Page 47 - 《中国药房》2021年3期

2.5 指纹图谱的建立与分析 1 200
1 100
2.5.1 精密度试验 取 100 mg 怀牛膝多糖（样品编号 1 000
900
S6），按“2.2.2”“2.3”项下方法水解并衍生化处理后，再按 800
“2.4”项下色谱条件进样分析，连续测定 6 次，记录峰面 mV U， 700
600
500
积。以鼠李糖（峰 4，该峰分离度良好且稳定、峰位相对 400
300
居中）为参照峰，计算得各共有峰相对保留时间和相对 200
100
峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6），表明该方法精度 0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
良好。 t，min
2.5.2 重复性试验 取 100 mg 怀牛膝多糖（样品编号 图 2 10 批怀牛膝多糖的衍生化-HPLC 叠加指纹图谱
S6），共6份，分别按“2.2.2”“2.3”项下方法水解并衍生化 和对照指纹图谱R
处理后，再按“2.4”项下色谱条件进样测定，记录峰面 Fig 2 Derivatization-HPLC superimposed fingerprint
积。以鼠李糖（峰 4）为参照峰，计算得各共有峰相对保 of 10 batches of polysaccharide from A. bidenta-
留时间和相对峰面积的 RSD 均小于 3.0％（n＝6），表明 ta and reference fingerprint R
该方法重复性较好。 表2 10批怀牛膝多糖样品的相似度评价结果
2.5.3 稳定性试验 取 100 mg 怀牛膝多糖（样品编号 Tab 2 Similarity evaluation results of 10 batches of A.
S6），分别按“2.2.2”“2.3”项下方法水解并衍生化处理后， bidentata polysaccharide
分别于室温放置0、2、4、8、12、24 h 时，按“2.4”项下色谱 样品编号 相似度 编号 相似度
条件进样测定，记录峰面积。以鼠李糖（峰4）为参照峰， S1 0.955 S6 0.993
计算得各共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均 S2 0.968 S7 0.987
S3 0.987 S8 0.985
小于 3.0％（n＝6），表明该溶液在室温下放置 24 h 内 S4 0.994 S9 0.984
稳定。 S5 0.982 S10 0.994
2.5.4 指纹图谱的建立及样品相似度评价 分别称取 表3 10批怀牛膝多糖样品中共有峰的相对保留时间测
10 批怀牛膝多糖适量（样品编号 S1～S10），按“2.2.2” 定结果
“2.3”项下方法水解并衍生化处理后，再按“2.4”项下色 Tab 3 Relative retention time of common peaks in 10
谱条件进样测定，记录色谱图。利用《中药指纹图谱相 batches of A. bidentata polysaccharide
似度系统评价软件》（2012A 版）对 S1～S10 多糖样品的 峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD，％
HPLC指纹图谱进行分析，选择编号为S1的多糖样品的 峰1 0.71 0.74 0.74 0.77 0.75 0.74 0.75 0.74 0.75 0.75 1.97
峰2 0.90 0.87 0.87 0.90 0.87 0.87 0.87 0.87 0.87 0.87 1.33
图谱作为参照图谱（各峰稳定且分离度较好），将时间宽
峰3 0.92 0.90 0.90 0.93 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 0.90 1.24
度设置为 0.1 min、间距设置为 50，通过多点校准法生成 峰4 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0
10批多糖样品的叠加指纹图谱，并使用中值法生成对照 峰5 1.09 1.11 1.10 1.15 1.11 1.11 1.11 1.12 1.11 1.11 1.31
峰6 1.13 1.17 1.15 1.20 1.16 1.16 1.16 1.17 1.16 1.16 1.47
指纹图谱（R）。以对照指纹图谱R为参照，对10批样品
峰7 1.16 1.21 1.19 1.23 1.20 1.20 1.19 1.20 1.19 1.19 1.56
的相似度进行整体评价。结果，10 批样品的相似度为 峰8 1.23 1.29 1.27 1.31 1.27 1.27 1.27 1.28 1.27 1.27 1.67
0.955～0.994；共得到了 9 个共有峰，以峰 4 为参照峰计 峰9 1.29 1.36 1.34 1.39 1.35 1.35 1.37 1.39 1.35 1.36 2.09
算得各共有峰相对保留时间的 RSD 为 0～2.09％（n＝ 表4 10批怀牛膝多糖样品中共有峰的相对峰面积测定
10）、相对峰面积的RSD为0～59.48％（n＝10）。该结果 结果
提示，10 批怀牛膝多糖样品的共有成分相似，但含量存 Tab 4 Relative peak area of common peaks in 10
在差异。10 批怀牛膝多糖的衍生化-HPLC 叠加指纹图 batches of A. bidentata polysaccharide
谱和对照指纹图谱见图 2，相似度评价结果见表 2，各共 峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD，％
有峰的相对保留时间、相对峰面积测定结果分别见表3、 峰1 0.19 0.54 0.51 0.42 0.26 0.42 0.31 0.46 0.26 0.30 32.87
峰2 0.06 0.12 0.12 0.09 0.05 0.10 0.10 0.10 0.08 0.08 26.75
表4。
峰3 0.08 0.20 0.17 0.16 0.10 0.16 0.13 0.17 0.12 0.13 25.13
2.5.5 色谱峰的指认 通过将对指纹图谱R（见图3）与 峰4 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0
混合对照溶液衍生化-HPLC图谱（见图1A）的色谱峰进 峰5 0.09 0.41 0.41 0.28 0.19 0.27 0.21 0.28 0.21 0.25 37.21
峰6 0.23 0.73 0.64 0.67 0.35 0.56 0.45 0.63 0.40 0.44 31.35
行比对，指认了其中5个共有色谱峰，分别为无水葡萄糖
峰7 0.44 1.09 0.81 0.72 0.45 0.80 0.60 0.97 0.56 0.61 30.46
（峰 1）、甘露糖（峰 2）、鼠李糖（峰 4）、半乳糖醛酸（峰 5） 峰8 0.08 0.32 0.25 0.20 0.09 0.24 0.07 0.24 0.05 0.09 59.48
和阿拉伯糖（峰7）。 峰9 0.30 1.04 0.72 0.59 0.37 0.71 0.31 0.80 0.30 0.38 46.56

中国药房 2021年第32卷第3期 China Pharmacy 2021 Vol. 32 No. 3 ·297 ·