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2.2.8 重复性考察 取“2.2.3”项下超滤后供试品溶液6 液（取杜仲翅果皮酶解提取液，按“2.2.3”项下方法制备）
份，按照“2.2.1”项下的色谱条件进样测定，记录峰面积， 适量，以 8 000 r/min 离心 30 min，取上清液，经 0.45 μm
按标准曲线法计算含量。结果，桃叶珊瑚苷、京尼平苷 微孔滤膜过滤，按“2.2.1”项下的色谱条件进样测定，记
酸、绿原酸的平均含量分别为 37.73、86.87、5.51 μg/mL， 录峰面积，根据标准曲线法计算杜仲翅果皮酶解提取
RSD 分别为 1.95％、1.31％、1.78％（n＝6），表明方法重 液、超滤透过液中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸的含
复性良好。 量，然后计算 3 种有效成分的转移率[有效成分转移率
2.2.9 加样回收率考察 精密量取“2.2.3”项下超滤后 （％）＝超滤透过液中有效成分的含量/杜仲翅果皮酶解
供试品溶液共18份（已知含桃叶珊瑚苷0.037 7 mg/mL、 提取液中有效成分的含量×100％]。
京尼平苷酸0.034 0 mg/mL、绿原酸0.005 6 mg/mL），每6 2.4 单因素实验
份为一组，每组分别按桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸 本课题组通过预实验发现，在超滤工艺中，超滤膜
质量比约1 ∶ 1.1加入对照品溶液（按“2.2.2”项下的方法， 截留分子量、料液温度、操作压力（膜过程透过性的主要
分别制备桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸质量浓度分 影响因素）、操作频率（控制膜面流速的主要参数）、过膜
别为0.035 0、0.030 0、0.005 0 mg/mL的对照品溶液），然 时间、料液浓度、料液pH均能对有效成分的转移率和固
后按“2.2.1”项下的色谱条件进样测定，计算加样回收 形物去除率产生影响，故以桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿
率，结果见表2。 原酸的转移率和固形物去除率的综合得分[参考文
表2 桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸的加样回收率试 献[23]，分别计算得桃叶珊瑚苷转移率（X1 ）、京尼平苷酸
验结果 转移率（X2 ）、绿原酸转移率（X3 ）、固形物去除率（X4 ）的权
Tab 2 Results of recovery tests of aucubin，genipo- 重分别为 0.285 6、0.291 5、0.207 2、0.215 6；并进行归一
side acid and chlorogenic acid 化处理，计算综合得分（0.285 6×X1+0.291 5×X2+0.207 2×
成分 已知含量，mg 加入量，mg 测得量，mg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ X3+0.215 6×X4 ），该分值越大表示超滤纯化的分离效果
桃叶珊瑚苷 0.036 9 0.035 0 0.071 8 99.52 99.18 0.88 越佳]为指标，以超滤膜截留分子量、料液温度、操作压
0.038 3 0.035 0 0.072 7 98.47 力、操作频率、料液浓度、料液pH为因素，进行单因素实
0.037 0 0.035 0 0.072 0 100.09
0.037 2 0.035 0 0.072 2 99.97 验，结果见图3。
0.038 2 0.035 0 0.072 5 97.88 2.4.1 超滤膜截留分子量的影响 取“2.2.3”项下经澄
0.038 7 0.035 0 0.073 4 99.13 清膜除杂处理后的溶液 1.5 L，固定料液浓度为 25 g/L、
京尼平苷酸 0.034 2 0.030 0 0.064 5 100.95 101.91 1.34
0.033 4 0.030 0 0.063 7 101.04 料液pH为4、料液温度为25 ℃、操作压力为0.5 MPa、操
0.034 9 0.030 0 0.065 4 101.67 作频率为 35 Hz、过膜时间为 30 min，考察不同超滤膜
0.032 3 0.030 0 0.063 4 103.55 截留分子量[10 000（超滤膜为 UF1）、30 000（超滤膜为
0.035 1 0.030 0 0.066 2 103.68
0.034 0 0.030 0 0.064 2 100.56 UF2）、100 000（超滤膜为UF3）]的影响。结果，综合得分
绿原酸 0.004 8 0.005 0 0.009 7 96.28 96.36 1.69 随超滤膜截留分子量的增大而增加，笔者推测这是因为
0.005 6 0.005 0 0.010 4 94.99 超滤膜UF3截留分子量较大，在超滤过程中形成浓度极
0.006 4 0.005 0 0.011 2 95.66
0.004 9 0.005 0 0.009 8 98.23 差化的程度较小，从而对有效成分的透过率影响较小，
[24]
0.006 5 0.005 0 0.011 2 94.60 与范远景等 的研究结果一致。由于超滤膜 UF1、UF2
0.005 1 0.005 0 0.010 0 98.43 综合得分低于 UF3，且实验过程中发现，前两者用于杜
2.3 杜仲翅果皮酶解提取液中固形物去除率和有效成 仲翅果皮酶解提取液的超滤实验后清洗困难、其膜通量
分转移率的测定 恢复率低，说明膜受到的污染程度较严重，因此选择超
2.3.1 固形物去除率 参考文献[20]的方法并调整后进 滤膜UF3进行后续优化。
行测定。精密吸取杜仲翅果皮酶解提取液、超滤透过液 2.4.2 料液温度的影响 取“2.2.3”项下经澄清膜除杂
（取杜仲翅果皮酶解提取液，按“2.2.3”项下方法制备）各 处理后的溶液 1.5 L，固定超滤膜为 UF3、料液浓度为 25
15 mL，置于干燥至恒重的培养皿中，在105 ℃烘箱中烘 g/L、料液 pH 为 4、操作压力为 0.5 MPa、操作频率为 35
干至恒重，分别称定其质量，即得杜仲翅果皮酶解提取 Hz，过膜时间为 30 min，考察不同料液温度（20、25、30、
液的干膏质量和超滤透过液的干膏质量，然后计算杜仲 35、40、45 ℃）的影响。结果，料液温度在25～35 ℃范围
翅果皮酶解提取液中固形物去除率[固形物去除率 内，综合得分逐渐增加，在 35 ℃时达到最大值；继续增
（％）＝（1－超滤透过液干膏质量/杜仲翅果皮酶解提取 加料液温度，综合得分开始减小，推测这可能是因为大
液的干膏质量）×100％]。 分子物质在大于 35 ℃的条件下开始吸附、沉积于膜表
2.3.2 有效成分转移率 参考文献[21－22]的方法进行 面或堵塞膜孔，阻碍有效成分透过膜 [25－27] 。因此，选择
测定。分别精密吸取杜仲翅果皮酶解提取液、超滤透过 料液温度为35 ℃进行后续优化。
·1560 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 13 中国药房 2021年第32卷第13期
