Page 49 - 《中国药房》2021年3期

表6 5种单糖成分的加样回收率试验结果（n＝6） 3 讨论
Tab 6 Results of recovery rate of 5 kinds of monosac- 3.1 色谱条件的优化
charides（n＝6） 在单糖成分的分析过程中，笔者先考察了在 230、
待测成分 样品中含量，μg 加入量，μg 测得量，μg 加样回收率，％ 平均加样回收率，％ RSD，％ 240、250、260 nm这4个检测波长下的检测效果，发现在
无水葡萄糖 54.36 52.40 104.36 95.42 97.57 2.66
55.63 52.40 106.52 97.12 250 nm波长下所得色谱图的峰形尖锐，检测效果较在其
55.23 52.40 105.03 95.04 他 3 个波长下更好，因此本研究选择 250 nm 为检测波
53.60 52.40 106.05 100.10 长。此外，笔者分别考察了10、20 μL进样量对峰形的影
54.37 52.40 107.50 101.39
53.80 52.40 104.30 96.37 响，发现进样量为20 μL时的色谱图峰形更好，故本研究
甘露糖 43.21 40.20 84.45 102.59 98.81 2.60 以 20 μL 为进样量。笔者进一步考察了甲醇-水、乙腈-
42.66 40.20 81.22 95.92 水、乙腈-0.1 mol/L 磷酸盐溶液、乙腈-0.01 mol/L 乙酸铵
45.35 40.20 84.46 97.29
41.28 40.20 80.28 97.01 溶液、乙腈-0.02 mol/L乙酸铵溶液等流动相体系对检测
44.20 40.20 84.80 101.00 效果的影响，发现水相为磷酸缓冲盐溶液时所需浓度较
43.52 40.20 83.33 99.03 大，容易发生色谱柱堵塞，不利于仪器的使用及保护，因
鼠李糖 47.60 45.10 90.21 94.48 96.52 2.60
45.83 45.10 89.75 97.38 此采用乙酸铵溶液作为流动相的水相，并进一步确定
45.20 45.10 90.33 100.07 0.02 mol/L为水相乙酸铵溶液的浓度。
46.35 45.10 90.08 96.96 3.2 混合对照品溶液制备方法的选择
43.68 45.10 87.58 97.34
43.54 45.10 85.43 92.88 本研究前期考察了2种方法制备的混合对照品溶液
半乳糖醛酸 32.66 34.68 65.68 95.21 97.04 2.12 的衍生化效果：第一种是先将各单糖对照品溶液混合，
35.68 34.68 69.45 97.38 制成混合对照品溶液后，再进行 PMP 衍生化处理；第二
33.98 34.68 66.54 93.89
31.24 34.68 65.60 99.08 种是先将各单糖对照品溶液分别进行 PMP 衍生化处理
33.55 34.68 67.59 98.15 制成单糖对照品衍生液后再进行混合。结果发现，采用
34.30 34.68 68.48 98.56
阿拉伯糖 36.88 37.50 75.28 102.40 99.15 2.90 第一种方法制备的混合对照品衍生液的HPLC色谱图峰
37.52 37.50 74.91 99.71 形不对称，且部分峰无法分离，笔者推测这可能是混合
37.50 37.50 73.25 95.33 后的单糖溶液在加热衍生过程中各单糖间又发生了反
36.85 37.50 74.00 99.07
37.55 37.50 73.69 96.37 应。而本研究最终采用的第二种方法是先制备各单糖
35.31 37.50 73.57 102.03 衍生液后再混合，可避免受热后各单糖间发生反应，故
进样后所得色谱图中各成分的峰形对称且分离度良好。
含量为 3.31～7.66 mg/g、鼠李糖的含量为 38.80～73.97
3.3 多糖样品的预处理及指纹图谱的分析
mg/g、半乳糖醛酸的含量为 2.49～8.95 mg/g、阿拉伯糖
指纹图谱分析目前主要用于中药的小分子成分，对
的含量为11.30～28.58 mg/g，表明不同批次怀牛膝多糖
分子量较大、结构复杂、无紫外吸收的多糖类物质不适
的单糖含量存在一定差异，详见表7。
[16]
用 。因此，为了提高多糖在HPLC检测中的灵敏度，多
表7 10批怀牛膝多糖中5种单糖的含量测定结果（n＝
将多糖水解后再以发光试剂衍生化处理后，再使用
3，mg/g）
HPLC法进行分离和检测 [17－21] 。本研究采用PMP为衍生
Tab 7 Results of content determination of 5 kinds of
试剂的原理是 PMP 在碱性条件下可以与单糖定量缩合
monosaccharide in 10 batches of A. bidentata
成PMP-单糖衍生物，该物质相对稳定，在250 nm波长处
polysaccharide（n＝3，mg/g）
具有强光吸收 [22－25] 。通过分析化合物中多糖的主要单
样品编号 无水葡萄糖 甘露糖 鼠李糖 半乳糖醛酸 阿拉伯糖
S1 6.17 3.31 56.43 2.49 11.30 糖组成和相对含量，可以识别不同来源多糖；通过测定
S2 13.28 5.86 41.85 8.00 20.76 多糖中主要单糖成分的绝对含量，可整体上评估不同批
S3 11.71 4.68 38.80 7.47 14.36 次药材的质量 [26－27] 。
S4 16.69 7.66 67.74 8.95 22.19
S5 11.24 5.27 73.97 6.47 15.10 本研究建立了 10 批不同厂家怀牛膝多糖的衍生
S6 14.56 6.59 58.89 7.32 21.49 化-HPLC指纹特征图谱，标定了9个共同峰，并指认出了
S7 11.16 5.79 62.20 6.02 17.11 5个特征峰，初步分析出怀牛膝多糖由无水葡萄糖、甘露
S8 17.55 7.75 64.29 8.47 28.58
S9 11.28 6.16 73.81 7.33 18.86 糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、阿拉伯糖等5种单糖构成，由此
S10 11.53 5.89 65.49 7.55 18.40 进一步明确了牛膝多糖中单糖的分布规律，为其多糖结

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