Page 88 - 中国药房2021年11期
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健康体检者，在其开展血常规等检查时征得其知情同意                           （安罗替尼，去簇电压90 V，入口电压10 V，碰撞电压33
        后采集静脉血。上述血样经处理后作为空白血浆，用于                            V，出口电压 15 V）、m/z 350.2→281.3（内标，去簇电压
        定量分析的方法学考察。                                         90 V，入口电压10 V，碰撞电压27 V，出口电压15 V），驻
        1.3.2  患者血浆      患者血浆样本由上海市第一人民医                    留时间均为200 ms。
        院呼吸科提供，分别为3例使用安罗替尼的患者服药前                            2.4 专属性考察
        后的血浆样品。患者的安罗替尼用药剂量为 12 mg/d，                            取空白血浆、空白血浆+安罗替尼（0.2 ng/mL）、患者
        连续服用 2 周，停药 1 周，即 3 周（21 天）为 1 个疗程。本                3服药前0.5 h的血浆样品各适量，按“2.2”项下方法处理
        研究已经通过了医院医学伦理委员会的批准（编号为                             后，再按“2.3”项下条件进样分析；同时，设置不加内标且
        2019-N-021），患者均已知情同意。                               同法处理的空白血浆为参照，考察方法的专属性。结
        2 方法与结果                                             果，血浆样品中安罗替尼和内标的保留时间分别约为
        2.1 溶液的配制                                           2.4、2.8 min；色谱峰峰形良好，血浆样品中的内源性物质
        2.1.1  贮备液     精密称取安罗替尼对照品 10.0 mg、伏                和其他物质均不干扰安罗替尼和内标的测定，表明该方
        立康唑（内标）对照品10.0 mg，分别置于10 mL量瓶中，                     法专属性较好。安罗替尼的典型MRM图见图1。
        用甲醇溶解并稀释成质量浓度均为1.0 mg/mL的安罗替                        2.5 残留评估
        尼贮备液和内标贮备液，于－40 ℃冰箱保存，备用。                               取“2.1.3”项下质量浓度为200 ng/mL的安罗替尼标
        2.1.2  工作液     将“2.1.1”项下安罗替尼贮备液用 80％               准曲线溶液，按“2.2”项下方法处理后，再按“2.3”项下条
        甲醇逐级稀释，配制成安罗替尼质量浓度分别为4 000、                         件进样分析；随后，取空白血浆适量，按“2.2”项下方法处
        2 000、400、80、40、8、4 ng/mL的系列工作溶液；同法配制               理后，再按“2.3”项下条件进样分析以评估残留。结果，
        安罗替尼质量浓度分别为3 200、160、8、4 ng/mL的系列                   在该分析条件下，血浆样品中安罗替尼及内标伏立康唑
        质控工作液。将“2.1.1”项下伏立康唑贮备液用乙腈稀                         均无残留。
        释，配制成质量浓度为 200 ng/mL 的内标溶液。上述溶                      2.6  线性关系和定量下限考察
        液均置于4 ℃冰箱中保存，备用。                                        取“2.1.3”项下质量浓度分别为 200、100、20、4、2、
        2.1.3  标 准 曲 线 溶 液 和 质 控 样 品 溶 液       精 密 量 取      0.4、0.2 ng/mL的安罗替尼标准曲线溶液，按“2.2”项下方
       “2.1.2”项下各系列工作液和质控工作液适量，用空白血                         法处理后，再按“2.3”项下条件进样分析，记录峰面积。
        浆稀释 20 倍，制成安罗替尼质量浓度分别为 200、100、                     以安罗替尼的质量浓度（x）为横坐标、安罗替尼与内标
        20、4、2、0.4、0.2 ng/mL的标准曲线溶液和质量浓度分别                  伏立康唑的峰面积比值（y）为纵坐标，采用最小加权二
                                                                     2
        为 160、8、0.4、0.2 ng/mL 的高、中、低质量浓度质控样品                乘法以 1/x 为权重因子进行标准曲线拟合，得安罗替尼
                                                                                          2
        溶液和定量下限（LLOQ）质量浓度血浆样品溶液。                            回归方程为 y＝0.081 8x+0.014 2（R ＝0.996 7），其检测
        2.2  待测血浆样品前处理                                      质量浓度的线性范围为 0.2～200 ng/mL，定量下限为
            精密吸取待测血浆样品 50 μL，置于 1.5 mL 离心管                  0.2 ng/mL。
        中，加入内标溶液（200 ng/mL）5 μL，涡旋混匀；加入醋                    2.7  精密度和准确度试验
        酸铵溶液（5 mol/L）50 μL，涡旋混匀 1 min；加入乙腈                      取“2.1.3”项下低、中、高质量浓度质控样品溶液和
        100 μL，再涡旋混匀3 min，于4 ℃下以12 000 r/min离心              定量下限质量浓度血浆样品溶液适量，按“2.2”项下方法
        10 min，取上层清液进样分析。                                   处理后，再按“2.3”项下条件连续进样测定 6 次，考察日
        2.3 色谱条件与质谱条件                                       内精密度；连续测定3天，考察日间精密度。以实测质量
        2.3.1  色谱条件       色谱柱为 Waters X Bridge C18 （4.6     浓度与理论质量浓度的比值来表示准确度。结果，安罗
        mm×100 mm，3.5 μm）；以0.2％甲酸水溶液（A）-乙腈（B）               替尼各质量浓度样品的日内 RSD 为 0.81％～10.27％
        为流动相进行梯度洗脱（0～0.5 min，20％B→80％B；                    （n＝6），日间 RSD 为 3.91％～8.64％（n＝3），准确度为
        0.5～3 min，80％ B；3～3.1 min，80％ B→20％ B；3.1～          90.92％～108.00％（n＝6或n＝3），表明该方法的精密度
        5.0 min，20％B）；流速为1 mL/min；柱温为40 ℃；进样量               和准确度均良好，详见表1。
        为10 μL；柱后用三通3∶7分流，3/10进入质谱检测。                       2.8 提取回收率试验
        2.3.2  质谱条件      离子源为 ESI，检测模式为正离子模                     取“2.1.3”项下低、中、高质量浓度质控样品溶液，各
        式，选择多反应监测方式（MRM）进行一/二级质谱检                           平行 6 份，按“2.2”项下方法处理后，再按“2.3”项下条件
        测。气帘气为 25 psi，碰撞气为 10 psi，雾化气为 50 psi，              进样分析，记录待测成分峰面积（A1 ）；另取空白血浆，按
        辅助气为 45 psi，喷雾电压为 5 500 V，离子源温度为                   “2.2”项下方法处理后，加入“2.1.2”项下低、中、高质量浓
        500 ℃；用于定量分析的离子对分别为m/z 408.3→339.3                  度质控工作液适量（使最终质量浓度与质控样品溶液对


        ·1358 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 11                                 中国药房    2021年第32卷第11期
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