Page 40 - 《中国药房》2021年第4期

白术乙醇提取物对秀丽隐杆线虫寿命的影响及其机制研究 Δ

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赵建平 1，2＊ ，吴丽敏 ，鲁晓娜 ，王 辉 ，王 潘 ，张振强 ，徐江雁 ，谢治深 （1.河南中医药大学中医药科学
1，2
院，郑州 450046；2.河南中医药大学药学院，郑州 450046）
中图分类号 R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）04-0418-07
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.04.06
摘 要 目的：研究白术乙醇提取物（AM）对秀丽隐杆线虫（简称“N2线虫”）寿命的影响，并基于转录因子SKN-1/核因子E2相关
因子2（Nrf2）信号通路探讨其作用机制。方法：将N2线虫分为空白对照组、阳性对照组（100 μmol/L姜黄素，下同）和AM低、中、
高剂量组（100、200、300 μg/mL，下同），考察正常、氧化应激（40 mmol/L H2O2 ）条件下AM对N2线虫寿命的影响（以平均存活时间
计）以及正常条件下AM对N2线虫繁殖能力的影响（以子代数量计）。用700 μmol/L H2O2建立小鼠神经瘤母细胞N2a氧化应激模
型，采用MTT法考察阳性对照和AM低、中、高剂量对模型细胞存活率的影响。人胚胎肾上皮细胞293T转染Nrf2-抗氧化反应元
件（ARE）质粒后，采用荧光素酶报告基因法考察阳性对照和 AM 低、中、高剂量作用 24 h 以及 AM 中剂量作用 12、18、24 h 对
Nrf2-ARE荧光素酶活性的影响。采用实时定量聚合酶链式反应法考察阳性对照和AM低、中、高剂量对N2a细胞中Nrf2下游抗
氧化基因 NQO-1、HO-1 mRNA 表达以及对 N2 线虫中 SKN-1 下游抗氧化基因 GCS-1、GST-7、GST-10、HSP-60、HSP-16.2、SOD-3
mRNA表达的影响。结果：与空白对照组比较，阳性对照组和AM各剂量组N2线虫在正常、氧化应激下的平均存活时间均显著延
长，第 1 天子代数量（除 AM 高剂量组外）、第 2 天子代数量（除 AM 低剂量组外）和总子代数量（除 AM 低剂量组外）均显著增加
（P＜0.05或P＜0.01）。阳性对照组和AM中、高剂量组N2a细胞存活率显著高于模型组（P＜0.05或P＜0.01）。与空白对照组比
较，阳性对照组和AM各剂量组293T细胞中Nrf2-ARE荧光素酶相对活性以及AM中剂量组293T细胞培养不同时间的Nrf2-ARE
荧光素酶相对活性均显著增强（P＜0.01），并有剂量依赖性和时间依赖性趋势。与空白对照组比较，阳性对照组和AM各剂量组
N2a 细胞/线虫中 HO-1、NQO-1（除阳性对照组外）、GCS-1（除 AM 低剂量组外）、GST-7（除阳性对照组和 AM 低剂量组外）、
GST-10、HSP-60（除 AM 低剂量组外）、HSP-16.2（除阳性对照组和 AM 低剂量组外）、SOD-3（除阳性对照组和 AM 低剂量组外）
mRNA的相对表达量均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）。结论：AM可延长N2线虫在正常和氧化应激状态下的寿命，并可提高线
虫的繁殖能力，其作用机制可能与激活SKN-1/Nrf2信号通路有关。
关键词 白术；乙醇提取物；秀丽隐杆线虫；寿命；氧化应激；核因子E2相关因子2；SKN-1

Study on the Effects of Atractylodes macrocephala Ethanol Extract on Life Span of Caenorhabditis elegans
and Its Mechanism
ZHAO Jianping ，WU Limin ，LU Xiaona ，WANG Hui ，WANG Pan ，ZHANG Zhenqiang ，XU Jiangyan ，
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1，2
1，2
1，2
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1
XIE Zhishen（1. Academy of Chinese Medicine Sciences，Henan University of TCM，Zhengzhou 450046，China；
1
2. Pharmacy College，Henan University of TCM，Zhengzhou 450046，China）
ABSTRACT OBJECTIVE： To study the effects of Atractylodes macrocephala ethanol extract （AM） on life span of
Caenorhabditis elegans（called N2 nematode for short），and to investigate its mechanism based on transcription factor SKN-1/
nuclear factor E2 related factor 2（Nrf2）. METHODS：N2 nematode were divided into blank control group，positive control group
（100 μ mol/L curcumin，similarly hereinafter），AM low-dose，medium-dose and high-dose groups （100，200，300 μ g/mL，
similarly hereinafter）. The effects of AM on the life span（by average survival time）of N2 nematode under normal condition and
oxidant stress condition（40 mmol/L H2O2 ）as well as its effects on reproductive capability （by the number of filial generation）of
N2 nematode under normal condition were investigated. 700 μmol/L H2O2 was used to establish neuroblastoma cells N2a oxidant
stress model. Effects of positive control，low-dose，medium-dose and high-dose of AM on the survival rate of model cells were
detected by MTT method. After human embryonic renal
Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.82004019）；中国博
epithelial cells 293T were transfected with Nrf2-ARE plasmid，
士后科学基金资助项目（No.2018M642761）；河南省中医药科学研究
the effects of positive control and AM on luciferase activity of
专项课题（No.2018ZYZD12）；河南省科技发展计划（No.202102310183，
Nrf2-ARE were detected by luciferase reporter gene method at
No.202102310173）；河 南 省 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 项 目（No.
low，medium and high dose for 24 h and at medium dose for
S202010471046）
12，18 and 24 h. RT-PCR was used to detect the effects of
＊硕士研究生。研究方向：中药药效物质基础及作用机制。电
话：0371-65680206。E-mail：zhaojp026@163.com positive control， low-dose， medium-dose and high-dose of
# 通信作者：副教授，硕士生导师，博士。研究方向：中药药效物 AM on the mRNA expression of downstream genes NQO-1
质 基 础 及 作 用 机 制 。 电 话 ：0371-65680206。 E-mail：xiezhish- and HO-1 of Nrf2 in N2a cells as well as mRNA expression of
en@hactcm.edu.cn downstream genes GCS-1，GST-7，GST-10，HSP-60，HSP-

·418 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 4 中国药房 2021年第32卷第4期