Page 87 - 中国药房2021年11期

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish a method for concentration determination of anlotinib in human plasma and apply it in
the clinic. METHODS：The plasma samples were pretreated by salting-out assisted with liquid-liquid extraction with ammonium
acetate as salting out assistant and acetonitrile as solvent. Using voriconazole as internal standard，LC-MS/MS method was adopted.
The separation was performed on Waters X Bridge C18 column with mobile phase consisting of 0.2％ formic acid solution-
acetonitrile（gradient elution）at the flow rate of 1 mL/min. The column temperature was set at 40 ℃，and sample size was 10 μL.
The split ratio was 3 ∶ 7. The electrospray ion source and multiple reaction monitoring mode were used for the analysis. The ion pair
of anlotinib and internal standard under positive ion mode were m/z 408.3→339.3 and m/z 350.2→281.3，respectively. RESULTS：
Anlotinib showed a good linear relationship in the concentration range of 0.2-200 ng/mL （R ＞0.996 7）. The lowest limit of
2
quantitation was 0.2 ng/mL. Intra-day and inter-day RSDs were no more than 12％ （n＝6 or n＝3）. Accuracies were
90.92％ -108.00％ （n＝6 or n＝3）. The average extraction recoveries were 87.51％ -100.00％（RSD＜8％ ，n＝6）. The average
matrix effects were 96.66％-99.93％（RSD＜5％，n＝6）. The plasma concentration of 3 patients with NSCLC treated with anlotinib
was 8.74-65.60 ng/mL. CONCLUSIONS：The method is simple，accurate and specific，and is suitable for the plasma concentration
monitoring of anlotinib in NSCLC patients.
KEYWORDS Anlotinib；LC-MS/MS；Salting-out assisted liquid-liquid extraction；Therapeutic drug monitoring

盐酸安罗替尼是我国自主研发的一种新型口服酪 液液萃取是利用盐析作用将水溶性有机溶剂（如乙腈）
氨酸激酶抑制剂，能够有效抑制血管内皮生长因子受 从血浆或水相中分离出来，可用于提取药物和代谢物，
[13]
体、血小板衍生生长因子受体、纤维母细胞生长因子受 尤其适用于亲水性化合物的分析 。在进行盐析辅助
体、干细胞因子受体（c-Kit）等激酶，具有抗肿瘤血管生 液液萃取时，仅需要向样品中加入高浓度的盐和水溶性
成、抑制肿瘤生长的双重作用 [1－2] 。基于ALTER 0303研 有机试剂，经过涡旋离心后即可取上清液进样分析，与
究（安罗替尼治疗晚期非小细胞肺癌患者的Ⅲ期临床研 传统的液液萃取和固相萃取相比，不仅步骤少、耗时短，
究）的良好结果，国家食品药品监督管理局于 2018 年 5 而且环保、经济；与直接蛋白沉淀相比，可获得基质成分
[13]
月8日正式批准安罗替尼单药用于晚期非小细胞肺癌患 更为单一的提取物 。基于此，本研究首次建立了基于
者的三线及以上治疗。有研究表明，安罗替尼的药动学 盐析辅助液液萃取联合 LC-MS/MS 技术测定肿瘤患者
特征与其他酪氨酸激酶抑制剂类似，即经肝药酶代谢， 血浆中安罗替尼浓度的方法，旨在为该药的 TDM 及临
其血浆蛋白结合率较高、消除半衰期较长，长期连续使 床个体化应用提供技术支持。
用后药物在体内有明显的蓄积，且个体间表现出较大的 1 材料
药动学差异 [3－4] ；此外，该药在我国上市时间短，临床用 1.1 主要仪器
药经验有限，且其对细胞色素 P450 酶（包括 CYP2D1、 本文所用主要仪器包括LC-20A型液相色谱系统及
CYP3A1、CYP3A2）有显著诱导作用，在长期使用过程 配 备 的 LC-20AD 型 二 元 泵 、DGU-20A3 型 脱 气 机 、
[5]
中，可能与食物、配伍药物发生相互作用 。关于安罗替 SIL-20A 型自动进样器、CTO-20AC 型柱温箱（日本 Shi-
尼致不良反应已经有大量文献报道 [6－7] ，但目前尚未有 madzu公司），API 4000型三重四极杆串联质谱仪及配备
研究探索安罗替尼血浆浓度与疗效之间的相关性，且缺 的电喷雾电离源（ESI）和Analyst Software 1.6工作站（美
乏稳定、可靠的血药浓度定量检测方法。因此，为对肿 国AB Sciex公司），SCILOGEX MX-S型涡旋混合器（美
瘤患者进行安罗替尼治疗药物监测（TDM）、为浓度-效 国Scilogex公司），Sorvall Legend Micro 21R型冷冻离心
应等相关性研究提供检测技术支持、保证药物使用的安 机（美国 Thermo Fisher Scientific 公司），SK5200H 型超
全性和有效性，有必要建立相关的定量分析方法。 声仪（上海科导超声仪器有限公司），TD4型低速台式离
目前，关于安罗替尼的分析检测方法，国内外文献 心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司），XS205 Dual
报道有限，且在现有的大多数安罗替尼疗效及安全性评 Range 型 电 子 分 析 天 平（瑞 士 Mettler Toledo 公 司），
价研究中均未进行相关定量分析 [3，8－10] ，仅有少数国内学 Hi-Tech型水纯化系统（上海和泰仪器有限公司）等。
者建立了测定人血浆中安罗替尼浓度的液相色谱-串联 1.2 主要药品与试剂
质谱法（LC-MS/MS），并将其用于研究安罗替尼胶囊在 本文所用主要药品和试剂包括安罗替尼对照品（加
我国成年肿瘤患者体内的药动学特征 。该法虽然操 拿大 TRC公司，批号 6-RTU-81-1，纯度 95％）、伏立康唑
[11]
作简单，但由于血浆内源性物质较复杂，随着进样次数 对照品（大连美仑生物技术有限公司，批号 J1211AS，纯
的增多会造成检测系统压力过高、分析重现性差、色谱 度＞99％）等；乙腈为色谱纯，醋酸、甲酸等为分析纯，水
柱损坏、灵敏度降低等现象，故应用受限 。Zhong 等 [3] 为自制的去离子超纯水（18.2 MΩ）。
[12]
在测定安罗替尼含量时，使用乙酸乙酯进行液液萃取， 1.3 血浆样品来源
需要用氮气流吹干并复溶，步骤繁琐且耗时。盐析辅助 1.3.1 空白血浆 选择上海市第一人民医院作体检的

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