Page 41 - 《中国药房》2021年第4期

16.2 and SOD-3 of SKN-1 in N2 nematode. RESULTS：Compared with blank control group，average survival time of N2
nematode under normal and oxidant stress condition was significantly prolonged in positive control group and AM groups；the
number of filial generation on the first day（except for AM high-dose group），the number of filial generation on the second day
（except for AM low-dose group） and the total number of filial generation （except for AM low-dose group） were increased
significantly （P＜0.05 or P＜0.01）. The survival rate of N2a cells in positive control group，AM medium-dose and high-dose
groups were significantly higher than that of model group（P＜0.05 or P＜0.01）. Compared with blank control group，Nrf2-ARE
luciferase relative activity of 293T cells in positive control group and AM groups as well as Nrf2-ARE luciferase relative activity of
293T cells in AM medium-dose group after different time of treatment were increased significantly（P＜0.01），in dose-dependent
and time-dependent trend. Compared with blank control group，mRNA relative expression of HO-1 and NQO-1（except for positive
control group），GCS-1（except for AM low-dose group），GST-7（except for positive control group and AM low-dose group），
GST-10 and HSP-60（except for AM low-dose group），HSP-16.2（except for positive control group and AM low-dose group）and
SOD-3 （except for positive control group and AM low-dose group） were increased significantly （P＜0.05 or P＜0.01）.
CONCLUSIONS：AM can prolong the life span of N2 nematode under normal and oxidant stress condition and improve the its
reproductive capacity，the mechanism of which may be associated with the activation of SKN-1/Nrf2 signaling pathway.
KEYWORDS Atractylodes macrocephala；Ethanol extract；Caenorhabditis elegans；Life span；Oxidant stress；Nrf2；SKN-1

中药白术为菊科植物白术Atractylodes macrocepha- 型倒置显微镜（日本 Nikon 公司）、SMZ-168 型体式显微
la Koidz.的干燥根茎，始载于《神农本草经》。该药味苦、 镜（中国麦克奥迪实业集团有限公司）、Microfuge 20R型
甘，性温，归脾、胃经，具有补气健脾、利水燥湿、安胎的 冷冻离心机（美国 Beckman Coulter 公司）、7500 Fast 型
功效，被誉为“脾脏补气健脾第一要药” 。唐《新修本 实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）仪（美国ABI公司）。
[1－2]
草》载“白术作煎饵，久服轻身延年，不饥”，可见自古以 1.2 主要药品与试剂
[3]
来就有关于白术延长寿命的记载 ，但其作用机制尚不 白术饮片购自河南省焦作市，经河南中医药大学付
明确。 钰副教授鉴定为菊科植物白术 A. macrocephala Koidz.
常用的模型动物如小鼠、大鼠等因寿命长、研究成 的干燥根茎，凭证样本（编号 BZ1810）已保存于河南中
本高、个体差异大等因素的限制，不适用于中药延寿作 医药大学中医科学院。
用的研究。秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans具有寿 姜黄素对照品（批号 C10372682，纯度≥99.7％）和
命短、繁殖周期快、子代数目多、饮食单一可控、基因组 MgSO4 （批号C10238019）均购自上海麦克林生化科技有
序列完整且与哺乳动物同源基因多的特点，是研究衰老 限公司，琼脂粉、酵母粉、胆固醇、胰蛋白胨、青-链霉素
和寿命的良好模型，可用于延寿药物的高通量筛选 [4－7] 。 混合液、MTT 试剂、胰酶、NaCl（批号分别为 310C023、
H2O2是常见的氧化剂，常用来诱导氧化自由基的产生， 106L054、LK40Q28、325D051、20191126、725C056、
其作用于小鼠神经瘤母细胞 N2a 造成的氧化损伤是一 20191128、726F0315）均购自北京索莱宝科技有限公司，
种常用的体外氧化应激模型 。人胚肾细胞 293T 是一 CaCl2 （批号 SLBK1794V）购自美国 Sigma-Aldrich 公司，
[8]
种工具细胞，常用于检测外源基因的表达水平。SKN-1 Na2HPO4·12H2O、KH2PO4（ 批 号 分 别 为 20160219、
是一种非常重要的转录因子，既影响氧压力抗性又调控 20160226）均购自国药集团化学试剂有限公司，DMEM
衰老 ；核因子 E2 相关因子 2（Nrf2）-抗氧化反应元件 高糖培养基（批号 10013031）购自美国 Corning 公司，胎
[9]
（ARE）通路是机体抵御氧化应激的内在机制 。基于此， 牛血清（批号 42Q0682K）购自美国 Gibco 公司，H2O2 （批
[10]
本文参考文献[11]方法用95％乙醇对白术进行提取，研究 号 I1422134）购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，
了白术乙醇提取物（AM）在正常和氧化应激条件下对秀 PolyJet体外转染试剂（批号61758）购自深圳恩科生物科
丽隐杆线虫寿命的影响，并选用N2a细胞和293T细胞在 技 有 限 公 司 ，荧 光 素 酶 报 告 基 因 试 剂 盒（批 号
分子水平上基于SKN-1/Nrf2通路探讨AM延长寿命的作 0000312919）购自美国 Promega 公司，BeyoRT TM Ⅲ First
用机制，旨在为深入研究白术提供实验依据。 Strand cDNA Synthesis Kit 逆 转 录 试 剂 盒（ 批 号
1 材料 103118190503）购自上海碧云天生物技术有限公司，
1.1 主要仪器 Power Up TM SYBR TM Green Master Mix 试 剂 盒（批 号
本研究所用主要仪器有：Series Ⅱ Water Jackxet 型 00837276）和 Trizol Reagent（批号 229009）均购自美国
CO2细胞培养箱和 Multiskan GO 型全波长酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公司；二甲基亚砜（DMSO）、氯
Thermo Fisher Scientific公司）、FLUO star OPTIMA型多 仿、异丙醇、乙醇等其余试剂均为分析纯，水为超纯水。
功能酶标仪（德国 BMG Labtech 公司）、SW-CJ-ZF 型超 1.3 线虫与菌株
净工作台（苏州苏洁净化设备有限公司）、Eclipset S100 普通野生型秀丽隐杆线虫（株系 N2，以下简称“N2

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