Page 54 - 《中国药房》2021年3期

为：95 ℃预变性 5 min；95 ℃变性 10 s，60 ℃退火30 s， 20 μmol/L，芍药苷 25、50、100 μmol/L，芒柄花素 2.5、5、
60 ℃延伸 30 s，共 40 个循环。以 GAPDH 为内参，采用 25 μmol/L，丹酚酸 B 25、50、100 μmol/L，儿茶素 5、50、
2 －ΔΔCt 法 分析JAK2、STAT3、Akt、ERK mRNA的相对表 100 μmol/L，黄芪甲苷2.5、5、25 μmol/L。
[16]
达量。 3.2 脑心通胶囊各药效成分对 JAK/STAT 信号通路相
2.4 脑心通胶囊各药效成分对血管活性物质、黏附分子 关蛋白mRNA表达的影响
及炎性因子表达的影响考察 与空白对照组比较，咖啡酸 50 μmol/L 组细胞中
采用ELISA法进行测定。将HUVEC按3 000个/孔 STAT3，阿魏酸 0.025 μg/mL 组细胞中 JAK2，洋川芎内
接种于96孔板中，待细胞贴壁后，吸弃培养基，备用。将 酯 H 2.5 μmol/L组细胞中JAK2及5 μmol/L组Akt，丁烯
细胞按“2.3”项下方法分组并培养24 h后，收集细胞上清 基苯酞 1 μmol/L 组细胞中 Akt，藁本内酯 0.025 μmol/L
液，然后按照相应试剂盒的说明书方法操作，检测 组细胞中 JAK2，芒柄花素 2.5 μmol/L 组细胞中 ERK，丹
PAI-1、ICAM-1、VEGF、VCAM-1 和 NF-κB p65 的表达 酚酸 B 100 μmol/L 组细胞中 STAT3 的 mRNA 相对表达
水平。 量均显著升高（P＜0.05）；阿魏酸 2.5 μg/mL 组细胞中
2.5 统计学分析 STAT3、Akt、ERK，丁 烯 基 苯 酞 0.1 μ mol/L 组 细 胞 中
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量资 ERK，芒柄花素 25 μmol/L 组细胞中 JAK2，丹酚酸 B 50
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组 μmol/L 组细胞中 JAK2、STAT3，黄芪甲苷 2.5 μmol/L 组
间比较采用t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。 细胞中 Akt 的 mRNA 相对表达量均显著降低（P＜0.05
3 结果 或P＜0.01）。各组细胞中JAK/STAT信号通路相关蛋白
3.1 细胞存活率的测定结果 的mRNA相对表达量测定结果见表4（注：表中0 μg/mL
与空白对照组比较，阿魏酸 6.25、25、50、100、200 均表示空白对照）。
μg/mL组，洋川芎内酯H 6.25、12.5、25、50、100、150、200 3.3 脑心通胶囊各药效成分对细胞中PAI-1、ICAM-1、
μmol/L组，藁本内酯200 μmol/L组，隐丹参酮10、20、40、 VCAM-1、VEGF和NF-κB p65表达水平的影响
80 μmol/L，芍药苷 1.56、6.25、12.5 μmol/L 组，丹酚酸 B 与空白对照组比较，咖啡酸 100 µmol/L 组细胞中
1.56、3.125、6.25、12.5、200 μmol/L 组，儿茶素 25 μmol/L PAI和50、100 µmol/L组ICAM-1以及25、50、100 µmol/L
组细胞存活率均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；咖啡酸 组 VCAM-1，阿魏酸 2.5 µg/mL 组细胞中 PAI 和 0.025、
1.56、12.5 μmol/L 组，藁本内酯 50 μmol/L 组，丹参素钠 0.25、2.5 µg/mL 组 ICAM-1、NF-κB p65，洋川芎内酯 H
6.25 μmol/L 和芒柄花素 1.56、100、200 μmol/L 组细胞存 1.25、2.5 µmol/L 组细胞中 VEGF，丁烯基苯酞 1 µmol/L
活率均显著升高（P＜0.05 或 P＜0.01）。各组细胞存活 组细胞中 PAI 和 0.01、0.1、1 µmol/L 组 ICAM-1、NF-κB
率测定结果见表 3。基于此，选择脑心通胶囊各药效成 p65 以及 0.1、1 µmol/L 组 VEGF、VCAM-1，隐丹参酮 3
分对 HUVEC 增殖无明显抑制作用的 3 个浓度（低、中、 µmol/L组细胞中ICAM-1，芒柄花素25 µmol/L组细胞中
高）进行后续试验，即咖啡酸25、50、100 μmol/L，阿魏酸 VCAM-1 和 5 µmol/L 组 NF-κB p65，丹酚酸 B 25、50、
