Page 28 - 2021年14期

MDA，PC-Ⅲ，C-Ⅳ，LN，TNF-α and IL-6 in serum were decreased significantly in positive control group and TPME groups，
while the activities of SOD were increased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. The protein expression of α-SMA，TGF-β 1 and
Smad3 in liver tissue were decreased significantly （P＜0.05 or P＜0.01），and liver fibrosis was improved to different extent.
Compared with TPME low-dose group，the contents of PC-Ⅲ，LN and IL-6 in serum，protein expression of TGF-β 1 and Smad3 in
liver tissue were decreased significantly in TPME high-dose group （P＜0.05）. CONCLUSIONS：TPME can improve hepatic
fibrosis induced by CCl4 in mice，the mechanism of which may be associated with the inhibition of collagen synthesis and oxidative
stress，the reduction of inflammatory factors，and the down-regulation of the expression α-SMA and relative proteins of TGF-β 1/
Smad signal pathway.
KEYWORDS Tiarella polyphylla；Hepatic fibrosis；Inflammation response；Oxidative stress；TGF-β1/Smad signal pathway；Mice

肝纤维化（hepatic fibrosis）是肝脏遭到病毒、自由 丙二醛（MDA）试剂盒[硫代巴比妥酸法（TBA）]（批号分
基、炎症因子等损伤因素攻击时出现的损伤-修复反应， 别为 20201204、20201207、20201230、20201223）均购自
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是各种慢性肝病向肝硬化乃至肝癌发展的中间环节 。 南京建成生物工程研究所；肿瘤坏死因子α（TNF-α，批号
[2]
研究表明，肝纤维化具有可逆性 ，抑制并逆转肝纤维化 M2001106-102a）酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒购
对阻止慢性肝病向肝硬化、肝癌发展具有重要意义。 自深圳欣博盛生物科技有限公司；白细胞介素 6（IL-6，
[3]
目前，临床上尚无有效的肝纤维化治疗药物 。因 批号Nov 2020）ELISA试剂盒购自河南九邦生物科技有
此，寻找有效的抗肝纤维化药物成为了药物研发者的重 限公司；Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）ELISA 试剂盒、Ⅳ型胶原
要任务之一。近年来，越来越多的基础和临床研究均发 （C- Ⅳ）ELISA 试 剂 盒（批 号 分 别 为 L210104920、
现，中医药对肝纤维化有良好的治疗作用 [4－6] ，已成为了 L210104913）均购自武汉云克隆科技股份有限公司；层
近年来抗肝纤维化药物研究的热点。黄水枝 Tiarella 粘连蛋白（LN）ELISA 试剂盒（批号 A22011449）购自武
polyphylla D. Don为虎耳草科植物，具有活血祛瘀、消肿 汉华美生物工程有限公司；苏木精-伊红（HE）、Masson
止痛的功效；其主要化学成分为黄酮类、三萜皂苷类、挥 染料（批号分别为ZH203012、CR2101109）均购自武汉赛
发油等，具有抗肿瘤、抗补体、抗哮喘、保肝等方面的作 维尔生物科技有限公司；高效RIPA裂解液、BCA蛋白浓
用 [7 － 8] 。本课题组在前期研究中发现，黄水枝醇提物 度测定试剂盒、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
（TPME）具有抑制人肝星状细胞（HSC）——LX-2 细胞 （SDS-PAGE）凝胶制备试剂盒、彩虹 180 广谱蛋白 mar-
增殖的活性，故推测其具有抗纤维化的作用。为了验证 ker、ECL Plus 超敏发光液（批号分别为 R0010、PC0020、
此推测，本研究采用四氯化碳（CCl4 ）诱导建立小鼠肝纤 P1200、PR1910、PE0010）均购自北京索莱宝科技有限公
维化模型，观察 TPME 对模型小鼠肝纤维化的改善作 司 ；SDS-PAGE 蛋 白 上 样 缓 冲 液（5 × ，批 号
用，并对其可能的作用机制进行初步探讨，旨在为寻找 121817171214）购自上海碧云天生物技术有限公司；兔
有效的抗肝纤维化药物奠定基础。 抗鼠转化生长因子β 1 （TGF-β 1 ）、α-平滑肌肌动蛋白
1 材料 （α-SMA）单克隆抗体（批号分别为ab179695、ab124964）
1.1 主要仪器 均购自美国 Abcam 公司；兔抗鼠 Smad3 单克隆抗体（批
本研究所用的主要仪器包括 ELX-800 型全波段多 号 L1602077）购自北京博奥森生物技术有限公司；辣根
功能酶标仪、Universal HoodⅡ型凝胶成像分析仪（美国 过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（IgG）
BioTek公司），TGL16M型高速冷冻离心机（湖南凯达科 二抗（批号 9300014001）购自武汉爱博泰克生物科技有
学仪器有限公司），CP124C型电子天平[奥豪斯仪器（常 限公司；兔抗鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）单克隆
州）有限公司]，Eclipse E100 型正置光学显微镜（日本 抗体（批号T0004）购自美国Affinity公司；聚偏二氟乙烯
Nikon 公司），ZYCGF-Ⅱ-10T 型超纯水机（四川卓越水 （PVDF）膜（批号P2938）购自德国Merck公司；其余试剂
处理设备有限公司）等。 均为分析纯或者实验室常用规格，水为超纯水。
1.2 主要药品与试剂 1.3 实验动物
黄水枝全草（批号 202010）由昆明采智生物技术有 本研究所用实验动物为SPF级雄性昆明种小鼠，60
限公司提供，采集地为湖北省恩施市建始县芭蕉乡，经 只，体质量 18～22 g，由贵州医科大学实验动物中心提
贵州医科大学龙庆德副教授鉴定为黄水枝T. polyphylla 供，实验动物生产许可证号为SCXK（黔）2018-0001。小
D. Don的全草；秋水仙碱对照品（批号S15A8C34051，纯 鼠饲养环境通风良好，温度18～25 ℃，相对湿度40％～
度≥99％）购自上海源叶生物科技有限公司；天冬氨酸 70％，12 h光照昼夜循环。相关动物实验方案通过了贵
转氨酶（AST）试剂盒、丙氨酸转氨酶（ALT）试剂盒、超氧 州 医 科 大 学 实 验 动 物 伦 理 委 员 会 审 查 批 准（编 号
化物歧化酶（SOD）试剂盒[水溶性四氮唑法（WST-1）]、 2000069）。

·1686 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 14 中国药房 2021年第32卷第14期