Page 48 - 《中国药房》2021年3期
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600                                                     表5 5种单糖成分的线性关系考察结果
           560
           520                                              Tab 5 Linear relationship of 5 kinds of monosaccha-
           480
           440
           400                                                     rides
           360
         mV  320
         U，  280                                            待测成分            回归方程          r       线性范围，mg/mL
           240                                              无水葡萄糖         y＝122 187x－62 294  0.999 3  0.032～2.005
           200
           160                                              甘露糖           y＝94 958x－43 559  0.999 5  0.031～1.876
           120
            80                                              鼠李糖           y＝71 527x－30 063  0999 5  0.038～2.254
            40
            0                                               半乳糖醛酸         y＝80 765x－71 585  0.999 0  0.030～1.856
              0   5  10  15  20  25  30  35  40  45  50  55  60  阿拉伯糖     y＝95 586x－53 894  0.999 2  0.026～1.652
                                  t，min
                                                            2.7.2  精密度试验      取“2.2.1”项下的单糖对照品溶液
           图3 怀牛膝多糖的衍生化-HPLC对照指纹图谱R
                                                            各 0.3 mL，按“2.3”项下方法衍生化处理后，分别取各单
        Fig 3 Derivatization-HPLC reference fingerprint R
                                                            糖衍生液 0.2 mL 于同一 10 mL 离心管中，充分混匀，制
               of A. bidentata polysaccharide
                                                            得混合对照品溶液，然后按“2.4”色谱条件进样测定，连
        2.6 聚类分析
                                                            续测定6次，记录峰面积。结果，无水葡萄糖、甘露糖、鼠
            将 10 批怀牛膝多糖衍生化-HPLC 图谱中 9 个共有
                                                            李糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖峰面积的 RSD 分别为
        峰的峰面积分别导入 SPSS 25.0 软件中，采用组间连接
                                                            1.59％、2.78％、2.35％、2.44％、1.98％（n＝6），表明仪器
        方法，以平方欧氏距离作为测量间隔进行系统聚类分
                                                            精密度良好。
        析。结果显示，当平方欧氏距离为 5 时，10 批怀牛膝多
                                                            2.7.3  稳定性试验       取 100 mg 怀牛膝多糖（样品编号
        糖被聚为 3 类：编号为 S1 的样品单独为一类，相似度为
                                                            S6），分别按“2.2.2”“2.3”项下方法水解并衍生化处理后，
        0.955；编号为 S2、S5、S8 和 S9 的样品聚为一类，相似度
                                                            于室温放置 0、2、4、8、12、24 h 时，再按“2.4”项下色谱条
        在 0.968～0.985 之间；编号为 S3、S4、S6、S7 和 S10 的样
                                                            件进样测定，记录峰面积。结果，无水葡萄糖、甘露糖、
        品聚为一类，相似度在0.987～0.994之间。10批怀牛膝
                                                            鼠李糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖峰面积的 RSD 分别为
        多糖样品的聚类分析树状图见图4。
                                                            2.35％、2.91％、1.37％、2.79％、1.39％（n＝6），表明该溶
                             平方欧氏距离                         液在室温下放置24 h内稳定性良好。
                0     5     10     15    20    25
               S7                                           2.7.4  重复性试验       取 100 mg 怀牛膝多糖（样品编号
              S10
               S6                                           S6），共6份，分别按“2.2.2”“2.3”项下方法水解并衍生化
               S3                                           处理后，再按“2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，
               S4
               S9                                           并根据标准曲线计算各待测成分的含量。结果，无水葡
               S5
               S8                                           萄糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸和阿拉伯糖含量的
               S2                                           RSD 分别为 2.17％、2.75％、1.94％、2.13％、2.86％（n＝
               S1
              图4    10批怀牛膝多糖的聚类分析树状图                        6），表明该方法的重复性良好。
        Fig 4  Cluster analysis tree diagram of 10 batches of  2.7.5  加样回收率试验     取 100 mg 已知含量的怀牛膝
               A. bidentata polysaccharide                  多糖（样品编号S6），共6份，置于不同10 mL离心管中，

        2.7 单糖成分的含量测定                                       分别精密加入与已知含量相近的相应对照品溶液，按
        2.7.1  线性关系考察        取“2.2.1”项下各单糖对照品溶             “2.2.2”“2.3”项下方法水解并衍生化处理后，再按“2.4”
        液各 0.3 mL，分别按“2.3”项下方法进行衍生化处理后，                     项下色谱条件进样测定，记录峰面积，根据标准曲线计
        分别取0.2 mL各单糖衍生液于同一10 mL离心管中，充                       算出各待测成分的含量，并计算其加样回收率。结果，5
        分混匀，即得衍生化处理后的混合对照品溶液。分别吸                            种单糖的平均加样回收率为 96.52％～99.15％，RSD 均
        取该混合对照品溶液 0.5、0.45、0.35、0.25、0.15、0.05、             小于3.0％（n＝6），表明该方法准确度较好，详见表6。
        0.008 mL于不同的1 mL量瓶中，加甲醇定容，即得系列                      2.7.6  样品含量测定        分别取 10 批怀牛膝多糖，各约
        不同质量浓度的溶液，分别按“2.4”项下色谱条件下进样                         100 mg，精密称定，分别按“2.2.2”“2.3”项下方法水解并
        测定，记录峰面积。以各待测成分的峰面积（y）为纵坐                           衍生化处理后，再按“2.4”项下色谱条件进样测定，记录
        标、质量浓度（x，mg/mL）为横坐标绘制标准曲线。结                         峰面积，并根据标准曲线计算5种单糖的含量。每批样
        果，5 种单糖在各自质量浓度范围内的线性关系均良好                           品平行测定 3 份，取平均值。结果，10 批怀牛膝多糖样
        （r均大于0.999 0），结果见表5。                                品中无水葡萄糖的含量为 6.17～17.55 mg/g、甘露糖的


        ·298 ·  China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3                                    中国药房    2021年第32卷第3期
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