Page 66 - 《中国药房》2021年07期

后，以磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤 3 次；以 5％ BSA 封闭 3.2 大黄-丹参药对对 CRF 模型大鼠肠源性尿毒素含
40 min，向切片表面均匀滴加Occludin、ZO-1一抗（稀释 量的影响
度分别为 1 ∶ 100、1 ∶ 50），于 4 ℃冰箱孵育过夜；以 PBS 与假手术组比较，模型组大鼠血清中 TMAO、PCS、
洗涤 3 次后，向切片表面均匀滴加荧光二抗（稀释度为 IS含量均显著升高（P＜0.01）；与模型组比较，尿毒清颗
1 ∶ 500），室温避光孵育 2 h；以 PBS 洗涤 3 次，滴加 DAPI 粒组和大黄-丹参药对高、低剂量组大鼠血清中TMAO、
染色液复染细胞核，于室温避光孵育 10 min；以 PBS 洗 PCS、IS 含量均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01），详见
涤3次，向切片滴加防荧光淬灭封片液封片，然后置于荧 表4。
光显微镜下观察并拍照。采用 Imaging 5.10.00 软件分
表 4 各组大鼠血清中肠源性尿毒素含量的测定结果
析红色和绿色区域的荧光强度（红色荧光表示 Occludin
（x±±s，n＝10）
蛋白的阳性染色，绿色荧光表示 ZO-1 蛋白的阳性染
Tab 4 Serum contents of enterogenous urotoxin in
色），用荧光强度来表示目标蛋白的表达水平。实验重
rats of each group（x±±s，n＝10）
复4次。
组别 TMAO，μg/mL PCS，μg/mL IS，μg/mL
2.7 大鼠肾组织的病理学形态观察和结肠组织的超微
假手术组 0.29±0.08 0.31±0.44 1.97±0.80
结构观察 模型组 0.77±0.15 ＊＊ 2.29±0.56 ＊＊ 6.20±0.85 ＊＊
将“2.2”项下4％多聚甲醛固定好的肾组织脱水，石 尿毒清颗粒组 0.45±0.18 ## 0.39±0.42 ## 1.68±0.71 ##
大黄-丹参药对高剂量组 0.45±0.07 ## 0.19±0.17 ## 3.09±0.78 ##
蜡包埋后切片（4 μm），进行 HE 和 Masson 染色，然后于 大黄-丹参药对低剂量组 0.52±0.06 # 0.30±0.26 ## 3.09±1.33 ##
显微镜下观察肾组织病理学形态变化并拍照。将“2.2”
##
注：与假手术组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
#
＊＊
项下 2.5％戊二醛固定好的结肠组织取出，于 PBS 中浸 Note：vs. sham operation group， P＜0.01；vs. model group，P＜
#
＊＊
洗3次，以1％锇酸室温固定2 h，再以50％～100％的乙 0.05，P＜0.01
##
醇溶液和丙酮逐级脱水，然后浸透、包埋后，切片（60～ 3.3 大黄-丹参药对对 CRF 模型大鼠回肠组织中 Oc-
80 nm），行乙酸双氧铀和酸铅双重染色，于透射电镜下 cludin、ZO-1 mRNA表达的影响
观察并拍照。 与假手术组比较，模型组大鼠回肠组织中Occludin、
2.8 统计学分析 ZO-1 mRNA 表达水平均显著降低（P＜0.01）；与模型组
采用 SPSS 19.0 软件进行数据统计分析，计量资料
比较，尿毒清颗粒组和大黄-丹参药对高剂量组大鼠回
以 x±s 表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05 肠组织中 Occludin、ZO-1 mRNA 以及大黄-丹参药对低
表示差异有统计学意义。
剂量组的 Occludin mRNA 表达水平均显著升高（P＜
3 结果
0.05或P＜0.01），详见表5。
3.1 大黄-丹参药对对 CRF 模型大鼠血清和尿液中肾
表5 各组大鼠回肠组织中Occludin、ZO-1 mRNA表达
功能指标的影响
水平的测定结果（x±±s，n＝4）
与假手术组比较，模型组大鼠血清中Scr、BUN含量
Tab 5 mRNA expression of Occludin and ZO-1 in
均显著升高，尿液中 Ucr 含量和 Ccr 均显著降低（P＜
ileum tissue of rats in each group（x±±s，n＝4）
0.01）；与模型组比较，尿毒清颗粒组和大黄-丹参药对
组别 Occludin ZO-1
高、低剂量组大鼠血清中 Scr、BUN 含量均显著降低，尿
假手术组 1.00±0.00 1.00±0.00
液中Ucr含量显著升高（P＜0.05或P＜0.01），详见表3。 模型组 0.34±0.47 ＊＊ 0.40±0.09 ＊＊
表 3 各组大鼠血清和尿液中肾功能指标的测定结果 尿毒清颗粒组 0.70±0.07 ## 0.77±0.11 ##
大黄-丹参药对高剂量组 0.69±0.73 ## 0.74±0.17 ##
（x±±s，n＝10）
大黄-丹参药对低剂量组 0.54±0.13 # 0.55±0.15
Tab 3 Determination result of renal function indexes
#
##
＊＊
注：与假手术组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
in serum and urine of rats in each group（x±±s，
＊＊
#
Note：vs. sham operation group， P＜0.01；vs. model group，P＜
n＝10） 0.05，P＜0.01
##
组别 Scr，μmol/L BUN，mmol/L Ucr，μmol/L Ccr，mL/min 3.4 大黄-丹参药对对 CRF 模型大鼠回肠组织中 Oc-
假手术组 59.33±3.79 7.28±0.98 207.00±31.75 0.111±0.058 cludin和ZO-1蛋白表达的影响
模型组 197.33±4.93 ＊＊ 22.58±1.61 ＊＊ 83.33±9.71 ＊＊ 0.010±0.002 ＊＊
尿毒清颗粒组 93.25±4.92 ## 16.57±2.91 # 143.00±34.10 ## 0.022±0.008 与假手术组比较，模型组大鼠回肠组织中Occludin、
大黄-丹参药对高剂量组 91.50±9.47 ## 16.15±3.18 # 135.00±10.30 ## 0.030±0.006 ZO-1 蛋白表达水平均显著降低（P＜0.01）；与模型组比
大黄-丹参药对低剂量组 93.75±6.65 ## 15.82±5.31 # 132.50±8.81 ## 0.025±0.013
较，尿毒清颗粒组和大黄-丹参药对高、低剂量组大鼠回
##
#
注：与假手术组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05，P＜0.01
＊＊
肠组织中Occludin、ZO-1蛋白表达水平均显著升高（P＜
Note：vs. sham operation group， P＜0.01；vs. model group，P＜
#
＊＊
0.05，P＜0.01 0.01），详见图1、表6。
##
·828 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7 中国药房 2021年第32卷第7期