Page 28 - 《中国药房》2021年13期

记载 [1－2] 。杜仲翅果皮是杜仲果实的皮，其中含有环烯 以期为其精制方法优化提供参考。
[3]
醚萜类、酚酸类、萜类、甾体类、苯丙素类等活性成分 。 1 材料
[4]
其中，苯丙素类化合物绿原酸具有抗菌、抗病毒 、抗 1.1 主要仪器
[5]
[9]
炎 、抗肥胖 、降血压 [7－8] 、神经保护 等药理作用，环烯 本研究所用主要仪器有：Agilent 1260 型高效液相
[6]
醚萜类化合物桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸均具有保护神 色谱仪（美国Agilent公司），SHA-C（A）型水浴恒温振荡
经、肝脏、心脏以及调节免疫、抗炎、抗肿瘤、降血糖等药 器（绍兴市苏珀仪器有限公司），DLSB-5L/10 型低温冷
理作用 [10－14] 。 却液循环泵（巩义市予华仪器有限责任公司），TG16.5型
本课题组前期采用酶解法、水提法、醇提法分别提 高速离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司），A-10型
取杜仲翅果皮中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸等成 超纯水仪（美国Millipore公司），BSA124S-CW型电子天
分，发现采用酶解法提取上述成分的效果最好。相关研 平（德国Sartorius公司），HC-XS18-6X型高压型膜分离设
究发现，中药提取液中除了有效成分外，通常还含有无 备[包括聚醚砜卷式超滤膜UF1（截留分子量为10 000）、
机盐、鞣质、蛋白质、多糖、淀粉、果胶等无效成分 [15－16] 。 UF2（截留分子量为30 000）、UF3（截留分子量为100 000）]、
本课题组在以酶解法提取杜仲翅果皮中桃叶珊瑚苷、京 HC-4015 型澄清小试设备（成都和诚过滤技术有限公
尼平苷酸、绿原酸等成分的过程中发现，该酶解提取液 司）。
中同样含有上述无效成分，从而增加了该提取液的精制 1.2 主要药品与试剂
难度。 本研究所用杜仲翅果皮购自山东贝隆杜仲生物工
超滤膜法是基于选择透过原理的一种方法，可使相 程有限公司，经贵州大学酿酒与食品工程学院张学俊教
对分子质量小于超滤膜截留分子量的成分透过超滤膜， 授鉴定为杜仲科植物杜仲 E. ulmoides Oliv.的干燥翅果
还可以截留 90％以上的杂质（相对分子质量为 1 000～ 皮。其他药品与试剂有酸性蛋白酶、果胶酶、纤维素酶
300 000），如有机物、胶体、悬浮固体等，从而可以实现有 （张家港大恒生物化工科技有限公司），酸性木聚糖酶
效成分（相对分子质量通常小于 1 000）与杂质的分离， （潍坊苏科汉生物工程有限公司），柠檬酸、柠檬酸钠（潍
达到精制的目的 。该方法具有无相变、环保、高效、易 坊英轩实业有限公司），桃叶珊瑚苷对照品、京尼平苷酸
[17]
实现自动化生产等特点，可保持有效成分的生物活 对照品、绿原酸对照品（北京索莱宝科技有限公司，批号
性 [17－18] 。因此，本文课题组根据预实验结果，设计了杜 分别为SA9840、SG8110、SC8210，纯度均不低于98％）；
仲翅果皮酶解提取液的超滤纯化工艺流程（见图1）。 乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯净水。
基于此，本课题组采用酶解法制备杜仲翅果皮的酶 2 方法与结果
解提取液，并根据设计的超滤纯化工艺流程，以其主要 2.1 杜仲翅果皮酶解提取液的制备
活性成分桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸的转移率以 称取杜仲翅果皮50.0 g至1 000 mL三角瓶中，加入
及固形物去除率为指标，在单因素实验的基础上，采用 经柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH 3.4）反复洗脱后的酸
Box-Behnken设计-响应面法优化该提取液的超滤工艺， 性蛋白酶液500 mL（酶含量为8％），置于53 ℃恒温水浴

F 15 P2 14
酸性蛋白酶酶解 透过液
4 200
残渣 抽滤
16 3 500
果胶酶酶解
6 5 13 2 800
残渣 抽滤
纤维素酶酶解 1 4 7 12 11 10 mAU 2 100
残渣 抽滤 P1 A X 1 400
酸性木聚糖酶酶解 700
抽滤 0
合并滤液 0 2 4 6 8 10
2 3 8 9 t，min
第1步（连续酶解提取） 第2步（澄清膜除杂） 第3步（高压膜分离纯化） 第4步（纯化后样品离心） 第5步（含量检测）
注：1.循环罐；2.排污阀；3.循环泵；4.澄清膜元件；5.冲排阀；6.浓度调节阀；7.循环罐；8.放空阀；9.循环泵；10.蓄能器；11.安全阀；12.膜前压力表；
13.膜元件；14.膜后压力表；15.变频器
Note：1. circulation tank；2. blow-down valve；3. circulating pump；4. clarification membrane element；5. flushing valve；6. concentration control
valve；7. circulation tank；8. vent valve；9. circulating pump；10. accumulator；11. safety valve；12. pressure gauge in front of membrane；13. membrane
element；14. pressure gauge behind membrane；15. frequency converter
图1 超滤纯化工艺流程示意图
Fig 1 Flow chart of ultrafiltration purification process

·1558 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13 中国药房 2021年第32卷第13期