Page 36 - 《中国药房》2021年2期

·药学研究·

化风丹药母指纹图谱的建立及不同发酵时间样品中 7 种核苷类

成分的含量测定 Δ

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曹国琼 ，游珊丽，徐 剑，张永萍（贵州中医药大学药学院，贵阳 550025）
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中图分类号 R283.1；R917 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2021）02-0158-06
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.02.06

摘 要 目的：建立化风丹药母的指纹图谱，并测定不同发酵时间样品中 7 种核苷类成分的含量。方法：采用高效液相色谱法
（HPLC），色谱柱为Pntulips BP-C18，流动相为甲醇-水（梯度洗脱），流速为0.8 mL/min，检测波长为260 nm，柱温为35 ℃，进样量为
10 μL。以黄嘌呤为参照，绘制12批化风丹药母的HPLC指纹图谱；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）》进行相似
度评价，确定共有峰；同法测定不同发酵时间（0、1、2、3、4周）样品中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟苷、胸苷的含量。结
果：12 批化风丹药母共有 8 个共有峰，相似度为 0.712～0.954；指认了 7 种成分，分别为尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、肌苷、鸟
苷、胸苷。不同发酵时间样品中上述 7 种成分检测质量浓度的线性范围分别为 0.87～8.7 μg/mL（r＝0.999 6）、1.51～15.1 μg/mL
（r＝0.999 7）、6.08～60.8 μg/mL（r＝0.999 5）、1.52～15.2 μg/mL（r＝0.999 6）、1.82～18.2 μg/mL（r＝0.999 6）、1.48～14.8 μg/mL
（r＝0.999 6）、1.63～16.3 μg/mL（r＝0.999 3）；定量限分别为 0.027 4、0.076 3、0.250 4、0.172 3、0.101 1、0.078 3、0.084 2 μg/mL，检测
限分别为0.008 7、0.025 5、0.007 9、0.084 1、0.035 7、0.026 9、0.027 5 μg/mL；精密度、重复性、稳定性（12 h）试验的RSD均小于3％；
加样回收率分别为 94.16％～100.16％（RSD＝2.24％，n＝6），93.87％～100.65％（RSD＝2.67％，n＝6），93.52％～99.66％（RSD＝
2.30％，n＝6），93.67％～98.24％（RSD＝1.89％，n＝6），96.00％～102.18％（RSD＝1.96％，n＝6），94.62％～101.54％（RSD＝
2.82％，n＝6），97.72％～104.56％（RSD＝2.97％，n＝6）。发酵 0～4 周时，上述 7 种成分及总核苷的含量分别为 0.042～0.232、
0.027～0.181、0.039～0.651、0.026～0.225、0.034～0.111、0.009～0.124、0.079～0.099 、0.647～1.292 mg/g；发酵 1～4 周时的尿嘧
啶、次黄嘌呤、黄嘌呤及总核苷的含量均较发酵0周时显著升高，而尿苷、肌苷、鸟苷的含量较发酵0周时显著降低。结论：所建指
纹图谱特征性强且操作简便，可用于化风丹药母的质量控制；含量测定方法准确、可靠，可用于同时测定其中7种核苷类有效成分
的含量；化风丹药母中的核苷类成分含量受发酵时间的影响。
关键词 化风丹药母；高效液相色谱法；指纹图谱；核苷类成分；含量测定

Establishment of HPLC Fingerprint of Huafengdan Yaomu and Content Determination of 7 Nucleosides in
Samples of Different Fermentation Time
CAO Guoqiong，YOU Shanli，XU Jian，ZHANG Yongping（College of Pharmacy，Guizhou University of TCM，
Guiyang 550025，China）

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish fingerprint of Huafengdan yaomu，and to determine the contents of 7 nucleosides in
samples of different fermentation time. METHODS：HPLC method was adopted. The determination was performed on Pntulips
BP-C18 column with mobile phase consisted of methanol-water（gradient elution）at the flow rate of 0.8 mL/min. The detection
wavelength was set at 260 nm，and column temperature was 35 ℃. The sample size was 10 μL. Using xanthine as reference，
HPLC fingerprint of 12 batches of Huafengdan yaomu was drawn. The similarity of samples were evaluated with Similarity
Evaluation System of TCM Chromatographic Fingerprints（2012 edition）. Common peaks were confirmed. The contents of uracil，
hypoxanthine，xanthine，uridine，inosine，guanosine and thymidine were determined in samples of different fermentation time（0，
1，2，3，4 weeks）by the same method. RESULTS：There were 8 common peaks in 12 batches of Huafengdan yaomu，with
similarities ranging from 0.712 to 0.954；7 components were identified，namely uracil，hypoxanthine，xanthine，uridine，inosine，
guanosine and thymidine. The linear ranges of mass
Δ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.81860704）；贵州省
科技计划项目（No.黔科合基础〔2019〕1025 号）；贵州省药物新剂型新 concentrations of above 7 components in samples at different
工艺科技创新人才团队项目（No.黔科合平台人才〔2017〕5655）；贵州 fermentation time were 0.87-8.7 μ g/mL （r＝0.999 6），
省高层次创新型人才“百层次”人才项目（No.黔科合人才〔2015〕4030 1.51-15.1 μg/mL（r＝0.999 7），6.08-60.8 μg/mL（r＝0.999 5），
号）
1.52-15.2 μg/mL（r＝0.999 6），1.82-18.2 μg/mL（r＝0.999 6），
＊副教授，博士。研究方向：中药药效物质基础及作用机制。
1.48-14.8 μg/mL（r＝0.999 6），1.63-16.3 μg/mL（r＝0.999 3）.
E-mail：cgqxch1986@126.com
The limits of quantification were 0.027 4，0.076 3，0.250 4，
# 通信作者：教授，博士生导师，硕士。研究方向：中药新制剂、新
剂型。E-mail：zgygpg@126.com 0.172 3，0.101 1，0.078 3，and 0.084 2 μ g/mL，and the

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