Page 37 - 《中国药房》2021年第4期

10 μL，分别加至大鼠空白血浆 90 μL 中，混匀，按“2.6”
200 项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样测
100
0 定。每质量浓度样品平行制备6份，考察批内准确度和
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
精密度；连续3 d测定3个分析批，考察批间准确度和精
cps 400
600
intensity， 200 密度，结果见表1。
0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6 表1 吡嗪酰胺和吡嗪酸的准确度与精密度试验结果
Tab 1 Results of accuracy and precision tests of pyra-
60
40 zinamide and pyrazinoic acid
20
0 批内（n＝6） 批间（n＝3）
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6 理论质量浓
t，min 分析物 度，ng/mL 实测质量浓度 准确度， 精密度 实测质量浓度 准确度， 精密度
A.大鼠空白血浆 （x±s），ng/mL ％ RSD，％ （x±s），ng/mL ％ RSD，％
1 500 吡嗪酰胺 25.00 24.07±0.98 96.37 4.05 25.12±2.12 100.50 8.42
1 000 50.00 50.02±1.13 99.92 2.26 50.09±1.32 100.08 2.64
500
0 2 000.00 1 988.33±30.61 99.38 1.54 1 915.00±117.13 95.74 6.12
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6 4 000.00 3 723.33±77.63 93.05 2.09 3 778.33±215.22 94.50 5.70
intensity， 4 000 200.00 193.50±8.69 96.65 4.49 194.11±11.67 96.99 6.01
cps 吡嗪酸 100.00 100.35±3.53 100.35 3.52 98.47±7.45 98.47 7.57
2 000
0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6 8 000.00 7 436.67±131.55 92.93 1.77 7 743.33±273.45 96.78 3.53
10 000.00 9 593.33±327.82 95.93 3.42 9 850.56±367.59 98.51 3.73
3.0×10 4
2.0×10 4 2.7.5 稀释可靠性 分别取吡嗪酰胺、吡嗪酸的校正对
1.0×10 4
0 照品储备液各适量，用大鼠空白血浆稀释，制成质量浓
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
t，min 度为 40 μg/mL 的吡嗪酰胺血浆模拟样品和 100 μg/mL
B.大鼠空白血浆+混合对照品溶液+内标
的吡嗪酸血浆模拟样品，再用大鼠空白血浆稀释10倍和
1.0×10 5
50倍后，按“2.6”项下方法处理，再按“2.1”项下色谱与质
5.0×10 4
谱条件进样测定。每稀释倍数平行制备6份。将所测峰
0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
面积代入回归方程计算含量，并乘以相应的稀释倍数计
cps 2.0×10 5 算得到其实测质量浓度，与对应理论质量浓度的模拟血
intensity， 1.0×10 5 浆样品比较计算准确度[用相对误差（RE）表示]和精密
0
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
度（用RSD表示）。结果，大鼠血浆中吡嗪酰胺和吡嗪酸
3.0×10 4
2.0×10 4 稀释 10 倍后，所得 RE 分别为－9.05％、－5.95％，RSD
1.0×10 4
0 分别为3.21％、4.87％（n＝6）；大鼠血浆中吡嗪酰胺和吡
0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0 3.4 3.8 4.2 4.6
t，min 嗪酸稀释 50 倍后，所得 RE 分别为－8.65％、－8.67％，
C.血浆样品+内标
图2 吡嗪酰胺、吡嗪酸和内标的MRM色谱图 RSD 分别为 3.95％、4.31％（n＝6）。这表明大鼠血浆样
品经 10 倍甚至 50 倍稀释后，其中的吡嗪酰胺和吡嗪酸
Fig 2 MRM chromatograms of pyrazinamide，pyrazi-
仍可用所建方法准确测定。
noic acid and internal standard
2.7.6 基质效应 取 6 份不同来源的大鼠空白血浆各
2.7.3 标准曲线与定量下限 取“2.2”项下校正混合对
90 μL，除不加内标外，其余均按“2.6”项下方法处理后，
照品系列溶液各 10 μL，分别加至大鼠空白血浆 90 μL
再分别加入内标溶液10 μL和“2.2”项下高、低质控混合
中，混匀，按“2.6”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱
对照品溶液 10 μL 制备高、低质量浓度的血浆样品，按
与质谱条件进样测定，记录峰面积。以吡嗪酰胺或吡嗪
“2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，记录峰面积（A1 ）；
酸的质量浓度（x，ng/mL）为横坐标、以吡嗪酰胺或吡嗪
另按“2.2”项下方法制备对应高、低质量浓度的吡嗪酰
酸与内标的峰面积比值（y）为纵坐标，采用最小二乘法 胺、吡嗪酸、内标对照品溶液，直接进样测定，记录峰面
（权重系数为 1/x）进行线性回归分析。结果，大鼠血浆 积（A2 ）。以 A1/A2×100％计算吡嗪酰胺、吡嗪酸、内标的
2
中吡嗪酰胺的检测质量浓度在 25～5 000 ng/mL 范围 基质因子，再用吡嗪酰胺和吡嗪酸的基质因子除以内标
内，得回归方程y＝0.000 346x+0.003 13（r＝0.997 6）；吡 基质因子，计算内标归一化基质因子，结果见表2。
嗪酸的检测质量浓度在 100～12 500 ng/mL 范围内，得 2.7.7 稳定性 取“2.2”项下高、低质量浓度的质控混合
回归方程y＝0.004 9x+0.051 9（r＝0.999 0）；吡嗪酰胺的 对照品溶液各 10 μL，分别加至大鼠空白血浆 90 μL 中，
定量下限为25 ng/mL，吡嗪酸的定量下限为100 ng/mL。 混匀，分别在室温放置 4 h、冻融（－20℃～室温）3
2.7.4 准确度与精密度 取“2.2”项下吡嗪酰胺和吡嗪 次、－40 ℃冻存30 d等条件下储存后，立即按“2.6”项下
酸的定量下限和低、中、高质量浓度的混合对照品溶液 方法处理，再按“2.1”项下色谱与质谱条件进样测定，记

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