Page 64 - 《中国药房》2021年07期

tissue. HE staining and Masson staining were used to observe the pathological changes of renal tissue. The ultrastructural changes of
rat colon were observed by transmission electron microscope. RESULTS：Compared with sham operation group，serum contents of
Scr，BUN，TMAO，PCS and IS were increased significantly in model group（P＜0.01），while urine content of Ucr，Ccr，mRNA
and protein expression of Occludin and ZO-1 in ileum tissue were decreased significantly（P＜0.01）；renal glomerulosclerosis，
renal tubules dilation and inflammatory invasion and fibrosisin the interstitium were all found；the intestinal epithelial barrier
structure of colon tissue was severely damaged. Compared with model group，serum contents of Scr，BUN，TMAO，PCS and IS
were decreased significantly in administration groups（P＜0.05 or P＜0.01）；the mRNA and protein expression of Occludin and
ZO-1 in the ileum tissue were increased significantly （except for mRNA expression of ZO-1 in R. palmatum-S. miltiorrhiza
low-dose group（P＜0.05 or P＜0.01）；the infiltration of inflammatory cells in renal interstitium，the degree of fibrosis and the
damage of intestinal epithelial barrier structure in colon tissue were reduced. CONCLUSIONS：Couplet medicine of R. palmatum-S.
miltiorrhiza can effectively protect the residual renal function of CRF model rats，the mechanism of which may be associated with
reducing the serum contents of enterogenous urotoxin，up-regulating mRNA and protein expresssion of Occludin and ZO-1 in the
ileum tissue so as to improve intestinal barrier function.
KEYWORDS Rheum palmatum；Salvia miltiorrhiza；Chronic renal failure；Enterogenous urotoxins；Intestinal barrier；Rats

慢性肾衰竭（Chronic renal failure，CRF）多发生于各 （RT-PCR）仪（美国 ABI 公司），HT7700 型透射电子显微
种慢性肾病后期，表现为不可逆的进行性肾功能损 镜（日本HITACHI公司）。
[1]
害 。其发病率高、预后差、并发症复杂，已成为全球重 1.2 主要药品与试剂
[2]
大公共卫生问题 。因此，如何采取有效措施延缓 CRF 本研究所用主要药品与试剂有：大黄、丹参饮片[天
的进展并防止并发症的出现，是临床亟需解决的难题。 津市中药饮片厂有限公司，批号分别为 G1707045-01、
[3]
“肠-肾轴”理论 阐述了 CRF 中肾与肠道在病理上的密 G1706160-01；将两种饮片按 1 ∶ 1 质量比配伍，水煎煮 2
切关系，指出肠道菌群紊乱导致的肠源性尿毒素蓄积及 次后浓缩制成每毫升约含 1.1 g（生药）的浓缩液]，尿毒
肠道屏障损坏是促进 CRF 进展及其并发症发生的重要 清颗粒（康臣药业有限责任公司，批号 20181168，规格 5
因素 。因此，“从肠治肾”有望成为CRF治疗的新途径。 g/袋），注 射 用 青 霉 素 钠 [ 哈 药 集 团 制 药 总 厂 ，批 号
[4]
[5]
中药治疗CRF疗效明确 ，其中大黄-丹参药对为临 18020402-2，规格0.48 g（按C16H17N2NaO4S计）；使用时每
床治疗 CRF 的高频药对 ；且相关研究发现，大黄、丹参 瓶用5 mL生理盐水溶解]，戊巴比妥钠（北京化学试剂公
[6]
及其有效成分对肠道屏障功能均具有保护作用 [7－9] 。基 司，批号020919），明胶海绵（江西众强实业有限公司，批
于“复方-药对-有效成分”的研究思路，本课题组初步证 号20190328），苏木素染色液、伊红染色液、Masson 染色
实了大黄-丹参药对具有保护 CRF 大鼠肾功能的作用， 液（北京索莱宝科技有限公司，批号分别为 G1140、
但具体机制不明。基于此，本研究采用 5/6 肾切除法复 G1100、G1343），氧化三甲胺（TMAO）、对甲基苯基硫
制 CRF 模型大鼠，从肠源性尿毒素、肠道屏障角度探讨 酸钾、吲哚酚硫酸酯钾盐（上海甄准生物科技有限公
大黄-丹参药对延缓 CRF 进展的相关作用机制，以期为 司，批号 1184-78-7、91978-69-7、2642-37-7，纯度均大于
中药基于肠道系统治疗CRF提供实验依据。 98.0％），小鼠抗大鼠闭合蛋白（Occludin）单克隆抗体
1 材料 （美国Invitrogen公司，批号33-1500），兔抗大鼠紧密连接
1.1 主要仪器 蛋白 1（ZO-1）多克隆抗体（美国 Thermo Fisher Scientific
本研究所用主要仪器有：单级微手术电凝器（武汉 公司，批号 61-7300），Alexa Fluor 555 标记的羊抗小鼠
®
春光医疗美容仪器有限公司），7080型全自动生化仪（日 免疫球蛋白 G（IgG）二抗、Alexa Fluor 488 标记的羊抗
®
本积水医疗科技有限公司），LC-30A型超高效液相色谱 兔IgG二抗（美国CST公司，批号分别为4409、4412），二
仪、LCMS-8040 型三重四极杆质谱仪联用系统（日本岛 脒基苯基吲哚（DAPI）、防荧光淬灭封片液[爱必信（上
津公司），EG1150H型自动生物组织包埋机、UC7型超薄 海）生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 abs47047616、
切片机、RM2255 型切片机（德国 Leica 仪器有限公司）， abs9234]，Trizol 试剂、RNA 逆转录试剂盒、RT-PCR 试剂
Ci-L 型显微镜、Ni-U 型荧光显微镜（日本 Nikon 公司）， 盒（北京康为世纪生物科技有限公司，批号分别为
ME203E型电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限 CW0508S、CW2569M、CW2601M），乙腈、甲酸（色谱
公司），ST16R 型高速冷冻离心机（美国 Thermo Fisher 纯），去离子水，PCR 引物（由生工生物工程股份有限公
Scientific 公司），GET96-PLUS 型基因扩增仪（杭州柏恒 司合成，引物序列及产物长度信息见表 1）；其余试剂为
科技有限公司），ABI7500 型实时荧光聚合酶链式反应 实验室常用规格。

·826 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7 中国药房 2021年第32卷第7期