0.025、0.25、2.5 μg/mL，洋川芎内酯H 1.25、2.5、5 μmol/L， 100 µmol/L 组细胞中 NF-κB p65，儿茶素 100 µmol/L 组
丁烯基苯酞 0.01、0.1、1 μmol/L，藁本内酯 0.025、0.25、 细胞中 VCAM-1，黄芪甲苷 25 µmol/L 组细胞中 NF-κB
2.5 μmol/L，隐丹参酮 0.3、1、3 μmol/L，丹参素钠 5、10、 p65 的表达水平均显著降低（P＜0.05 或 P＜0.01）；咖啡

表3 各组细胞存活率测定结果（x±±s，n＝6，％％）
Tab 3 Survival rate of HUVEC in each group（x±±s，n＝6，％％）
组别 咖啡酸 阿魏酸 洋川芎内酯H 丁烯基苯酞 藁本内酯 隐丹参酮 丹参素钠 芍药苷 芒柄花素 丹酚酸B 儿茶素 黄芪甲苷
对照组 100.00±8.41 100.00±2.76 99.99±1.92 99.99±6.54 100.00±6.23 100.00±17.04 100.00±6.41 100.00±5.80 100.00±3.94 100.00±2.52 100.00±5.90 100.00±5.37
浓度1 109.75±5.87 ＊ 100.44±7.13 99.89±3.18 98.94±5.60 104.20±13.61 116.64±2.75 104.24±1.10 89.48±8.25 ＊ 105.03±3.81 ＊ 95.60±3.82 ＊ 94.75±3.75 92.23±8.44
浓度2 107.97±3.89 101.25±6.56 92.89±2.78 ＊＊ 98.95±3.94 112.76±16.44 116.78±3.67 100.14±3.17 102.11±5.14 103.68±6.21 92.42±1.68 ＊＊ 92.99±7.37 99.32±3.30
浓度3 108.28±4.71 95.59±3.24 ＊ 88.94±5.03 ＊＊ 103.18±2.05 111.51±16.02 108.86±1.93 107.06±2.41 ＊ 90.75±6.31 ＊ 104.30±2.72 92.94±4.39 ＊＊ 98.88±5.02 97.92±4.03
浓度4 122.76±11.27 ＊＊ 95.42±5.03 80.82±13.43 ＊ 100.50±5.74 106.98±9.63 93.34±5.31 98.30±6.65 90.36±7.51 ＊ 102.51±5.39 94.38±3.97 ＊ 94.06±7.21 97.74±3.83
浓度5 99.00±3.96 95.39±3.67 ＊ 89.75±4.69 ＊＊ 97.32±4.26 106.19±9.93 70.75±3.64 ＊＊ 103.34±2.28 91.10±13.00 102.03±4.41 93.68±6.38 91.50±4.50 ＊ 97.08±3.61
浓度6 103.86±3.45 90.68±3.36 ＊＊ 89.65±2.95 ＊＊ 101.30±3.45 110.00±8.79 ＊ 57.23±2.61 ＊＊ 103.25±5.13 90.87±12.38 100.06±2.76 96.01±3.60 94.59±7.05 97.51±2.16
浓度7 104.89±3.04 91.17±3.28 ＊＊ 95.04±2.87 ＊＊ 97.11±5.75 96.49±3.46 39.35±2.14 ＊＊ 97.01±6.37 92.50±10.82 108.64±5.81 ＊ 98.12±3.14 98.50±1.77 97.14±3.69
浓度8 101.28±5.25 90.30±6.46 ＊ 92.93±4.81 ＊ 94.27±9.26 78.62±1.95 ＊＊ 32.44±1.76 ＊＊ 102.87±3.57 98.13±7.70 160.64±18.59 ＊＊ 89.65±8.24 ＊ 103.28±3.15 99.43±2.26
注：与空白对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
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Note：vs. blank control group，P＜0.05， P＜0.01
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·304 · China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3 中国药房 2021年第32卷第3期