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苷 84.27、33.71、16.85、3.37 μg，含大黄素 81.40、32.56、 良好。
16.28、3.26 μg 的系列混合对照品溶液。取上述混合对 2.7.5 加样回收率试验 精密称取已知成分含量的虎
照品贮备液和系列混合对照品溶液各1 μL，按“2.1”项下 杖药材粉末（编号S1）约0.05 g，共9份，每3份一组，分别
色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积（y）为纵坐 按1 ∶ 0.5、1 ∶ 1、1 ∶ 1.5的质量比加入4种对照品，按“2.2.2”
标、对照品质量浓度（x）为横坐标进行线性回归，结果如 项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样
表3所示。 测定，记录峰面积，计算加样回收率。结果，虎杖苷、白
表3 4种成分的线性关系考察结果 藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素的平均加样
Tab 3 Linear ranges of 4 components 回收率分别为 100.34％、100.54％、100.34％和 99.62％，
成分 标准曲线 R 2 线性范围，μg/mL RSD 分别为 0.58％、0.86％、0.51％和 0.90％（n＝9），表
虎杖苷 y＝0.119 5x+0.015 2 0.999 7 3.78～189.00 明该方法准确度良好。
白藜芦醇 y＝0.198 0x－0.056 8 0.999 4 5.10～255.10
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 y＝0.105 7x+0.060 8 0.999 9 3.37～168.54 2.7.6 相对校正因子的计算 因为虎杖药材中虎杖苷
大黄素 y＝0.152 0x+0.110 4 0.999 9 3.26～162.79 的含量较高，且其对照品易得，故本研究以虎杖苷为内
2.7.2 精密度试验 取“2.7.1”项下混合对照品溶液（每 参物（S），按照下述公式计算相对校正因子：fsi＝fs/fi＝Cs×
1 mL 含 虎 杖 苷 37.80 μ g、白 藜 芦 醇 51.02 μ g、大 黄 Ai/（Ci×AS ）。式中，fsi为内参物与其他成分（i）的相对校正
素-8-O-β-D-葡萄糖苷33.71 μg和大黄素32.56 μg）适量， 因子，fs为内参物的校正因子，fi为其他成分（i）的校正因
按“2.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰面积。 子，Cs为内参物的对照品质量浓度，Ai为其他成分（i）的
结果，虎杖苷、白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大 对照品峰面积，Ci为其他成分（i）的对照品质量浓度，As
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黄素峰面积的 RSD 分别为 0.11％、0.13％、0.17％和 为内参物的对照品峰面积 。根据“2.7.1”项下线性关
0.21％（n＝6），表明仪器精密度良好。 系考察结果，以对照品的质量浓度及其对应的峰面积计
2.7.3 稳定性试验 取供试品溶液（编号S1）适量，分别 算内参物虎杖苷与白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖
于制备后在室温下放置 2、4、8、10、12、24 h 时按“2.1”项 苷、大黄素的相对校正因子。结果，f 虎杖苷/白藜芦醇的平均值
下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，虎杖苷、白藜 为 1.647，RSD 为 0.7％；f 虎杖苷/大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的平均值为
芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素峰面积的RSD 0.890，RSD 为 1.9％；f 虎杖苷/大黄素的平均值为 1.287，RSD 为
分别为0.22％、0.35％、0.11％和0.41％（n＝6），表明供试 2.4％，表明相对校正因子的稳定性和重现性良好。
品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。 2.7.7 耐用性试验 精密吸取“2.7.1”项下混合对照品
2.7.4 重复性试验 取同一批虎杖药材粉末（编号 S1） 溶液（每 1 mL 含虎杖苷 37.80 μg、白藜芦醇 51.02 μg、大
约 0.1 g，平行 6 份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品 黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 33.71 μg 和大黄素 32.56 μg）1
溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，以 μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，分别考
外标法计算样品含量。结果，样品中虎杖苷、白藜芦醇、 察不同UPLC仪、色谱柱、流速和柱温对相对校正因子的
大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素的平均含量分别为 影响。结果，相对校正因子的RSD均小于1.0％，表明上
2.68％、0.55％、1.48％和 0.55％，RSD 分别为 0.87％、 述不同条件对虎杖苷与白藜芦醇、大黄素-8-O-β-D-葡萄
1.15％ 、0.93％ 和 1.23％（n＝6），表 明 该 方 法 重 复 性 糖苷和大黄素的相对校正因子无明显影响，如表4所示。

表4 不同UPLC仪、色谱柱、流速和柱温对相对校正因子的影响
Tab 4 Effects of different UPLC instruments，columns，flow rates and column temperatures on relative calibra-
tion factors

虎杖苷/白藜芦醇 虎杖苷/大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷 虎杖苷/大黄素
考察条件 具体参数
相对校正因子 平均值 RSD，％ 相对校正因子 平均值 RSD，％ 相对校正因子 平均值 RSD，％
UPLC仪 Waters H-Class 1.639 1.646 0.38 0.878 0.885 0.79 1.277 1.285 0.58
Thermo Vanquish 1.648 0.892 1.285
Agilent 1290 infinity 1.651 0.884 1.292
色谱柱 Waters Cortecs T3（100 mm×2.1 mm，1.6 μm） 1.635 1.645 0.56 0.879 0.886 0.75 1.272 1.283 0.83
Waters BEH C18 （100 mm×2.1 mm，1.7 μm） 1.648 0.892 1.285
Waters HSS T3（100 mm×2.1 mm，1.8 μm） 1.653 0.888 1.293
流速，mL/min 0.38 1.642 1.646 0.23 0.883 0.890 0.75 1.281 1.282 0.24
0.40 1.648 0.892 1.285
0.42 1.649 0.896 1.279
柱温，℃ 38 1.643 1.645 0.16 0.887 0.893 0.68 1.296 1.286 0.74
40 1.648 0.892 1.285
42 1.644 0.899 1.277

·1846 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 15 中国药房 2021年第32卷第15期