35  0.74  0.83  0.82  0.61  药材存在较大的差异；而江西和浙江两产地的药材指纹
        S4  3.01  0.82  0.80  1.23  0.87  0.86  0.58  0.84  0.83  0.60
        S5  3.34  0.88  0.86  1.15  0.72  0.72  0  0.88  0.87  0.57  图谱相似度虽然也有一定的差异，但与安徽、重庆产药
        S6  3.47  1.02  1.00  0.99  0.57  0.57  0  1.34  1.32  0.75  材相比差异较小。聚类分析和OPLS-DA均将15批虎杖
        S7  1.95  0.25  0.24  2.04  1.30  1.28  0.78  0.61  0.61  0  样品药材分为 4 类，呈现出一定的产地规律性。通过
        S8  1.86  0.26  0.25  1.96  1.04  1.03  0.48  0.69  0.68  0.73
        S9  1.78  0.20  0.19  2.56  0.91  0.90  0.55  0.54  0.54  0  VIP法以VIP＞1为标准筛选出差异性较大的组分，分别
        S10  1.88  0.26  0.25  1.96  0.83  0.82  0.61  0.45  0.45  0  为峰 7、峰 9（大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷）、峰 6（白藜芦
        S11  1.73  0.31  0.30  1.64  1.09  1.07  0.93  0.56  0.56  0  醇）、峰8、峰2（虎杖苷）、峰1和峰10，说明以上7个成分
        S12  1.97  0.32  0.31  1.59  1.11  1.09  0.91  0.67  0.66  0.75
        S13  1.89  0.25  0.24  2.04  0.56  0.56  0  0.91  0.90  0.55  对虎杖药材指纹图谱的影响较大，下一步将结合质谱分
        S14  1.90  0.23  0.22  2.22  0.32  0.32  0  0.72  0.71  0.70  析和药理研究对上述成分的谱效关系进行深入分析。
        S15  2.07  0.21  0.20  2.44  0.46  0.47  1.08  0.73  0.72  0.69
                                                           3.3  含量测定结果分析
            由表 5 可知，采用外标法和一测多评法测定的白藜
                                                               传统的单一成分定量难以全面反映药材的质量，而
        芦 醇 含 量 的 相 对 平 均 偏 差 为 0.92％ ～2.56％ ，大 黄
                                                           多指标检测方法因对照品不易获得，导致检测成本较
        素-8-O-β-D-葡萄糖苷含量的相对平均偏差为0～1.08％，
                                                           高。本研究利用UPLC仪的高效分离能力和高灵敏度的
        大黄素含量的相对平均偏差为0～0.75％，均小于3.0％，                      特点，实现了对虎杖药材中虎杖苷、白藜芦醇、大黄
        说明一测多评法与外标法的测定结果无明显差异。15                           素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素 4 种成分的一测多评；而
        批虎杖药材中，安徽产药材中的虎杖苷、白藜芦醇和大                           有效成分大黄素甲醚因受到色谱峰附近小杂质峰的影
        黄素的平均含量较高，重庆产药材中的大黄素-8-O-β-D-                      响，校正因子不稳定，因此未被纳入一测多评。对一测
        葡萄糖苷的平均含量较高；而以上述4种成分的总量计，                          多评法与外标法进行比较后发现，两者含量测定结果的
        安徽产药材的总量最高，重庆产药材次之，江西产药材                           相对平均偏差在 5.0％以内，说明两种方法的测定结果
        第三，浙江产药材最低，由此提示安徽和重庆所产虎杖                           基本一致。一测多评法的经济性与适用性较强，结合
        药材的质量可能较优。                                         UPLC 法可大大缩短分析时间，从而为虎杖药材的质量
        3 讨论                                               评价及控制提供了新思路。本研究根据 15 批虎杖药材
        3.1  色谱条件的优化                                       的含量测定结果，推测安徽、重庆所产虎杖药材的质量
            在指纹图谱和一测多评法的构建过程中，笔者采用                         较优；而考虑到重庆的虎杖药材产量大，建议可选择重


        中国药房    2021年第32卷第15期                                             China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15  ·1847 ·
   56   57   58   59   60   61   62   63   64   65   66