Page 41 - 《中国药房》2021年07期
P. 41

（批号均为 20181126）；凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间                    前血小板数；随后，将血样放入装有10个玻璃珠的小锥
       （TT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）                    形玻璃瓶里，于室温下以 3 000 r/min 离心 15 min，取上
        检测试剂盒（批号分别为 1807006、1812063、1812009、               清液，同法检测大鼠后血小板数；计算血小板黏附率[血
        1812077）均购自上海长岛生物技术有限公司；生理盐水                       小板黏附率＝（前血小板数－后血小板数）/前血小板
       （批号20180815）购自广东圣戈生物科技有限公司；其余                       数×100％]。取枸橼酸钠抗凝血 2 mL，采用酶联免疫吸
        试剂均为分析纯，水为蒸馏水。                                     附测定法（ELISA）以酶标仪检测大鼠血小板黏附作用
        1.3 动物与饲料                                          相关指标（vWF、FN）、血小板释放作用相关指标（β-TG、
            清洁级健康 Wistar 大鼠，雄性，体质量 220～240 g，              PF4）和纤溶系统相关指标（t-PA、PAI-1）含量，严格按照
        由哈尔滨医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证                           相应试剂盒说明书操作。
        号为 SCXK（黑）2016-001。所有动物均饲养于 20～                    2.2.3  血小板参数       取乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2 ）
        22 ℃的动物房内，自由摄食、饮水。                                 抗凝血 2 mL，使用血细胞仪检测血小板计数（PLT）、血
            高脂饲料（基础饲料 63.6％、蔗糖 20％、猪油 15％、
                                                           小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）、血小板
        胆固醇1.2％、胆酸钠0.2％）和基础饲料分别由北京科奥
                                                           压积（PCT）、大型血小板比率（PLCR）等血小板参数。
        协力饲料有限公司、辽宁长生生物技术有限公司提供。
                                                           2.2.4  凝血指标       取枸橼酸钠抗凝血 2 mL，以 3 000
        2 方法
                                                           r/min 离心 10 min，采用全自动血凝仪检测大鼠 APTT、
        2.1 分组、造模与给药
                                                           PT、TT、FIB等凝血4项指标水平，严格按照相应试剂盒
            大鼠适应性喂养 7 天后，随机分为空白对照组（10
                                                           说明书操作。
        只）和造模组（40 只）。其中，空白对照组大鼠喂食基础
                                                           2.3  统计学方法
        饲料，造模组大鼠喂食高脂饲料以复制高脂血症模型；
                                                               采用SPSS 22.0软件对数据进行统计分析。实验数
        所有大鼠均自由摄食饮水。于分组喂养第6周开始检测
                                                           据均以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，组
        大鼠血脂水平，以血脂水平显著变化作为模型复制成功
                                                           间两两比较采用 LSD-t 检验。P＜0.05 表示差异有统计
        的判定标准 。将造模成功的大鼠随机分为模型对照
                  [8]
                                                           学意义。
        组、阳性对照组（辛伐他汀 0.004 g/kg，按照人临床常用
                                                           3 结果
        剂量换算为大鼠给药剂量；以水配制相应药液）和补阳
                                                           3.1  补阳还五汤对高脂血症模型大鼠全血黏度和血浆
        还五汤高、低剂量组（14.0、3.5 g/kg，以生药总量计；按照
                                                           黏度的影响
        人临床常用剂量换算并以“1.2”项下药液作为大鼠给药
                                                               与空白对照组比较，模型对照组大鼠全血黏度（低、
        高剂量，以水稀释 4 倍作为低剂量），每组 10 只。从第 6
                                                           中、高切变率黏度）和血浆黏度均显著升高（P＜0.05 或
        周模型复制成功后即日起开始给药，空白对照组和模型
                                                           P＜0.01）；与模型对照组比较，各药物组大鼠上述指标
        对照组大鼠灌胃生理盐水（0.01 mL/g），各药物组灌胃相
        应药液（0.01 mL/g），每日 1 次，连续给药 4 周。给药期                 （除补阳还五汤高剂量组高切变率全血黏度外）均显著
        间，各组大鼠饮食与造模时相同。在实验过程中，空白                           降低（P＜0.05或P＜0.01），详见表1。
        对照组、模型对照组、阳性对照组和补阳还五汤高、低剂                          表1    补阳还五汤对高脂血症模型大鼠全血黏度和血浆
        量组分别有1、2、3、2、3只大鼠死亡。                                     黏度的影响（x±±s）
        2.2 指标检测                                           Tab 1 Effects of Buyang huanwu decoction on whole
            所有大鼠禁食不禁水 12 h，并于末次给药 30 min                          blood and plasma viscosity in hyperlipidemia
        后，腹腔注射 5％水合氯醛溶液（6 mL/kg）进行麻醉，以                            model rats（x±±s）
        仰卧位固定，使用抗凝管于其腹主动脉采血，检测如下                                                     全血黏度，mPa·s      血浆黏度，
                                                           组别        n 剂量，g/kg     －1      －1      －1
        指标：                                                                 低切变率（10 s ）中切变率（60 s ）高切变率（200 s ） mPa·s
                                                           空白对照组     9       7.20±1.13  4.58±0.47  3.84±0.33  1.20±0.04
        2.2.1  血液流变学指标        取肝素钠抗凝血2 mL，使用全              模型对照组     8       9.79±2.21 ＊＊  5.55±0.97 ＊＊  4.15±0.41 ＊  1.34±0.07 ＊＊
        自动血液流变仪检测大鼠全血黏度（包括低、中、高切变                          阳性对照组     7   0.004  6.72±0.76 ##  4.49±0.43 ##  3.73±0.21 #  1.26±0.07 #
                                                           补阳还五汤高剂量组 8  14.0  6.48±0.57 ##  4.70±0.64 #  3.87±0.37  1.23±0.06 #
        率黏度）；取枸橼酸钠抗凝血 2 mL，以 3 000 r/min 离心
                                                           补阳还五汤低剂量组 7   3.5  6.68±1.00 ##  4.39±0.38 ##  3.71±0.19 ##  1.23±0.09 #
        10 min，分离血浆，使用全自动血液流变仪检测大鼠血浆
                                                               注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01；与模型对照组比较，
                                                                                      ＊＊
                                                                               ＊
        黏度。                                                # P＜0.05，P＜0.01
                                                                  ##
        2.2.2  血小板黏附、释放及纤溶系统相关指标                 取枸橼           Note：vs. blank control group，P＜0.05， P＜0.01；vs. model con-
                                                                                  ＊
                                                                                         ＊＊
        酸钠抗凝血2 mL，使用全自动血液细胞分析仪检测大鼠                         trol group，P＜0.05，P＜0.01
                                                                   #
                                                                         ##
        中国药房    2021年第32卷第7期                                               China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 7  ·803 ·
   36   37   38   39   40   41   42   43   44   45   46