Page 90 - 中国药房2021年11期
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2.11 非小细胞肺癌患者体内安罗替尼血药浓度的检测                          3.3 血浆样品前处理方法的选择
            采用上述盐析辅助液液萃取结合 LC-MS/MS 技术                          关于小分子酪氨酸激酶抑制剂生物样品的前处理
        检测3例非小细胞肺癌患者体内安罗替尼的血药浓度。                            方法，学者大多采用蛋白沉淀、液液萃取等                 [11，14] 。但是血
        其中，女性 2 例、男性 1 例，年龄 56～62 岁。本研究已通                   浆中含有大量的磷脂和蛋白质等杂质，若仅经简单的蛋
        过医院伦理委员会的批准，患者及家属均知情且签署知                            白沉淀处理，残余的磷脂和蛋白会随着进样次数的增加
        情同意书。取患者血浆样品50 μL，平行2份，按“2.2”项                      而对色谱柱造成损伤，从而使检测的灵敏度降低；然而
        下方法处理后，再按“2.3”项下条件进样分析，记录峰面                         以液液萃取作为生物样品前处理方法，存在操作繁琐、
        积。根据当日随行标准曲线计算血浆中安罗替尼的质                             耗时长、人力和试剂消耗量较大等不足，其实际应用较
        量浓度，结果以平均值表示。其中，患者1为接受安罗替                           为受限 。本研究基于医院临床监测样本量大和时效
                                                                  [13]
        尼治疗的第1个疗程，抽血时间为该疗程的第3天；患者                           性要求高等特点，采用盐析辅助液液萃取的方法对血浆
        2和患者3均为接受安罗替尼治疗的第3个疗程，抽血时                           样品进行前处理，该方法步骤和蛋白沉淀一样简单，仅
        间分别为该疗程的第3天和第7天。结果，3例患者血药                           需要在乙腈蛋白沉淀的基础上向血浆样品中加入5 mol/L
        浓度检测结果与文献[4]报道基本一致，详见表4。                            的醋酸铵溶液，无需氮气流吹干，仅通过涡旋离心便可
         表4 3例肿瘤患者体内安罗替尼血药浓度的测定结果                           获得基质成分相对更为单一的样品；同时，由于乙腈与
        Tab 4 Determination results of plasma concentration  血浆分相，既实现了对样品的浓缩，又提高了检测的灵
               of anlotinib in 3 cancer patients            敏度 。此外，本研究前处理过程中单个样品的乙腈使
                                                                [13]
         患者序号           服药前0.5 h，ng/mL      服药后2.5 h，ng/mL  用量仅为100 μL，相较于传统的液液萃取减少了有机溶
         1                  8.74               15.35        剂的使用量，故此法是一种经济、环保的前处理方法。
         2                  33.45              57.25
         3                  49.25              65.60        在盐析助剂的选择上，本研究选择了醋酸铵。相较于氯
        3 讨论                                                化钠等其他无机盐，醋酸铵具有挥发性，对质谱的影响
        3.1  LC-MS/MS 条件的优化                                 更小。同时，笔者在研究过程中发现，当醋酸铵溶液浓
            本研究前期考察了乙腈、甲醇作为有机相以及不同                          度为 5 mol/L、体积为 50 μL 时，乙腈与血浆分层更加明
        浓度甲酸水溶液作为水相对待测成分色谱峰峰形和响                             显，故最终确定了“2.2”项下的血浆样品前处理方法。
        应值的影响。结果，当以乙腈作为有机相时，待测成分                            3.4  方法建立的必要性及结果分析
        的响应值明显高于以甲醇作为有机相时；在水相中加入                                酪氨酸激酶抑制剂口服给药的方式使这类药物的
        甲酸可以提高安罗替尼的响应值，并可以使出峰时间提                            药动学特征较为复杂。个体间药动学及疗效的差异易
        前；且当在水相中加入体积分数为0.2％的甲酸时，待测                          受到药物靶点遗传异质性、肝药酶及转运蛋白编码基因
        成分的色谱峰峰形较好且响应较强。                                    多态性、患者治疗依从性、配伍药物相互作用等因素的
            本课题组选取了两种不同的色谱分析柱，分别是                           影响，已经有多项研究发现酪氨酸激酶抑制剂血药浓度
        Waters X Bridge C18 （100 mm×4.6 mm，3.5 μm）和 Agilent  与疗效或毒性之间存在关联           [15－19] 。
        Zorbax SB AQ（150 mm×4.6 mm，5 μm）。虽然 Agilent             TDM 可通过测定患者血浆中药物的浓度，并将结
        Zorbax SB AQ 也可以获得较好的色谱峰峰形和响应                       果与临床指南或目标水平进行比较，以实现个体化给
                                                                                           [20]
        值，但是所用分析时间较长，因此本研究选择了峰形好                            药，达到药物疗效与毒性之间的平衡 。2017年美国药
        且分析时间更短（共5 min）的Waters X Bridge C18作为分              师协会对大量的临床数据进行总结，汇编了《肿瘤治疗
        析柱。                                                 中激酶抑制剂治疗药物监测实践指南》，推动了酪氨酸
                                                                                     [21]
            此外，本课题组还考察了柱温（25、30、35、40、45 ℃）                 激酶抑制剂TDM的临床实践 。
        对待测成分色谱峰峰形和响应值的影响。结果，当柱温                                安罗替尼上市时间短，临床用药经验不足，尚未有
        为40 ℃时，待测成分的响应值高且峰形好，故最终确定                          研究报道其血药浓度与效应之间的关联。虽然，其现有
        柱温为40 ℃。                                            治疗方案为服药2周、停药1周，抗肿瘤效果好且毒性可
                                                                                          [4]
        3.2 内标物的选择                                          控，但长期安全性及疗效数据有限 。本研究将所建方
            文献中报道的酪氨酸激酶抑制剂的定量检测方法                           法应用于3例服用安罗替尼患者的血药浓度的检测，同
        大多以同位素作为内标，但是同位素价格昂贵且不易获                            时在其治疗过程中均未发现相关不良反应的发生。由
        得 [10－11] 。伏立康唑是在肿瘤患者中较少使用的抗真菌                      于安罗替尼为非小细胞肺癌患者的三线用药方案，临床
        药物，不仅在本研究所建的检测条件下与待测成分有相                            使用时间较短，因此本课题组收集到的临床样本量有
        似的色谱行为，而且也不会与待测成分检测通道产生串                            限，加之抽血时间点不一致，故无法评价药物的效果并
        扰现象，因此本研究选择伏立康唑作为内标。                                明确其有效治疗窗。因此，未来尚需进一步进行试验设


        ·1360 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11                                 中国药房    2021年第32卷第11期
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