Page 36 - 《中国药房》2021年第4期
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型超声仪购自上海科导超声仪器有限公司，Research 正对照品系列溶液各 500 μL，混合，制成吡嗪酰胺质量
UV 型超纯水机购自上海和泰仪器有限公司，Sorvall 浓度分别为50、40、20、10、5、2、1、0.5、0.25 μg/mL和吡嗪
Legend Micro21R 型离心机购自美国 Thermo Fisher Sci- 酸质量浓度分别为125、100、80、50、20、10、5、2、1 μg/mL
entific公司。 的校正混合对照品系列溶液。同法制备吡嗪酰胺质量
1.2 主要药品与试剂 浓度分别为40、20、0.5、0.25 μg/mL和吡嗪酸质量浓度分
吡嗪酰胺对照品（批号 100178-201104，纯度 99％） 别为 100、80、2、1 μg/mL 的高、中、低质量浓度和定量下
购自中国食品药品检定研究院，吡嗪酸对照品（批号ST- 限混合对照品溶液。
BG6304，纯度 98％）购自美国 Sigma-Aldrich 公司，非那 2.3 内标溶液的制备
西丁对照品（内标，批号N1216AS，纯度98％）、吡嗪酰胺 精密称取非那西丁对照品适量，用80％甲醇溶解并
原料药（批号MB2017，纯度＞99％）、硫酸链霉素原料药 稀释，制成质量浓度为 1 mg/mL 的内标储备液，于 4 ℃
（批号 MB1275，规格＞720 U/mg）、硫酸新霉素原料药 下保存，备用。临用时，精密量取上述内标储备液适量，
（批号 MB1716，规格＞600 U/mg）均购自大连美仑生物 用80％甲醇稀释，制成1 μg/mL的内标溶液。
技术有限公司，羧甲基纤维素钠（CMC-Na，食品级）购自 2.4 灌胃混悬液的制备
河南万邦实业有限公司，甲醇（色谱纯）购自美国 Tedia 2.4.1 混合抗生素混悬液 精密称取硫酸链霉素、硫酸
试剂公司，甲酸和乙酸铵（色谱纯）购自美国 ACS 公司； 新霉素原料药各适量，用 0.5％CMC-Na 溶液溶解并稀
其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为超纯水。 释，制成质量浓度均为20 mg/mL的混合抗生素混悬液。
1.3 动物 2.4.2 吡嗪酰胺混悬液 精密称取吡嗪酰胺原料药适
清洁级健康 SD 大鼠，雌雄各半，体质量均为 200～ 量，用 0.5％CMC-Na 溶液溶解并稀释，制成质量浓度为
220 g，购自上海市计划生育科学研究所实验动物经营 30 mg/mL的吡嗪酰胺混悬液。
部，动物生产许可证号为SCXK（沪）2018-0006。 2.5 分组、造模与给药
2 方法与结果 将 16 只 SD 大鼠随机分为实验组和对照组，每组 8
2.1 色谱与质谱条件 只，雌雄各半。参考文献[9－10]方法，实验组大鼠灌胃
2.1.1 色谱条件 以 Agilent Zorbax SB-Aq（150 mm× 20 mg/mL 的混合抗生素混悬液（100 mg/kg），早晚各 1
4.6 mm，5 μm）为色谱柱，以 0.2％甲酸水溶液（含 8 次，连续 6 d，构建伪无菌大鼠模型；对照组大鼠灌胃等
mmol/L 乙酸铵）为流动相 A、以甲醇为流动相 B 进行梯 体积生理盐水，早晚各 1 次，连续 6 d。建模后，实验组
度洗脱（0～0.6 min，40％B；0.6～4.0 min，90％B；4.0～ （经1 d的清洗期后）和对照组大鼠均禁食不禁水12 h，单
5.0 min，40％B）；流速为1 mL/min，柱温为30 ℃，进样量 次灌胃30 mg/mL的吡嗪酰胺混悬液（150 mg/kg） [11－12] 。
为10 μL。 2.6 大鼠血浆样品的处理
2.1.2 质谱条件 离子源为电喷雾电离源，离子源温度 取大鼠血浆样品100 μL，加内标溶液10 μL，再加甲
为 500 ℃；碰撞气为氮气，压力为 10 psi；质谱传输接口 醇 300 μL，涡旋 3 min，于 4 ℃下以 13 800×g 离心 10
温度为100 ℃；质谱监测模式为多反应监测（MRM），采 min，取上清液，备测。
集模式为正离子模式；用于定量分析的离子对分别为 2.7 方法学考察
m/z 124.0→79.0（吡嗪酰胺）、m/z 125.1→79.1（吡嗪酸）、 参考2020年版《中国药典》（四部）通则“生物样品定
[13]
m/z 180.0→110.2（内标），去簇电压分别为 55、26、85 V， 量分析方法验证指导原则” 进行方法学考察。
碰撞电压分别为24、23、28 V。 2.7.1 选择性 取大鼠空白血浆（不加内标）、大鼠空白
2.2 校正混合对照品溶液与质控混合对照品溶液的 血浆+混合对照品溶液（定量下限质量浓度）、大鼠灌胃
制备 给药后1.5 h的血浆样品，按“2.6”项下方法处理后，再按
精密称取吡嗪酰胺、吡嗪酸对照品各适量，分别用 “2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，记录色谱图，详见
80％甲醇溶解并稀释，制成质量浓度均为1 mg/mL的校 图 2。结果，吡嗪酰胺、吡嗪酸、内标的保留时间分别为
正对照品储备液，于 4 ℃下保存，备用。精密量取上述 2.94、1.90、3.27 min，且大鼠血浆内源性杂质对上述成分
校正对照品储备液适量，用 80％甲醇稀释，制成质量浓 的测定无干扰。
度分别为100、80、40、20、10、4、2、1、0.5 μg/mL的吡嗪酰 2.7.2 残留 取大鼠空白血浆+高质量浓度的校正混合
胺校正对照品系列溶液和250、200、160、100、40、20、10、 对照品溶液、大鼠空白血浆（不加内标）适量，分别按
4、2 μg/mL的吡嗪酸校正对照品系列溶液。同法制备质 “2.6”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件
量浓度分别为80、40、1、0.5 μg/mL的吡嗪酰胺质控对照 依次进样测定。结果，大鼠空白血浆中未见吡嗪酰胺、
品系列溶液和200、160、4、2 μg/mL的吡嗪酸质控对照品 吡嗪酸、内标残留，表明进样高质量浓度样品后，不会影
系列溶液。精密量取对应浓度的吡嗪酰胺和吡嗪酸校 响后续样品的分析。
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